斑马鱼游泳期间后横向线阿弗伦特神经元的活动

该协议使研究人员能够监测单个感觉神经元在完整行为椎骨中对受控刺激的活动和反应。此贴片电生理学是实时记录单个神经元尖刺活性快速而直接的方法。这比大多数光学成像技术以更低的成本提供了更好的时间分辨率和灵敏度。

横向线毛细胞与人类内耳的毛细胞同源。因此，这项技术有望揭示适用于人类耳聋和听力障碍的毛细胞回路的特性。电生理学是一种使用精细运动技能的工艺，需要观察和身体模仿。

仅文本说明会留下太多的误解空间。首先，将一层薄薄的自混合硅胶弹性体（如 Sylgard）放入盖玻璃底组织培养盘中，制作硅胶弹性体底部记录盘。要进行解剖引脚，请使用直流电源向 Etchant 的 100 毫升烧嘴提供 5 伏的负电荷，并将钨丝连接到正电荷输出上。

反复将电线尖浸入埃昌特浴缸中，直到尖端变窄到尖点。在立体显微镜下，用直边剃须刀刀片将电线从尖端切开约一毫米。重复三次，然后使用细钳将引脚插入固化的录音盘中。

要准备录制电极，使用带盒长丝的微皮拉器拉动薄薄玻璃毛细管。电极应有一个直径为 30 微米的尖端，带有锥度，用于记录后横向线的通风神经元。将额外的薄氧玻璃毛细管拉入一对直径较小的一至五微米尖端的电极中。

每只手握住一个电极，轻轻地将提示相互碾过，以打破提示。使用微型锻造机，抛光斜面尖端，直到光滑。最终尖端直径应在 30 至 50 微米之间。

固定斑马鱼幼虫，并转移到35毫米的培养皿使用大尖转移移液器。尽可能多地删除周围的解决方案。将幼虫浸入10微升0.1%的α-邦加罗毒素中约5分钟。

用细胞外溶液清洗瘫痪的幼虫10分钟。然后，使用转移移液器将幼虫从细胞外溶液浴转移到硅胶底录制盘。在立体显微镜下，用细尖的钳子轻轻地将幼虫放置在这个硅胶垫的中心上方，侧面与身体的前部和后部从左到右运行。

使用细尖钳，通过幼虫的后部诺乔德直接向肛门插入边缘针正交到硅胶上。将第二个针穿过靠近尾部的鼻梁，并通过气囊的鼻梁插入第三个针脚。通过声波囊插入第四个销，同时提供轻微的旋转，因为销插入封装剂。

当应用轻微的旋转时，注意和象形囊泡之间的组织，以显示发热的索马塔集群。将针幼虫置于 DIC 显微镜固定阶段的 10 倍目标下，并定向与左头阶段矢量平行的肌肉块的感官裂口。将接地线放入浴缸溶液中，并确保连接到左头舞台。

使用灵活的凝胶加载移液器尖端填充 VR 记录电极，并将其插入左头级移液器支架。将放大倍数提高到 40 倍，将记录移液器降低到盘中，同时施加气动传感器产生的正压。将电极尖端在两个肌膜腹腔之间的肌塞上带到横向线，直到裂口以VR电极尖孔径为中心，降低移液器，直到尖端孔径的滞后边缘轻轻地接触上皮。

初始接触后，对角操纵移液器，以确保前缘进行接触并生成密封。使用气动传感器施加负压并按住它。在补丁夹软件中，单击工具栏上的"播放"按钮以监控 VR 信号。

一旦观察到具有威尔斯定型突发信号动力学的运动神经元活动，确保实现 VR 记录。将通风记录电极填充 30 微升细胞外溶液，并插入右头级移液器支架。然后将其降低到盘中溶液中，同时施加气动传感器产生的正压。

定位电极，并将电极尖端带到标本上。使用微操纵器，降低心电极尖端，直到它保持在夹层上方的位置。将放大倍数增加到浸入的 40 倍，并定位后横向线神经和夹板的交叉点。

将电极尖端带过发泡的结节，降低移液器，直到尖端接触上皮。轻轻地，操纵电极，使整个尖端周长接触到发热的结节。使用气动传感器施加负压并按住它。

单击补丁夹软件中的 Play 后，确保当峰值大约每 100 到 200 毫秒自发发生时，实现整个细胞松散的神经元贴片记录。检测到异常神经元和运动神经元活动后，单击峰值夹 10 工具栏上的"记录"按钮，以捕获两个通道中同时无间隙的录制。执行文本手稿中描述的数据预处理。

使用此无间隙记录协议，可以同时测量有声神经元和VR神经元的实时活动。自定义编写的预处理脚本生成图，以便使用阈值、最小持续时间和最小间歇间隔等参数帮助可视化峰值检测。通过调整预处理脚本中的下界和上界检测变量来获得隔离信号。

文特尔根尖峰检测遵循相同的参数与额外的输入。电机命令内的爆发由至少持续 5 毫秒的 0.1 毫秒内的两个峰值定义，并以至少三次爆发的间隔小于 200 毫秒的突发性划定，预处理脚本将覆盖在明确定义的兴趣期内进入的通风活动的部分。在这种情况下，平均自发活动显示对 X 轴上描述的运动活动开始的反应发生巨大变化，时间等于零。

游泳前峰值速率与游泳后峰值速率之间存在显著差异。异常峰值率与游泳持续时间呈负相关。未检测到相对峰值速率和游泳频率之间的相关性。

动物健康是尝试这个程序时最重要的事情。监测快速血液流动不仅能确保动物的福利，还能增加神经记录成功的可能性，这一点至关重要。通过利用斑马鱼现有的遗传工具，这种电生理学协议可以通过转基因线来有力地研究毛细胞系统内外的解剖和功能电路连接性。

这种对贴片夹紧钳技术的简化修改使我们能够监控感官系统在体内的功能。