该协议使用高频超声检查来评估小鼠膀胱和下尿道的变化。该技术允许对体内尿路进行纵向检查,用于解剖和生理测量,并与其他测量尿流量的技术相辅相成。评估体内无效变化的能力,即回顾人类泌尿疾病的各个方面的啮齿动物模型的变化,可以提供对疾病进展和治疗效果的洞察。
首先将中心频率为 30 兆赫的探头连接到超声波系统的活动端口,并预设置腹部成像应用。为了获得最佳的对比度增强,在涡流混合器中摇动适当的对比剂 45 秒,以封装溶液中的微泡。在确认对手趾捏没有反应后,将一只麻醉的24周大的C57黑色6雄性小鼠放在加热平台上的upine位置,然后剃掉腹部的头发。
用脱毛霜去除剩余的头发,将超声波探针与膀胱的长轴平行放置。然后使用XY操纵器移动鼠标,获取膀胱的长轴和短轴图像。在成像之前,通过皮肤和腹部壁进行中线切口,以暴露膀胱,并预填充一块柔性聚乙烯管与盐水。
然后将装有 27 量针的注射器连接到管子,并将针头插入膀胱。要确认针头的正确放置,请向膀胱中注入10微升盐水。用含有涡流对比剂的注射器更换盐水注射器,并收集导管膀胱的另一个 B 模式图像。
为了便于测量尿道直径,在三秒钟内向膀胱中注入0.5毫升的微泡,直到排尿事件发生。为了便于测量速度,请纠正多普勒样品窗口角度,直到它与尿液流平行,并向膀胱中注入第二个微泡。然后收集全膀胱的 3D 图像。
获得所有图像后,将外侧追溯到膀胱壁的内边缘,并使用线性距离测量工具测量膀胱。使用体积工具跟踪膀胱壁内部以创建轮廓。然后,可以通过膀胱的厚度生成多个轮廓,以计算 3D 采集模式下膀胱的体积。
对于第一个 void 事件,使用线性距离工具测量多普勒速度采样窗口点边缘的尿道直径边缘。对于第一个 void 事件,使用速度时间积分工具测量尿道速度。在这里,显示了没有对比剂获得的小鼠膀胱的代表性超声波图像。
膀胱壁是回波的,膀胱壁厚度可以使用软件测量包进行测量。膀胱大小和形状可以呈现在3D,以确定膀胱体积。在这里,显示了一个微泡填充回声膀胱的代表性图像。
低频超声波破裂后,气泡被破坏,膀胱在气泡改变确认结构为膀胱之前变得瞬时回波。在排尿过程中,尿道流明的直径可以在排尿过程中随尿液流经尿道区域的流速一起获得。使用对比度成像,可以在尿道的整个可见长度进行直径测量。
通过这些测量,可以进一步计算,以评估尿流量和膀胱的合规性。正确激活对比代理对于该协议的成功至关重要。我们可以用MRI和微算断层扫描重建啮齿动物尿道,以确认超声流测量,并引入新的复杂模型的尿道动力学和3D重建。
我们已经开始使用这种技术定量检查下尿道疾病的模型,老化的影响,以及治疗对泌尿功能的疗效。