一种新生儿啮齿动物气管内滴注药物治疗肺部疾病的微创方法

该协议表明，可以通过直接可视化将研究材料灌输到五天大的新生大鼠幼崽的气管中。该方法通过直接可视化提高了将研究材料或药物施用到气管中的可靠性。通过避免注射到气管中，这种方法可以减轻疼痛，更重要的是，出血进入气管，从而提高生存率。

执行此方案需要发展精细技能，包括动物的适当定位，正确使用操作自动内窥镜来可视化声带，以及向肺部给药的有效性。演示该程序的将是来自我实验室的博士后研究员Tara Sudhadevi和研究生Alison Ha。在开始实验之前，确认麻醉的五天大鼠幼崽的尾巴和踏板反射丧失，并使用实验室标记胶带将幼崽限制在倾斜45度的平坦平台上的仰卧位。

使用钝镊子轻轻地将舌头拉到一侧，并在两毫米直径耳镜窥器的帮助下，轻轻地将舌头保持在适当的位置，以便喉部可见。使用具有正确尺寸窥器的手术耳镜，通过耳镜的放大镜定位声带。对于气管内滴注，上样一个装有长角度凝胶加载移液器尖端的1毫升注射器，其中空气为0.9立方厘米，然后是30至50微升的目标物质。

将移液器吸头弯曲至30度角，并将装载的移液器吸头穿过窥器插入声带外约两毫米处。推动注射器的活塞以将感兴趣的物质和空气通过窥器输送到声带中。当所有物质都已输送完毕后，将幼犬放在38摄氏度的集成循环流体加热垫上，并进行监测，直到定期呼吸，然后将幼犬与大坝团聚。

为了评估该物质在肺组织样本中的分布，用70%乙醇擦拭安乐死大鼠幼崽的胸部和腹部，并使用无菌技术根据标准方案去除肺部进行视觉评估。在这项研究中，通过对一只五天大的大鼠幼崽滴注有Evans蓝色染料的肺组织进行目视检查来评估气管内滴注技术的疗效。滴注效率接近100%，因为染料在给药后立即扩散到肺部，并分布在肺组织的所有肺叶上。

在肺以外的任何组织中均未观察到染料，这证实了该技术用于选择性地将感兴趣的治疗方法递送到肺部的能力。将动物最初以正确的角度放置在坚固的表面上对于使用操作自动内窥镜可视化声带的下一步的成功至关重要。