このプロトコルは、直接可視化によって、生後5日の新生児ラットの仔の気管に研究材料を注入することが可能であることを実証する。この方法は、直接可視化することにより、気管内への研究材料または薬物の投与の信頼性を向上させる。気管への注射を避けることによって、この方法は痛みを軽減し、さらに重要なことに、気管への出血を軽減し、生存率の向上を可能にする。
このプロトコルを実行するには、動物の適切な位置決め、声帯を視覚化するためのオートスコープの操作の正しい使用、肺への投与の有効性など、細かいスキルの開発が必要です。この手順を実演するのは、私の研究室のポスドク研究員であるTara Sudhadeviと大学院生のAlison Haです。実験を開始する前に、麻酔をかけられた生後5日のラットの子犬の尾とペダルの反射の喪失を確認し、実験室のラベリングテープを使用して、45度に傾斜した平らなプラットフォーム上で臥位で子犬を拘束します。
鈍い鉗子を使用して舌を片側に静かに引っ張り、直径2ミリメートルの耳鏡鏡の助けを借りて、喉頭が見えるように舌をそっと所定の位置に保持します。正しいサイズの鏡面鏡で手術用耳鏡を使用し、耳鏡の拡大レンズを通して声帯を見つけます。気管内点滴の場合は、長角度のゲルローディングピペットチップを取り付けた1ミリリットルのシリンジに0.9立方センチメートルの空気を装填し、続いて30〜50マイクロリットルの目的の物質を装填します。
ピペットチップを30度の角度に曲げ、装填したピペットチップを鏡面を通して声帯から約2ミリメートル先に挿入します。シリンジのピストンを押して、目的の物質と空気を鏡面を通して声帯に投与します。すべての物質が送達されたら、子犬をダムと再会させる前に、通常の呼吸まで監視しながら摂氏38度の統合された循環流体加熱パッドに子犬を置きます。
肺組織サンプル内の物質の分布を評価するには、安楽死させたラットの子犬の胸部および腹部を70%エチルアルコールで拭き取り、視覚的評価のための標準プロトコルに従って滅菌技術を使用して肺を除去します。この研究では、気管内点眼技術の有効性を、エバンスブルー色素を点眼した5日齢のラット仔から採取した肺組織の目視検査によって評価した。点眼はほぼ100%効率的であり、色素は投与直後に肺に広がり、肺組織のすべての葉に分布した。
この色素は、肺の外側のどの組織においても観察されず、肺への目的の治療の選択的送達に使用される技術の能力を確認した。最初に動物をしっかりとした表面上の正しい角度に配置することは、操作するオートスコープを使用して声帯を視覚化する次のステップの成功に不可欠です。
