Когнитивные нарушения является одним из наиболее распространенных заболеваний при эпилепсии височной доли. Мы представят протокол, описывающий, как оценить ухудшение памяти с помощью мышиной модели хронической эпилепсии. Новое расположение объекта, новое распознавание объектов и тест на разделение шаблонов являются простыми и короткими, которые могут минимально подчеркнуть животных.
Это делает этот тест оптимальным для оценки функции памяти у эпилептических мышей, без дополнительных триггеров для спонтанных периодических припадков. Для начала, акклиматизировать животных к низкой освещенности в домашних клетках, по крайней мере 30 минут. Подготовь открытую полевую коробку.
В первый день привыкания, место и иллюминометр в центре открытого поля поле. И отрегулируйте свечение до 60 Lux. Для оценки локомотивной активности каждой мыши используйте программное обеспечение для отслеживания поведения животных.
Как только программное обеспечение для отслеживания видео будет открыто, откалибровать размер открытого поля. Затем аккуратно поместите экспериментальную мышь в открытую полевую коробку лицом к стене. Откройте программу Smart, нажмите Настроить и Принять.
Нажмите Источник изображения. Выбрав установленную камеру, нажмите кнопку Set. Отрегулируйте разрешение камеры и нажмите, Примите.
После нашей калибровки нажмите, перетащите компьютерную мышь, чтобы соответствовать размеру коробки. И заполните внутренний размер коробки. Нажмите Определение зоны, чтобы сохранить и настроить каждый размер коробки, а затем нажмите Сохранить.
Красная коробка отслеживается диапазон, поэтому он вписывается во внутренний размер коробки, в то время как розовая коробка соответствует контуру. Настройка обнаружения прессы. Нажмите Snapshot и нажмите Start Test, чтобы проверить, отслеживается ли определенная область, затем предварительно остановите тест, а затем примите.
Нажмите Настройки времени. После выбора заданного времени установите время задержки, за три секунды времени приобретения до 15 минут и нажмите Accept. Нажмите Темы, чтобы установить кодовое имя.
Нажмите Scheduler, чтобы удалить существующие детали и перетащите кодовое имя, измененное в предметах, в сеанс один. Нажмите на приобретение данных. Нажмите кнопку Запись и нажмите Кнопку Пуск.
Положите мышь в коробку и отслеживать его в течение 15 минут. Через 15 минут записи вернуть мышь в свою домашнюю клетку. Восстановите яркий свет.
Нажмите На кнопку Приобретение данных. А затем щелкните кодовое имя Active Analysis Drag Sham к окну рядом с ним. Нажмите кнопку «Определения отчетов».
Нажмите кнопку «Новые определения отчетов», затем сводной отчет и нажмите «Принять». Нажмите Имя субъекта и расстояние в зоне, и отправить его в сторону. Затем нажмите кнопку Accept.
Нажмите на красную чековую отметку и нажмите Анализ. Проверьте результаты. На второй и третий день повторите сеансы привыкания.
На четвертый день выполните сеанс ознакомиться. При тусклом свете поместите каждую мышь в пустое открытое поле на три минуты. После этого краткого привыкания вернуть животное в свою домашнюю клетку.
Поместите два одинаковых предмета, резиновые куклы, на открытое поле, в пяти сантиметрах от прилегающих стен. Исправьте объекты с помощью двойной ленты. Ввемите экспериментальную мышь в открытый полевой ящик, обращенный к стене, самой далекой от объектов.
Разрешить бесплатную разведку в течение 20 минут и вручную измерить время, затраченные на изучение обоих объектов с помощью двух секундомеров. Не количественно, как исследовательское время, любое поведение, в котором морда животного не указывают на объект. Как только мышь достигнет минимального времени исследования 30 секунд, для двух объектов, остановить F1 сессии и передачи мыши в свою домашнюю клетку.
Если мышь не исследует объекты в течение 30 секунд в течение 20 минут, удалите мышь из открытого поля поле и исключите ее из дальнейших сеансов. На пятый день выполните сеанс тестирования местоположения нового объекта. Перенесите мышь на открытое поле для реабилитации в течение трех минут.
Затем верните его в свою домашнюю клетку. Перемести один объект в диагональное положение и поместите экспериментальную мышь лицом к стене открытого поля. Разрешить 10 минут бесплатного исследования и записи с помощью системы видео слежения.
Измерьте время, затрачено на изучение каждого объекта, используя два секундомера. Затем перенесите мышь в домашнюю клетку, хватая за хвост. В течение трех дней, пусть мышь отдыхает с бесплатным доступом к пище и воде.
На девятый день выполните 15-минутный сеанс привыкания на одну мышь. На 10-й день выполнить краткую реабилитационную сессию, в течение трех минут. Затем временно вернуть его в свою домашнюю клетку.
Поместите два одинаковых объекта, 50 миллилитров пластиковых трубок, наполненных 40 миллилитров воды, в открытом поле, в пяти сантиметрах от прилегающих стен. Ввести экспериментальную мышь в открытый поле, обращенное к стене дальше от объектов. Как мышь будет подвергаться двум различным объектам в NO Test, 50 миллилитров пластиковой трубки заполнены 40 миллилитров воды, и стеклянные банки Coplin.
Уравновешивайте объект во время сеанса ознакомлений, представляя два одинаковых объекта, стеклянные банки Coplin, для половины животных в группе. Затем с двумя различными объектами, позволяют свободное исследование в течение 20 минут и вручную измерить время, затраченные на изучение обоих объектов с помощью двух секундомеров. Как только мышь достигнет минимального времени истечения 30 секунд для обоих объектов, остановите сеанс ознакомиться.
