Bu protokol, beş günlük yenidoğan sıçan yavrularının trakealarına doğrudan görselleştirme yoluyla araştırma materyali aşılamanın mümkün olduğunu göstermektedir. Bu yöntem, doğrudan görselleştirme yoluyla trakeaya araştırma materyali veya ilacın uygulanmasının güvenilirliğini arttırır. Trakeaya enjeksiyondan kaçınarak, bu yöntem ağrıyı ve daha da önemlisi trakeaya kanamayı azaltarak hayatta kalmanın artmasını sağlar.
Hayvanın uygun şekilde konumlandırılması, ses tellerini görselleştirmek için otoskopun doğru kullanımı ve akciğerlere uygulamanın etkinliği de dahil olmak üzere bu protokolü gerçekleştirmek için ince becerilerin geliştirilmesi gerekmektedir. Prosedürü gösteren, laboratuvarımdan doktora sonrası bir araştırmacı olan Tara Sudhadevi ve yüksek lisans öğrencisi Alison Ha olacak. Deneye başlamadan önce, anestezi uygulanmış beş günlük bir sıçan yavrusunda kuyruk ve pedal refleksi kaybını onaylayın ve yavruyu 45 dereceye eğimli düz bir platformda sırtüstü pozisyonda tutmak için laboratuvar etiketleme bandı kullanın.
Dili yavaşça bir tarafa çekmek için künt forseps kullanın ve iki milimetre çapında bir otoskop spekulum yardımıyla, dili gırtlak görünecek şekilde yavaşça yerinde tutun. Ameliyat otoskobunu doğru boyutta spekulumla kullanarak, ses tellerini otoskopun büyüteç merceğinden bulun. İntratrakeal damlatma için, 0,9 santimetreküp hava içeren uzun açılı, jel yüklemeli bir pipet ucu ile donatılmış bir mililitrelik bir şırıngayı ve ardından ilgilenilen maddenin 30 ila 50 mikrolitresini yükleyin.
Pipet ucunu 30 derecelik bir açıyla bükün ve yüklenen pipet ucunu spekulumdan ses tellerinin yaklaşık iki milimetre ötesine yerleştirin. İlgilenilen maddeyi ve havayı spekulumdan ses tellerine uygulamak için şırınganın pistonunu itin. Tüm madde teslim edildiğinde, yavruyu barajla yeniden birleştirmeden önce, yavruyu düzenli solunuma kadar izleyen 38 santigrat derece entegre bir dolaşım sıvısı ısıtma yastığı üzerine yerleştirin.
Maddenin bir akciğer dokusu örneği içindeki dağılımını değerlendirmek için, ötenazi sıçan yavrularının göğsünü ve karnını% 70 etil alkol ile silin ve akciğerleri görsel değerlendirmeleri için standart protokollere göre çıkarmak için steril teknik kullanın. Bu çalışmada, trakea içi damlatma tekniğinin etkinliği, Evans mavi boyası ile aşılanmış beş günlük bir sıçan yavrusundan toplanan akciğer dokusunun görsel muayenesi ile değerlendirilmiştir. Damlatma neredeyse% 100 verimliydi, çünkü boya uygulamadan hemen sonra akciğere yayıldı ve akciğer dokusunun tüm loblarına dağıldı.
Boya, akciğerlerin dışındaki herhangi bir dokuda gözlenmedi ve tekniğin akciğerlere ilgi çekici bir terapinin seçici olarak verilmesi için kullanılabileceğini doğruladı. Hayvanı başlangıçta sağlam bir yüzey üzerinde doğru açıda yerleştirmek, çalışan otoskop kullanarak ses tellerini görselleştirmenin bir sonraki adımının başarısı için çok önemlidir.
