هذا البروتوكول مهم لأنه يقدم النموذج الأول للالتهابات التي تُوعية إصابات الدماغ المبكرة في النمس التي تؤدي إلى إصابة كبيرة ومستمرة. هذه التقنية تنطوي على شتائم طويلة التي تتضمن العديد من المحفزات والآليات الكيميائية الحيوية يعتقد أن تسهم في أنواع إصابات الدماغ ينظر في الرضع الإنسان الخدج. إثبات إجراء قياس الدماغ سيكون كايلي كوري، عالمة أبحاث في مختبرنا وأوليفيا وايت، طالبة جامعية.
ثلاثين دقيقة قبل بدء الجراحة، وإدارة ثلاثة ملليغرام لكل كيلوغرام LPS IP إلى مجموعات في مجموعة الإصابات وحجم مماثل من المالحة العقيمة من ثلاثة ميكرولترات لكل غرام للسيطرة على الحيوانات. قبل البدء في الإجراء ، استخدم مقصات الحيوانات الصغيرة لإزالة جميع الشعر على منطقة الرقبة البطنية من النمس في نمط مستطيل ، مع الحرص على تجنب نكتس الجلد أو توليد طفح حراري. إدارة التخدير الموضعي للمنطقة الحليقة وتطهير الجلد مع ثلاث مسحات بالتناوب من اليود povidone والإيثانول 70 في المئة.
بعد التأكد من مستوى مناسب من التخصير بواسطة قرصة إصبع قدم، تغطية الحيوان مع عقيمة، قطع الستائر التي تعرض منطقة الرقبة. لثنائية ربط الشريان السباتي، استخدام واحد عدد عشرة شفرة مشرط لجعل شق خط الوسط 1.5 سنتيمتر في وسط الرقبة واستخدام الهيموستات غرامة ملقط المنحنية لتشريح حادة وصولا الى الشريان السباتي الأيسر. تشريح الشريان المكشوف بعيدا عن حزمة neurovascular المرتبطة بها.
واستخدام زوج من ملقط ناعم منحني لتمرير طول عشرة سنتيمترات من خياطة معقمة 5/0 من الحرير تحت الشريان. قطع خياطة في النصف وربط بشكل آمن كلا أطوال خياطة لligate الشريان، وترك ما لا يقل عن اثنين ملليمتر بين العقدة. قم باستئصال الشريان السباتي الأيسر بين الغرز، مع الحرص على ترك العصب سليمًا وتكرار التشريح على اليمين.
منعكس ligate الشريان السباتي الأيمن مع واحد معقمة 1/8 بوصة ربطة عنق السرة. و أغلق الجرح بمقاطع الجلد الجراحية ثم، السماح للحيوان لاسترداد في حمام الماء درجة حرارة تسيطر لمدة ثلاثين دقيقة على الأقل مع الرصد قبل نقص الأكسجة.
بالنسبة لعلاج نقص الأكسجة المتتابعة وفرط التأكسج ونقص الأكسجة ، ضع الحيوانات في مجموعة الإصابات في غرفة محكمة داخل حمام مائي. مراقبة باستمرار تركيز الأكسجين داخل الغرفة، فضلا عن درجة حرارة المستقيم في واحد على الأقل الحارس. قم بتدفق الغرفة مع 9 في المائة من الأوكسجين المرطب و 91 في المائة من النيتروجين والحفاظ على معدل تدفق من ثلاثة إلى خمسة لترات في الدقيقة الواحدة، اعتمادا على حجم الغرفة.
مرة واحدة في تركيز الأوكسجين في الغرفة قد وصلت إلى تسعة في المئة، مواصلة التسليم لمدة ثلاثين دقيقة. في نهاية معالجة نقص الأكسجة، قم بتبديل إمدادات الغاز إلى 80٪ من الأكسجين المرطب و20 بالمائة من النيتروجين. بعد ثلاثين دقيقة من فرط التأكسج، وفتح الغرفة للسماح لها للوصول إلى أكثر سرعة normoxia، عن طريق اكويريبرات مع الهواء الغرفة، قبل ختم الغرفة وشطف مع الأكسجين المرطب تسعة في المئة مرة أخرى.
