认知障碍是叶癫痫最常见的合并疾病之一。我们将介绍一个协议,描述如何使用慢性癫痫的小鼠模型评估记忆损伤。新颖的物体位置、新颖的物体识别和图案分离测试都是简单而短的,可以减轻动物的压力。
它使此测试成为评估癫痫小鼠记忆功能的最佳方法,而没有自发性复发性癫痫发作的额外触发因素。首先,将动物适应家中笼子里的低光,至少30分钟。准备一个打开的字段框。
在习惯的第一天,放置和照明仪在开放领域框的中心。将照度调整为 60 勒克斯。要评估每只小鼠的运动活动,请使用动物行为视频跟踪软件。
打开视频跟踪软件后,校准打开字段框的大小。然后轻轻地将实验鼠标放在面向墙壁的开放领域框中。打开智能程序,单击"自定义"和"接受"。
单击图像源。选择已安装的摄像机后,按"设置"按钮。调整摄像机分辨率并按"接受"。
校准后,拖动计算机鼠标以适合框大小。并填写内框大小。单击"区域定义"以保存和调整每个框大小,然后单击"保存"。
红色框是跟踪范围,因此它适合内框大小,而粉红色框适合轮廓。按检测设置。单击"快照",然后按"开始测试",检查是否跟踪了特定区域,然后预先进行"停止测试",然后接受。
单击"时间设置"。选择预设时间后,将延迟时间设置为 15 分钟,然后按"接受"。按"主题"设置代号。
单击"计划程序",删除现有详细信息,然后将主题中修改的代码名拖动到会话 1。单击数据采集。单击"录制"按钮,然后单击"开始"。
将鼠标放入框中并跟踪 15 分钟。录音 15 分钟后,将鼠标返回到其家庭笼子。恢复明亮的光线。
单击数据采集。然后单击"活动分析"将代码名称"Sham"拖动到旁边的窗口。单击"报表定义"按钮。
单击"新报表定义"按钮,然后单击"摘要报告",然后按"接受"。单击"区域中的主题名称和距离",并将其发送到侧面。然后按"接受"按钮。
单击红色检查标记,然后单击"分析"。检查结果。第二天和第三天,重复习惯会议。
第四天执行熟悉会话。在昏暗的灯光下,将每只鼠标放在空旷的空旷的田野中三分钟。短暂的习惯后,动物回到它的笼子。
将两个相同的物体,橡胶娃娃,放入离相邻墙壁五厘米远的露天竞技场。用双面胶带固定对象。将实验鼠标引入离物体最远的墙面的开放场箱中。
允许免费探索 20 分钟,并使用两个秒表手动测量探索这两个对象所花费的时间。不要量化为探索时间,任何行为,其中动物鼻子不指向对象。一旦鼠标达到 30 秒的最小探索时间,对于两个对象,停止 F1 会话,然后将鼠标转移到其主保持架。
如果鼠标在 20 分钟内无法浏览对象 30 秒,请从打开的字段框中删除鼠标,并将其从进一步会话中排除。第五天,执行新颖的对象位置测试会话。将鼠标转移到开放区域进行康复治疗三分钟。
然后把它还到它的笼子里。将一个对象移到对角线位置,将实验鼠标放在打开的字段框的墙壁上。使用视频跟踪系统进行 10 分钟的免费探索和录制。
使用两个秒表测量探索每个对象所花费的时间。接下来,通过抓住尾巴将鼠标转移到其家庭笼子。三天,让鼠标休息,免费获得食物和水。
第九天,为一只鼠标进行15分钟的习惯训练。第10天进行简短的康复训练,为期三分钟。然后暂时把它还回它的家笼。
将两个相同物体,50毫升塑料管装满40毫升水,放在开阔的田野里,离相邻的墙壁5厘米远。将实验鼠标引入开放字段框,朝向离物体最远的墙。由于鼠标将暴露在两个不同的对象在NO测试,一个50毫升的塑料管充满了40毫升的水,和一个玻璃科普林罐罐。
在熟悉会话期间,通过为小组中一半的动物呈现两个相同的物体,即玻璃科普林罐子,来平衡对象。然后使用两个不同的对象,允许自由探索 20 分钟,并使用两个秒表手动测量探测这两个对象所花费的时间。一旦鼠标达到两个对象的最小过期时间 30 秒,停止熟悉会话。
