大规模混合阶段 卡诺哈布迪蒂斯电子 人种群的文化和分析

这项技术使我们能够收集大规模蠕虫群，以便以最小的操作用于多个生物平台。这项技术使我们能够在多个经济学实验中收集混合阶段C.elegans种群，从而获得每个样本的整体图景。要将青菜成人当场漂白到大型培养板上，请点燃一只蠕虫，在 Bunsen 燃烧器上采摘，然后用采摘剂将新鲜的大肠杆菌从细菌草坪边缘铲到大型培养板上。

从第四块板中挑选一个gravid成人进行点漂白，并在远离大肠杆菌草坪的大型文化板的一角加入五微升新鲜制备的碱性次氯酸盐溶液。将青菜成人放入碱性次氯酸盐溶液中，并轻敲线虫，以扰乱皮质层并释放卵子。当总共有五个成年人以同样的方式均匀地放置在大肠杆菌草坪周围时，将盖子放回盘子上。

为了从大型培养板中采集样品，将50毫升的M9溶液倒入一个大型培养板表面并旋转板，以确保M9覆盖整个线虫生长介质表面。用 M9 将无菌血清学移液器倒入板中，使 M9 和蠕虫群聚集在板的一角。使用引物移液器吸气蠕虫悬架，并将蠕虫添加到 50 毫升圆锥管中。

将管子放在摇动器上，以破坏任何细菌团块和碎屑。当所有蠕虫都从所有三个板中收集时，将每根管子中的15毫升蠕虫转移到三个15毫升的圆锥管中，并通过离心将蠕虫沉积在管中。小心吸气超细产者，不干扰蠕虫颗粒，并在每个管中加入13毫升蠕虫悬架。

倒置管子以补充颗粒，尽可能多地洗掉细菌和碎屑，并再次离心蠕虫。收集完所有蠕虫群后，每次洗涤10毫升新鲜M9溶液中洗三次蠕虫颗粒。最后一次洗涤后，将每个清洁过的蠕虫颗粒在10毫升的双蒸馏水中恢复。

对于人口规模估计，请快速稀释每个管中每个管中 900 微升 M9 溶液中的三个 100 微升蠕虫样本，并使用阿里库进行连续稀释。将股票蠕虫样本悬浮在摇动器上，以持续移动文化，同时计算阿里库，并混合蠕虫稀释，直到它们均匀。将从第一个到 10 个蠕虫样本的 5 微升溶液添加到玻璃显微镜幻灯片中，然后通过光显微镜数数蠕虫。

如果样本中蠕虫少于 50 种，则数一数 1：100 和 1：1，000 稀释。如果蠕虫超过 50 个，则移动到下一个序列稀释。在计算了每次稀释的每种稀释的复制品三次后，平均稀释计数以确定蠕虫的估计种群大小。

然后将蠕虫样本分成适当的实验性元素，并闪光冻结样品在液氮中，以储存零下80摄氏度。要为大颗粒流动细胞测量准备蠕虫样本，将大约 5 倍 10 到第四混合阶段蠕虫稀释到 M9 溶液的最终体积为 10 毫升，并在蠕虫悬架中加入 200 微升每毫升 1 毫克大肠杆菌和 1：50 稀释 0.5 微摩尔红色荧光微球溶液。在室温下用摇动进行20分钟的孵化后，通过离心收集蠕虫和微球，用新鲜的M9溶液两次清洗蠕虫，以去除任何多余的细菌和未内化的微球。

第二次洗涤后，用五毫升M9溶液重新接射颗粒。如果颗粒看起来干净，在蠕虫中加入5毫升M9，并加入50毫升钠，并将管子放在摇杆上，以拉直和安乐死蠕虫，以准确计数和大小。对于人口分布文档，打开校准的 384 井板模板，并设置模板，将 20 个门禁对象分配到四个井中，以便为样本的 20 个栏区中的每一个区域获取每个门控区域的四个技术复制品。

将 40 毫升蠕虫样本加载到大颗粒流细胞仪上，然后开始自动分拣样品，同时连续搅拌样品以防止沉降，同时将样品中的物体分配到校准的 384 井板中。一旦对整个样品进行分类，并将最大数量的门控区域分配到 384 井板中，从细胞仪中取出样品并清洁仪器。大规模培养板方法在15株C.Elegans上进行了测试，包括卡诺哈布迪炎遗传学中心突变体和卡诺哈布迪蒂斯埃莱甘斯自然多样性资源野生菌株的混合物。

在这项分析中，大规模文化板块方法产生的人口规模从大约94，500到9，290，000。参考菌株PD1074和跨菌株的平均种群规模约为240万蠕虫。在平均12.2个大型文化板块生长日中，C.elegans菌株之间的估计种群数量没有显著差异。

PD1074大型文化板块历时10至14天，发展到完全混合阶段人口，平均增长时间为12.2天。生长最慢的菌株最多生长20天，增长最快的菌株最多生长10天。在PD1074的样本分布中，蠕虫通过大粒子流细胞仪上的成年虫从L1阶段测量。

随后对样本中人口分布变化的成像和可视化表明，该管道产生了C.elegans的混合阶段种群。重要的是要准确计算整个样本收集中的蠕虫，以便您获得跨增长和研究可比的数据。此收集方法可应用于RNA测序、基因组学和其他经济学分析，以扩大我们对 C.elegans 种群中发生的复杂动态的理解。

这项技术使我们能够在多个经济学实验中收集混合阶段的C.elegans种群，从而获得每个样本的整体图景。