Ce protocole est significatif parce qu’il offre le premier modèle de lésion cérébrale prématurée sensibilisée par inflammation dans les furets qui a comme résultat des dommages significatifs et soutenus. Cette technique implique une insulte prolongée qui intègre de nombreux déclencheurs et mécanismes biochimiques pensés pour contribuer aux types de lésions cérébrales observées chez les prématurés. Kylie Corry, chercheuse dans notre laboratoire, et Olivia White, étudiante de premier cycle, feront la démonstration de la procédure de mesure du cerveau.
Trente minutes avant de commencer la chirurgie, administrer trois milligrammes par kilogramme ip LPS à des kits dans le groupe des blessures et un volume équivalent de saline stérile de trois microlitres par gramme pour contrôler les animaux. Avant de commencer la procédure, utilisez de petites tondeuses pour animaux pour enlever tous les cheveux sur la région ventrale du cou du furet dans un modèle rectangulaire, en prenant soin d’éviter de entailler la peau ou de générer une éruption thermique. Administrer l’anesthésie locale à la zone rasée et désinfecter la peau avec trois écouvillons alternatifs d’iode povidone et soixante-dix pour cent d’éthanol.
Après avoir confirmé un niveau approprié de sédation par pincement des pieds, couvrez l’animal de rideaux stériles et jetables découpés qui exposent la région du cou. Pour la ligature bilatérale d’artère carotide, utilisez un numéro d’utilisation simple dix lame de scalpel pour faire une incision médiane de 1,5 centimètre au centre du cou et employer les hemostats fins et les forceps incurvés pour disséquer sans ambages vers le bas à l’artère carotide gauche. Disséquer l’artère exposée loin du faisceau neurovasculaire associé.
Et utilisez une paire de forceps fins incurvés pour passer une longueur en boucle de dix centimètres de suture stérile de soie 5/0 sous l’artère. Couper la suture en deux et attacher solidement les deux longueurs de suture pour ligate l’artère, en laissant au moins deux millimètres entre les noeuds. Transecter l’artère carotide gauche entre les sutures, en prenant soin de laisser le nerf intact et répéter la dissection sur la droite.
Ligate inverséement l’artère carotide droite avec une seule cravate ombilicale stérile de 1/8 pouce. Et fermez la plaie avec des pinces chirurgicales de peau. Ensuite, laissez l’animal récupérer dans un bain d’eau à température contrôlée pendant au moins trente minutes avec surveillance avant hypoxie.
Pour le traitement séquentiel d’hypoxie, d’hyperoxie et d’hypoxie, placez les animaux dans le groupe de blessure dans une chambre hermétique dans un bain d’eau. Surveillez en permanence la concentration d’oxygène à l’intérieur de la chambre, ainsi que la température rectale chez au moins un animal sentinelle. Rincer la chambre avec de l’oxygène humidifié de neuf pour cent et 91 pour cent d’azote et maintenir un débit de trois à cinq litres par minute, selon la taille de la chambre.
Une fois que la concentration d’oxygène dans la chambre a atteint neuf pour cent, continuer la livraison pendant trente minutes. À la fin du traitement par hypoxie, passer l’approvisionnement en gaz à 80 pour cent d’oxygène humidifié et 20 pour cent d’azote. Après trente minutes d’hyperoxie, ouvrez la chambre pour lui permettre d’atteindre plus rapidement la normoxie, en équilibrant avec de l’air de pièce, avant de sceller la chambre et de rincer à nouveau avec de l’oxygène humidifié à neuf pour cent.
Surveillez en permanence tous les animaux au cours de cette deuxième série d’hypoxie, en prenant note de tous les animaux qui présentent la bradypnée. Une fois que la concentration d’oxygène dans la chambre a atteint neuf pour cent, continuer le traitement hypoxie pendant trente minutes. À la fin du traitement, a utilisé des forceps incurvés pour identifier et détacher le ruban ombilical de l’artère carotide droite.
Refermer la plaie avec des pinces chirurgicales de la peau. Ensuite, retournez tous les kits aux jills pendant 60 minutes pour les soins infirmiers et la récupération. À la fin de la période de rétablissement, remettre les animaux blessés aux bains d’eau à 37 à 40 degrés Celsius pendant six heures, en ajustant la température de l’eau au besoin, afin de maintenir des températures rectales de 36 à 37 degrés Celsius.
Ensuite, retournez les kits à leurs jills à nouveau. Après la récolte et la fixation du cerveau au point de terminaison expérimental approprié, placez les pointes d’un étrier électronique sur les aspects dorsal et ventral de chaque cerveau pour mesurer la hauteur de chaque cerveau blessé et non blessé. Placez les extrémités de l’étrier aux parties les plus latérales des lobes temporels pour mesurer la largeur de chaque cerveau et peser chaque cerveau.
Utilisez l’étrier pour mesurer la fissure longitudinale, tous les sulci du début et de la fin de la partie la plus distincte du sulcus correspondant, et tout le gyri de l’aspect le plus large de chaque gyrus correspondant. Ensuite, placez une pointe de l’étrier au point le plus postérieur de la fissure longitudinale et l’autre extrémité de l’étrier à la partie la plus postérieure du cervelet pour mesurer la quantité de cervelet exposé. Sur les 34 animaux de six portées exposés à l’insulte dans cette étude, cinq animaux ont subi des blessures modérées et quatre animaux ont subi de graves blessures.
Avec des dommages croissants, le rétrécissement du gyri dans les lobes temporels et/ou occipital est observé, avec un raccourcissement et un élargissement sulcul associés de la fissure longitudinale et de plus grandes zones de perte de tissu cystique chez les animaux les plus gravement blessés. Au cours de la période d’essai réflexe, les animaux blessés affichent un temps plus lent pour tourner dans la tâche géotaxis négative. Un temps plus lent pour tourner loin du bord dans la tâche Cliff Aversion et un temps plus lent à droite.
Sur la passerelle, les animaux blessés démontrent une vitesse moyenne similaire aux commandes, mais affichent un degré significativement plus élevé de variation de vitesse à chaque course. La distance ajustée en poids entre les pattes et les pattes postérieures est significativement plus grande chez les animaux blessés, avec moins de pression exercée par zone de patte unitaire, à travers les quatre pattes. En plein champ, les animaux blessés couvrent moins de distance totale, s’arrêtent plus fréquemment et passent beaucoup plus de temps au centre du champ et moins de temps dans les coins.
Ici, des cartes thermiques représentatives des animaux témoins et blessés peuvent être observées. Prenez soin de disséquer l’artère du nerf qui l’accompagne et de prévoir le maximum de temps d’hypoxie possible. Ces mesures permettront à la majorité des animaux de survivre, tout en subissant des blessures.
Après cette procédure, tous les résultats biochimiques, pathologiques ou comportementaux peuvent être évalués, y compris les évaluations qui sont normalement limitées aux modèles de rongeurs de lésions cérébrales.
