该协议是重要的,因为它提供了第一个模型的炎症敏感过早脑损伤的雪铁龙,导致严重和持续的伤害。这种技术涉及长期侮辱,其中纳入许多触发因素和生化机制,被认为有助于在早产儿看到的脑损伤类型。展示大脑测量程序的将是凯莉·科里,一个研究科学家在我们的实验室和奥利维亚·怀特,一个本科生。
手术开始前30分钟,施用每公斤LPS IP3毫克,以在损伤组中安装成试剂盒,并施用相当于每克三微升的无菌盐水,以控制动物。在开始手术之前,使用小动物剪子去除长方形图案雪铁龙腹颈区域的所有毛发,注意避免剥皮或产生热疹。对剃光区域进行局部麻醉,用三个交替的拭子对皮肤进行碘和七十分之七十乙醇的消毒。
在通过头趾捏确认适当的水平的电合后,用暴露颈部区域的无菌一次性切口窗帘盖住动物。对于双边胡萝卜动脉结扎,使用单用数十手术刀刀片在颈部中心做一个1.5厘米的中线切口,并使用精细的半边形和弯曲的钳子钝解到左胡萝卜动脉。将暴露的动脉从相关的神经血管束中解剖。
并使用一对弯曲的细钳子在动脉下通过一个循环十厘米长的无菌 5/0 丝缝合线。将缝合线切成两半,并牢固地将两个缝合线长度绑在一起,以连接动脉,在结之间留下至少两毫米。在缝合线之间穿开左角动脉,注意保持神经完好无损,并在右侧重复解剖。
用单无菌 1/8 英寸脐带将右侧胡萝卜动脉逆转。用手术性皮肤夹关闭伤口。然后,让动物在温度控制的水浴中恢复至少30分钟,在缺氧前进行监测。
对于连续缺氧、高氧和缺氧治疗,将动物放在水浴内气密室中。持续监测室内的氧气浓度,以及至少一个哨兵动物的直肠温度。用加湿的 9% 氧气和 91% 的氮气冲洗腔室,并保持每分钟 3 到 5 升的流速,具体取决于腔室大小。
一旦腔室中的氧气浓度达到百分之九,继续输送三十分钟。在缺氧治疗结束时,将供气切换到 80% 的加湿氧气和 20% 的氮气。经过三十分钟的超氧,打开腔室,让其更快速地到达诺莫夏,与室内空气平衡,然后密封室并再次用9%的加湿氧气冲洗。
在第二轮缺氧期间持续监测所有动物,注意任何显示过节性呼吸的动物。一旦腔室中的氧气浓度达到百分之九,继续治疗缺氧三十分钟。在治疗结束时,使用弯曲钳子从右肌动脉识别和解开脐带。
用手术性皮肤夹重闭伤口。然后将所有试剂盒返回 60 分钟的 jills 进行护理和恢复。在恢复期结束时,将受伤的动物返回37至40摄氏度的水浴场,持续6小时,根据需要调整水温,保持36至37摄氏度的直肠温度。
然后,再次返回套件到他们的 jills。在适当的实验终点处进行大脑采集和固定后,将电子卡钳的尖端放在每个大脑的后腹和腹面上,以测量每个受伤和非受伤大脑的高度。将卡钳的尖端放在时间叶的最横向部分,以测量每个大脑的宽度并称量每个大脑。
使用卡钳测量纵向裂缝,所有从相应硫化物最明显部分的开始和结束的硫化物,以及从每个相应陀螺的最宽面的所有陀螺。然后,将卡钳的一个尖端放在纵向裂痕的最后点,将卡钳的另一个尖端放在小脑最后部,以测量暴露小脑的数量。在这项研究中,6只动物中的34只受到侮辱,其中5只动物中度受伤,4只动物严重受伤。
随着伤害的增加,观察到时间和/或腹叶的陀螺变变窄,在最严重受伤的动物中,纵向裂变和更大的囊组织损失区域会缩短和扩大。在反射测试期间,受伤的动物在负地理轴任务中显示旋转时间较慢。在"悬崖厌恶"任务中,从边缘旋转的较慢的时间,以及向右旋转的较慢的时间。
在走道中,受伤的动物表现出与控制装置相似的平均速度,但在每次跑步过程中表现出显著的速度变化。在受伤的动物中,爪子和后爪之间的重量调整距离明显较大,通过四爪的单位爪子区域施加的压力较小。在开阔的田野里,受伤的动物覆盖的总距离更少,停止频率更低,在场地中心停留的时间明显更多,在角落停留的时间更少。
在这里,可以观察到有代表性的控制和受伤动物的热图。注意从伴随的神经中解剖动脉,并留出最大的可能缺氧时间。这些步骤将确保大多数动物存活下来,同时也遭受伤害。
按照这个程序,任何生化,病理或行为结果可以评估,包括评估通常仅限于啮齿动物模型的脑损伤。