超中心对等离子脂蛋白的分离和分析

血浆脂蛋白的分析对于高脂血症的诊断和动脉粥样硬化研究具有十分重要的意义。在此协议中，我们将引入使用超中心化分离等离子脂蛋白的基本方法。这种方法允许研究人员使用一毫升血浆分离七个脂蛋白分数。

这些分数可用于脂质、阿波利波蛋白以及功能良好的研究这种方法可用于人类和动物样本，用于诊断血脂异常和相关疾病。首先将一毫升等离子体转移到每个聚碳酸酯超中分子管中。然后将管子装在固定角度转子中，在 35.6 万倍 G 下将等离子体离心，在 4 摄氏度下进行 2.5 小时。

将管切片机中刀片的位置调整到顶部部分和底部部分之间的水平。使用切片机切割管子，并将顶部部分（约 200 微升）收集到新的微管中。将剩余的底部部分收集到一个新的聚碳酸酯超中分子管中，用于下一次分离。

通过添加相同的密度解决方案，将总体积调整为 800 微升。通过添加 58.9 微升每毫升溶液 1.21 克的密度，将底部分数调整为每毫升 1.02 克的密度，为每毫升溶液添加 141.1 微升，总体积为 1 毫升。将这些管子装在固定角转子和离心机中，在 356，000 倍 G 中加载 2.5 小时，温度为 4 摄氏度。

继续收集最高分数，调整底部分数的密度，离心，每毫升的分数密度为 1.02、1.04、1.06、1.08、1.1 和 1.21 克。对于最后的超中心，离心机在51.3万倍G四个小时在4摄氏度。这里显示了喂食正常标准饮食或高胆固醇饮食的兔子的脂蛋白特征。

兔子是食草动物，因此它们的血浆TC、TG和PL水平通常低于人类和小鼠。在正常标准饮食喂养的兔子中，TC主要分布在HDL3和低密度脂蛋白中。在正常标准饮食的野生类型兔子中，39%的血浆TG分布在VLDL中，而57%的血浆PL包含在HDL3中。

当兔子受到高胆固醇饮食的挑战时，它们会迅速发展成高胆固醇血症。他们的脂蛋白特征是VLDLs的显著升高。 野生型兔子的七个脂蛋白分数以正常标准或高胆固醇饮食为食，在SDS聚丙烯酰胺凝胶上运行，并带有CBB染色。

在高胆固醇饮食中，VLDL、IDL 和 LDL 中的 ApoB-100 和 ApoE 含量均显著升高。西方的印迹被用来比较三种不同高脂兔子的无脊髓灰质素和脂蛋白特征:高胆固醇饮食喂养的野生类型兔子、ApoE淘汰兔子和患有低密度脂蛋白受体缺陷的渡边可遗传超脂兔子。含有高胆固醇饮食喂养野生类型兔子颗粒的ApoB的特点是增加ApoB-100和ApoE含量，而ApoE淘汰兔子显示ApoB-48随着ApoA-1的出现而增加。

渡边可遗传性高脂兔子在基因上缺乏低密度脂蛋白受体功能，因此在LDL中ApoB-100显著增加，在高密度脂蛋白中发现ApoA-1减少，类似于人类家族性高胆固醇血症患者。在此过程中，样本恢复是最关键的。为了尽量减少样品损失，应小心收集分数，并完全溶解底部部分的粘性沉淀。

收集七个脂蛋白分数后，需要透析进行排序。透析完成后，脂蛋白样品使用SDS页面、西式印迹和基于细胞的研究进行分析。在临床环境中，超中心化通常将脂蛋白分成四个部分。

目前的方法可以分离七个脂蛋白分数，这提供了脂蛋白的更多细节，用于研究高脂血症。