肾脏器官培养和细胞器，从编程干细胞派生，提供了极好的方法来研究肾脏发育和疾病背后的机制。然而，目前的器官培养系统不提供血液流向肾脏。因此，目前的模型不完整，未能重新概括肾脏的主要功能，即血液过滤。
在这份出版物中，我们提出了一个改进的协议，用于培养和可视化鸡胚胎的胆汁膜上的胚胎肾脏和器官。在我们的新型实验装置中，我们将移植在CAM上的肾脏基座与充满培养基的可渗透意义储液库叠加在一起。该协议显著增加肾脏基和内在内皮细胞的生存。
该方法使血液流向发育中的血液。最近，我们还发布了一种新的固定方向器官培养方法，提供高分辨率共声三维延时成像。该方法为器官和器官基体的长期共合成像提供了最佳条件。
在方法中，我们轻轻地压缩玻璃盖滑和渗透膜之间的组织。在这里，我们将展示定制设计的板是如何制作的，以及如何设置培养实验。因此，在这份出版物中，我们提出了一种改进的肾细胞管培养技术。
这种方法为模拟细胞器起源和进行高分辨率成像以研究胚胎肾和肾器官外体提供了更好的方法。根据您的实验，采取传输细胞反面插入设计为六孔或12孔板。使用 Dremel 工具切割刀片的侧面，以创建一个两毫米高的塑料环，并附着一个可渗透膜。
用手术刀或锋利的刀从刺中抛光戒指的边缘。用70%乙醇对小型储层进行消毒至少一小时。然后用蒸馏水清洗在自动洗涤器中的迷你储液罐，然后用层罩干燥。
冲洗PBS和培养介质中的迷你储液罐。将储液罐放在培养皿上，放在我们一滴培养的培养物上，膜朝上。在膜上安排解剖的外体胚胎肾脏或肾器官。
避免在样品周围留下很多液体，并在细胞培养箱中保持2至24小时。外向移植是8天大的外托胚胚鸡的胆碱膜。转移迷你储液罐，使膜覆盖移植物。
将它们放在 CAM 的外围，这样它们不会覆盖胚胎。然后向小型储层添加培养介质。在鸡肉 CAM 上最多培养 9 天的样品。
每天更换小型水库中的培养介质。移植后24至48小时可以观察到样品的血管化。使定制设计六孔板的固定文化。
您需要首先使用具有适当钻头的钻孔在板底钻 20 毫米孔。接下来，抛光板上侧的孔轮圈。最后，用70%乙醇消毒板至少一小时。
然后用蒸馏水在洗涤器中清洗盘子，然后用油液罩干燥。用 70% 乙醇清洗 22x22 毫米盖滑，让它们完全干燥。使用组织胶水将盖滑粘在井底孔顶部。
干燥后，在无菌显微镜下检查板材并去除多余的胶水。首先，将聚苯乙烯珠与同等体积的氢气混合。将转填充刀片放在解剖显微镜下，膜朝上，将肾脏排列在膜上。
在肾脏旁边加入一滴水凝胶珠混合物。翻转转填充刀片，使膜和肾脏朝下。然后小心地将插入物放入我们定制设计的六井板井中。
非常轻轻地将刀片推入井中。从显微镜上跟随扁平化的程度，直到肾脏与珠子处于水平。用一只手将刀片稍微压在井上，用焊接铁在刀片外围的三个点熔化塑料，将其固定到板材上。
通过侧面的开口将两毫升培养介质加入到井中。启动延时成像时，将板转移到倒置显微镜的台式培养箱中。我们改进的 CAM 捕获协议能够高效血管化肾脏器官和胚胎肾脏。
许多含有培养基的储液罐供应供体组织，并保护其在血管化的初始时间不干燥。这部电影展示了鸡血球在胚胎小鼠肾脏中心移植到鸡CAM和培养七天的流动。此图面板显示，我们改进的 CAM 培养方法为肾脏衍生内皮细胞提供了宽松的条件。
图 A 和 B 显示，在天间隔培养中生长五天的胚胎肾脏被中心移植到鸡 CAM 中五天。与小鼠特异性CD-31抗体染色表明，肾中心的内皮细胞网络移植到CAM比在左侧控制更为广泛。在图C中，我们看到老鼠血管沾满了小鼠特异性CD-31抗体，这是鸡血管最多的。
图D和E显示，在旅行培养物或鸡肉CAM上生长了五天，并沾有CD-31和霍赫斯特的小鼠胚胎肾脏的冷冻。在鸡 CAM 培养的肾脏中， 球状血管比在控制培养中更成熟。图F显示一只小鼠胚胎肾在CAM上培养的转基因GP鸡7天。
小鼠内皮细胞沾染CD-31抗体，我们可以观察到，异种移植小鼠肾脏的血管主要是，但并不完全是小鼠衍生的。新颖的固定方向培养允许在有限的固定距离内培养胚胎肾和器官。在传统的旅行文化中，培养的器官被放置在由金属网格保存在空气介质界面中的过滤器上。
此方法为开发和生长提供了良好的条件，但对成像来说并非最佳。在固定方向培养中，培养的器官被压在盘子的玻璃底部和膜之间，其厚度由作为垫片工作的聚苯乙烯珠控制。发育器官可以通过盖玻璃进行成像，从而改善器官的视图。
该图组表明，胚胎肾和肾器官可以采用固定方向培养方法进行培养。第七天胚胎肾脏和肾脏器官的明亮场图像显示正常发育。在图C中，图D在肾脏器官的发育中激活了GGFB表达，图D显示了一个肾外伤，一个在尿芽上染色，六个两个染色标记肾前体细胞。
数字E和F显示小鼠肾脏培养12天。创伤一和肾上染色显示的 eurethric 芽和 podocites 。这部电影也呈现了台湾火细胞MTMG的胚胎肾，台湾信条在内皮细胞中诱导GFB表达。
我们可以看到，肾内皮细胞存在于发育中的胚胎肾中，内皮网络也可以在培养方法中发展。在右侧的面板中，您可以看到内皮细胞如何迁移到 S 形舞台肾的血管裂口中。在这里，我们提出了改进的异种移植肾脏器官和胚胎肾脏鸡CAM的改进方案。
该协议显著增加肾脏基和其内在内皮细胞的生存。该方法使血液流向发育中的血液。这里提出的另一个方案是固定方向器官培养方法，该方法提高了成像质量，有助于研究单细胞级别的细胞器起源。
高分辨率图像适用于自动细胞分割和基于计算机的肾脏器官和肾脏培养物细胞行为研究。