مراقبة باستمرار جميع الحيوانات خلال هذه الجولة الثانية من نقص الأكسجة، مع العلم أي الحيوانات التي تعرض بطء التنفس. مرة واحدة في تركيز الأكسجين في الغرفة قد وصلت إلى تسعة في المئة ، ومواصلة علاج نقص الأكسجة لمدة ثلاثين دقيقة. في نهاية العلاج، تستخدم ملقط منحنية لتحديد وفك الشريط السري من الشريان السباتي الأيمن.
إعادة غلق الجرح مع مقاطع الجلد الجراحية. ثم العودة إلى جميع مجموعات جيل لمدة 60 دقيقة للتمريض والانتعاش. في نهاية فترة النقاهة، إعادة الحيوانات المصابة إلى حمامات المياه في 37 إلى 40 درجة مئوية لمدة ست ساعات، وتعديل درجة حرارة المياه حسب الحاجة، للحفاظ على درجات حرارة المستقيم من 36 إلى 37 درجة مئوية.
ثم، عودة مجموعات إلى جيل لهم مرة أخرى. بعد حصاد الدماغ والتهيّم عند نقطة النهاية التجريبية المناسبة، ضع نصائح الفرجار الإلكتروني على الجوانب الظهرية والبينيترالية لكل دماغ لقياس ارتفاع كل دماغ مصاب وغير مصاب. ضع نصائح الفرجر في الأجزاء الأكثر جانبية من الفصوص الصدغية لقياس عرض كل دماغ ووزن كل دماغ.
استخدام الفرجر لقياس الشق الطولي، كل من sulci من بداية ونهاية الجزء الأكثر تميزا من sulcus المقابلة، وجميع من gyri من أوسع جانب من كل جروس المقابلة. ثم ضع طرف واحد من الفرجر في النقطة الخلفية الأكثر من الشق الطولي والجزء الآخر من الفرجار في الجزء الخلفي من المخيخ لقياس كمية المخيخ المعرضة. من بين 34 حيواناً من ستة نفايات تعرضت للإهانة في هذه الدراسة، تعرضت خمسة لإصابة متوسطة وأربعة إصابة خطيرة.
مع زيادة الإصابة ، لوحظ تضييق الجيرويري في الفصوص الصدغية و / أو القذالي ، مع تقصير sulcul المرتبط به وتوسيع الشق الطولي والمناطق الأكبر من فقدان الأنسجة الكيسية في الحيوانات الأكثر إصابة. خلال فترة الاختبار المنعكة، تعرض الحيوانات المصابة وقتًا أبطأ للتدوير في مهمة geotaxis السلبية. وقت أبطأ لتدوير بعيدا عن الحافة في مهمة كليف النفور وأبطأ وقت إلى اليمين.
في المنصة، تظهر الحيوانات المصابة متوسط سرعة مماثل للضوابط ولكنها تظهر درجة أكبر بكثير من اختلاف السرعة خلال كل شوط. المسافة المعدلة للوزن بين الكفوف والكفوف الخلفية أكبر بكثير في الحيوانات المصابة ، مع ضغط أقل يتم بذله لكل منطقة مخلب وحدة ، من خلال الكفوف الأربعة. في المجال مفتوحة، والحيوانات المصابة تغطية أقل المسافة الإجمالية، ووقف أكثر تواترا وقضاء وقت أطول بكثير في وسط الميدان وأقل من الوقت في الزوايا.
هنا، يمكن ملاحظة خرائط الحرارة التمثيلية للسيطرة والحيوانات المصابة. الحرص على تشريح بعيدا الشريان من العصب المصاحب والسماح لأقصى وقت ممكن نقص الأكسجة. هذه الخطوات سوف تضمن أن غالبية الحيوانات البقاء على قيد الحياة، في حين أن الإصابة أيضا.
بعد هذا الإجراء، يمكن تقييم أي نتائج بيوكيميائية أو مرضية أو سلوكية، بما في ذلك التقييمات التي تقتصر عادة على نماذج القوارض من إصابات الدماغ.