第二天,执行新颖的对象识别测试会话。首先,将鼠标转移到开阔的田地进行康复治疗,进行三分钟,然后将其返回到其家庭笼子。在距离相邻墙壁五厘米远的地方,用玻璃Coplin罐子代替管子,使老鼠接触到一根管子和一个玻璃科普林罐。
对于在第一次熟悉过程中暴露在玻璃科普林罐中的一半动物,用装满 40 毫升水的 50 毫升塑料管替换玻璃科普林罐。使老鼠接触到一根管子和一杯科普林罐。使用视频跟踪系统录制时,请进行 10 分钟的免费探索。
然后抓住实验鼠的尾巴,把它转移到它的家笼。三天,让老鼠休息,免费获得食物和水。对于 NL 分析,请打开"自定义和接受"开始程序。
单击图像源。选择已安装的摄像机后,按"设置"按钮。只需相机分辨率,然后按"接受"。
单击"打开视频文件夹"按钮打开已保存的视频。从鼠标进入时观看保存的视频 10 分钟,并测量浏览每个对象所花费的时间。在第 15 天,首次执行了 PS 测试的第一个熟悉会话。
这是为鼠标到开放领域康复,三分钟。将地板与宽网格和两个相同的对象放置。塑料T瓶,装满50毫升水,在露天盒子里。
然后将实验鼠标引入离物体最远的墙面的开放场箱中。允许免费探索20分钟。使用两个秒表手动测量探索这两个对象的时间。
一旦鼠标达到两个物体的最小探索时间 30 秒,停止第一个熟悉会话,将动物转移到其家庭笼子。为了平衡对象和图案分离测试的一半动物放置地板与宽网格和两个相同的对象,玻璃瓶的计数器平衡实验在开放领域框。然后将实验鼠标引入开放领域框,并允许20分钟的自由探索。
一旦鼠标达到两个物体的最小探索时间30秒,停止第一个熟悉会话,将动物转移到其家庭笼子。第二天,将鼠标转移到野外进行康复治疗三分钟。然后把它还到它的笼子里
接下来,在狭窄的栅格地板上使用两个玻璃瓶执行第二次熟悉会话。对于平衡实验,在狭窄的网格地板上用两个装满水的 T 瓶执行第二次熟悉会话。第二天执行模式分离测试会话。
将鼠标转移到开放区域,三分钟内没有物体进行康复。然后把它还到它的笼子里接下来,将装满水和玻璃瓶的 T 瓶放在狭窄的网格地板上。
使T瓶水充满,在新颖的对象。对于平衡实验,将每个对象放在狭窄的网格地板上,使玻璃瓶成为新对象。然后为实验鼠到开阔的田野区域探索10分钟。
使用视频跟踪系统进行 10 分钟的免费探索和录制。抓住实验鼠的尾巴,把它转移到它的家笼。使用两个秒表测量探索每个对象所花费的时间。
计算等于新对象与熟悉对象所花费时间之差的区分比,除以探索两个对象的总时间。皮洛卡平引起急性癫痫发作六周后。老鼠将接受新颖的物体位置测试。
新颖的对象识别试验和图案分离试验。按该顺序在测试之间分开三天的休息时间。经证实,两个对象之间没有显著偏好。
与Sham对巴对相比,癫痫小鼠在三次测试中的歧视率明显降低。显示空间记忆损伤。对运动活动进行测量,表明癫痫动物显著增加。
而探索这些物体的动机是沙姆和癫痫动物之间的可比性。最后,用水晶紫罗兰染色确认癫痫发作诱发神经元损伤后,对海马细胞死亡进行了评估。与Sham控制不同,皮洛卡平治疗动物在海马和CA3亚场中表现出对皮诺蒂奇细胞的证明。
在 NO 和 PS 测试中计数对于减少此设备特定对象中固有的偏差至关重要。此外,慢性癫痫小鼠开放显示高度焦虑,这需要多个习惯步骤,以足够的好评国家的实验设置。时间修改,如我们协议中对象的数量或位置可以提供内存测试。
这可能有助于详细阐述与认知衰退相关的癫痫的复杂机制。看完这段视频后,你应该对如何评估癫痫中记忆障碍的不同方面有一个很好的理解。