ApoE小鼠后肢缺血的改进手术模型^-/- 使用微型切口

我们今天介绍的是一种简化的改良和手术有效的方法，用于在ApoE小鼠中建立后肢缺血。这种方法可以在任何动物设施中实现。滑膜方法的主要优点是侵入性低，使用小于五毫米的切口。

该方法具有学习功能。因此，我们建议在对动物进行研究之前，先在显微外科模型上进行练习，这些模型将包含在最终分析中。该方法将由医学博士和我实验室的学生Kaixuan Yan演示。

首先准备手术所需的设备和工具。在对小鼠进行麻醉后，将软膏涂抹在眼睛上以防止干燥。然后将鼠标放在加热垫上，将核心体温保持在约37摄氏度。

使用棉签和脱毛膏，小心地从右侧的后肢皮肤上去除毛发。将鼠标置于解剖显微镜下加热垫上的仰卧位。使用酒精对皮肤进行消毒，并用棉花擦拭，远离切口的植物侧。

使用尖镊子和手术剪刀在腹股沟区域中间做一个大约三到四毫米的切口。在细尖镊子的帮助下，小心地去除皮下脂肪组织，以暴露股骨近端神经血管束。使用用盐水润湿的棉签，小心地将股动脉移离股神经和股静脉。

然后使用7.0缝合线的尖端，小心地刺穿股鞘的膜。然后通过股骨近端动脉进入7-0可吸收缝合线，并使用弹簧剪刀进行双结。然后横切两根领带之间的股动脉。

将6-0可吸收缝合线穿过切口的下边缘，轻轻地将切口拖到后肢膝盖右侧区域，以暴露股骨远端动脉。小心地将皮下组织移到一边，露出神经血管束。从股静脉和股神经中解剖股动脉，并用棉花保护神经。

然后使用7.0缝合线的尖端，刺穿股骨鞘的膜。通过两条7-0可吸收的缝合线穿过股骨远端动脉，并使用弹簧剪刀在两根领带之间横切股动脉，形成双结。之后，使用6-0可吸收缝合线缝合切口。

将鼠标放在干净的笼子中的加热垫上，并继续监测其重要参数，直到恢复。第二天通过 MRI 确定股动脉双结扎或 DLFA 的成功率。在DLFA手术之前，小鼠的重量范围为29.6至38.0克。

DLFA手术后七天，体重范围从26.5克到34.1克，明显低于DLFA手术前的体重。右FA的近端和远端区域没有灌注。手术后一天，塔尔洛夫量表结果显着降低。

虽然它们在接下来的几天里缓慢增加，但直到第七天，它们仍然低于基线。与对侧相比，七只小鼠缺血性后肢的爪子无法自然伸展。此外，与对侧相比，其中四只小鼠的爪子表现出轻微的变色。

右GM肌肉的H&E染色显示肌纤维表现出不规则缺血性坏死，其中增殖的卫星细胞取代了坏死的肌纤维，并以团块或规则的分散分布。多核巨噬细胞表现出炎症浸润的肌纤维已经失去了正常的形态特征，只有很少的再生肌纤维存在。这些再生肌纤维的横截面是圆形的。

细胞质被染成红色，中心有一个小核或多个细胞核。然而，在左GM中没有观察到这种炎症模式。进行CD31抗体染色观察微血管密度，表明缺血性后肢表现出明显高于非缺血侧的微血管密度。最重要的是解剖股动脉。

操作人员需要具有显微外科技术方面的经验，并熟悉小鼠后肢解剖结构。原则上，这种方法也可用于研究腿部缺血再灌注损伤。因此，在允许再灌注之前，可以用软血管钳堵住动脉。