На следующий день выполните тестовый сеанс распознавания новых объектов. Сначала перенесите мышь на открытое поле для реабилитации, на три минуты, а затем верните ее в домашнюю клетку. В пяти сантиметрах от прилегающих стен, заменить трубку со стеклянной банки Coplin банки, так что мыши подвергаются одной трубки и один стеклянный Coplin банки банку.
Для половины животных, которые подверглись воздействию стеклянных банок Coplin банки во время первой сессии ознакомительного, заменить стеклянные банки Coplin банки с 50 миллилитров пластиковой трубки заполнены 40 миллилитров воды. Так что мыши подвергаются воздействию одной трубки и одного стекла Coplin банки банку. Разрешить 10 минут бесплатного исследования при записи его с помощью системы видео слежения.
Затем схватите хвост экспериментальной мыши и перенесите ее в домашнюю клетку. В течение трех дней, и пусть мышь отдохнуть с бесплатным доступом к пище и воде. Для анализа NL, открытая программа запуска настроены и принять.
Нажмите Источник изображения. Выбрав установленную камеру, нажмите кнопку Set. Просто разрешение камеры и нажмите Accept.
Нажмите кнопку Open videos Folder, чтобы открыть сохраненные видео. Смотреть сохраненные видео в течение 10 минут с того времени, мышь входит и измерить время, затраченные на изучение каждого объекта. На 15-й день впервые была проведена первая сессия ознакомиться с PS Test.
Это для мыши на открытое поле для реабилитации, в течение трех минут. Поместите напольную плиту с широкой сеткой и двумя одинаковыми объектами. Пластиковые Т-колбы, наполненные 50 миллилитров воды, в открытом поле коробки.
Затем ввел экспериментальную мышь в открытый поле поле, обращенное к стене, самой далекой от объектов. Разрешить бесплатную разведку в течение 20 минут. И вручную измерить время, затухав на изучение обоих объектов с помощью двух секундомеров.
Как только мышь достигнет минимального времени исследования 30 секунд для обоих объектов, остановить первый сеанс ознакомки и передать животное в свою домашнюю клетку. Чтобы уравновесить тест на разделение объекта и узора для половины животных, поместите напольную плиту с широкой сеткой и двумя одинаковыми предметами, стеклянными бутылками для эксперимента по балансировке счетчика в открытой полевой коробке. Затем ввемите экспериментальную мышь в открытую полевую коробку и позвольте бесплатноразведку в течение 20 минут.
Как только мышь достигнет минимального времени исследования 30 секунд для двух объектов, остановить первый сеанс ознакомки и передать животное в свою домашнюю клетку. На следующий день перенесите мышь на поле для реабилитации на три минуты. А потом вернуть его в свою домашнюю клетку.
Далее выполните второй сеанс ознакомки с двумя стеклянными бутылками на узком полу сетки. Для экспериментов по противовесу выполните второй сеанс ознакомляния с двумя Т-колбами, наполненными водой на узком сетчатом полу. На следующий день выполните сеанс тестирования разделения шаблона.
Перенесите мышь на открытое поле без объекта для реабилитации в течение трех минут. А потом вернуть его в свою домашнюю клетку. Далее поместите Т-колбу, наполненную водой и стеклянной бутылкой, на узкий сетчатый пол.
Сделать Т-колбы заполнены водой, в новый объект. Для экспериментов по противовесу поместите каждый объект на узкий сетчатый пол, чтобы сделать стеклянную бутылку новым объектом в этом случае. Затем для экспериментальной мыши на открытое поле области в течение 10 минут, чтобы исследовать.
Разрешить 10 минут бесплатного исследования и записи с помощью системы видео слежения. Захватите хвост экспериментальной мыши и перенесите ее в домашнюю клетку. Измерьте время, затраченного на изучение каждого объекта с помощью двух секундомеров.
И вычислить соотношение дискриминации, равное разнице времени, затраченного между новым объектом и знакомым объектом, разделенным на общее время изучения двух объектов. Через шесть недель после введения пилокарпина индуцируются острые судороги. Мыши будут подвергнуты испытанию местоположения нового объекта.
Новый тест распознавания объектов и тест разделения шаблонов. В этом порядке разделены на три дня отдыха между тестами. Было подтверждено, что между двумя объектами, представленными вместе, не было никаких существенных предпочтений.
Эпилептические мыши показали значительное снижение, в соотношении дискриминации в трех тестах по сравнению с Шам контроля. Демонстрация нарушения пространственной памяти. Измерение активности локомотивов показало значительное увеличение эпилептических животных.
В то время как мотивация исследовать объекты была сопоставима между Шамом и эпилептическими животными. Наконец гиппокампа клеточной смерти была оценена после pilocarpine индуцированного статуса эпилептика с использованием кристально фиолетового окрашивания для подтверждения захвата индуцированного повреждения нейронов. Pilocarpine обработанных животных продемонстрировали пикнотических клеток в и CA3 под поля гиппокампа, в отличие от контроля Шам.
Подсчитайте в NO и PS тест имеет решающее значение для уменьшения присущих смещения возможно в этом устройстве конкретных объектов. In addition хронические эпилептические мыши открывают показывают повышенную тревожность, которая требует множественных шагов habituation для достаточно acclaim нации к экспериментальным установкам. изменения времени, такие как количество или расположение объектов в нашем протоколе, могут обеспечить тесты памяти.
Что может быть полезно для разработки сложных механизмов эпилепсии, связанных с когнитивным снижением. После просмотра этого видео, вы должны иметь хорошее понимание того, как оценить различные аспекты нарушения памяти при эпилепсии.
