Этот протокол имеет важное значение, поскольку он предлагает первую модель воспаления сенсибилизированной преждевременной черепно-мозговой травмы у хорьков, что приводит к значительным и устойчивым травмам. Этот метод включает в себя длительные оскорбления, которая включает в себя многие из триггеров и биохимических механизмов, как полагают, способствуют типы травм головного мозга видели у недоношенных человеческих младенцев. Демонстрация процедуры измерения мозга будет Кайли Корри, научный сотрудник в нашей лаборатории и Оливия Уайт, студент.
За тридцать минут до начала операции ввемите три миллиграмма на килограмм LPS IP для комплектов в группе травм и эквивалентный объем стерильного солевого раствора в три микролитера на грамм для контроля животных. Перед началом процедуры используйте небольшие ножницы животных, чтобы удалить все волосы на брюшной области шеи хорька в прямоугольном рисунке, заботясь, чтобы избежать nicking кожи или генерации тепловой сыпи. Администрирование местной анестезии в бритой области и дезинфицировать кожу с тремя чередующихся тампонов йода повидоне и семьдесят процентов этанола.
После подтверждения соответствующего уровня сережки на ног щепотку, покрыть животное стерильными, одноразовые вырезать шторы, которые подвергают области шеи. Для двусторонней перевязки сонной артерии, используйте одно использование номер десять скальпель лезвие, чтобы сделать 1,5 сантиметра средней линии разреза в центре шеи и использовать тонкие гемостаты и изогнутые миппы, чтобы тупо вскрыть до левой сонной артерии. Рассекаете открытые артерии от связанного нервно-мышечного пучка.
И использовать пару изогнутых тонких типсов пройти петли десять сантиметров длиной стерильных 5/0 шелковый шов под артерией. Разрежьте шов пополам и надежно связать обе длины шва, чтобы лигат артерии, оставив по крайней мере два миллиметра между узлами. Перережь левую соонную артерию между швами, заботясь о том, чтобы оставить нерв нетронутым и повторить вскрытие справа.
Реверсивно ligate правой сонной артерии с одной стерильной 1 / 8 дюймов пуповины галстук. И закройте рану хирургическими зажимами для кожи. Затем, позвольте животному восстановиться в температуре контролируемой водяной бане, по крайней мере тридцать минут с мониторингом до гипоксии.
Для последовательной гипоксии, гипероксии и гипоксии лечения, поместите животных в травму группы в герметичной камере в водяной бане. Постоянно следите за концентрацией кислорода в камере, а также за температурой прямой кишки по крайней мере у одного дозорного животного. Промыть камеру с увлажненным девять процентов кислорода и 91 процентов азота и поддерживать скорость потока от трех до пяти литров в минуту, в зависимости от размера камеры.
После того, как концентрация кислорода в камере достигла девяти процентов, продолжить доставку в течение тридцати минут. В конце лечения гипоксии, переключить газоснабжение на 80 процентов увлажненной кислорода и 20 процентов азота. После тридцати минут гипероксии, откройте камеру, чтобы позволить ему быстрее достичь нормоксии, путем равномерности с комнатным воздухом, прежде чем запечатать камеру и промывки с девятью процентами увлажненной кислорода снова.
Постоянно следить за всеми животными во время этого второго раунда гипоксии, принимая к сведению любых животных, которые отображают bradypnea. После того, как концентрация кислорода в камере достигла девяти процентов, продолжить лечение гипоксии в течение тридцати минут. В конце лечения, используется изогнутые типсы для выявления и развязать пуповинной лентой из правой сонной артерии.
Закрываем рану хирургическими зажимами для кожи. Затем верните все комплекты в джиллс в течение 60 минут для ухода и восстановления. В конце восстановительного периода, вернуть раненых животных в ванну при температуре от 37 до 40 градусов по Цельсию в течение шести часов, регулируя температуру воды по мере необходимости, для поддержания ректальной температуры от 36 до 37 градусов по Цельсию.
Затем, вернуть комплекты для их jills снова. После сбора и фиксации мозга в соответствующей экспериментальной конечной точке, поместите кончики электронного калипера на спинные и желудонные аспекты каждого мозга, чтобы измерить высоту каждого раненого и неповоротного мозга. Поместите кончики калипера в самые боковой части височных долей, чтобы измерить ширину каждого мозга и взвесить каждый мозг.
Используйте калипер для измерения продольной трещины, все sulci от начала и конца наиболее отчетливые части соответствующего sulcus, и все гири из самого широкого аспекта каждого соответствующего извилины. Затем поместите один кончик калипера в самой задней точке продольной трещины, а другой кончик калипера в самой задней части мозжечка для измерения количества открытого мозжечка. Из 34 животных из шести пометов, подвергшихся оскорблению в этом исследовании, пять животных имели травмы средней тяжести и четыре животных были тяжелые травмы.
С увеличением травмы наблюдается сужение гири в височной и/или затылочной долей, связанное с сокращением и расширением продольной трещины и более крупных участков кистозной ткани у наиболее тяжелораненых животных. В течение периода рефлекторного тестирования, раненые животные отображают более медленное время, чтобы вращаться в отрицательной задаче геотаксиса. Более медленное время для вращения от края в задаче отвращения Скалы и более медленное время вправо.
На подиуме раненые животные демонстрируют аналогичную среднюю скорость управления, но демонстрируют значительно большую степень изменения скорости во время каждого бега. Вес скорректированное расстояние между лапами и задними лапами значительно больше у раненых животных, с меньшим давлением, оказываемого на единицу области лапы, через четыре лапы. В открытом поле раненые животные покрывают меньше общего расстояния, останавливаются чаще и проводят значительно больше времени в центре поля и меньше времени в углах.
Здесь можно наблюдать репрезентативные тепловые карты управления и раненых животных. Позаботьтесь, чтобы вскрыть артерию от сопутствующего нерва и дать максимально возможное время гипоксии. Эти шаги обеспечат выживание большинства животных, а также травму.
После этой процедуры можно оценить любые биохимические, патологические или поведенческие исходы, включая оценки, которые обычно ограничиваются моделями грызунов с черепно-мозговой травмой.
