Lo que presentamos hoy es un método simplificado modificado y quirúrgicamente eficiente, para establecer la isquemia de las extremidades posteriores en ratones ApoE. Este método se puede implementar en cualquier instalación de animales. La principal ventaja del método sinovial es una baja invasividad, utilizando una incisión de menos de cinco milímetros.
El método tiene un hof de aprendizaje. Por lo tanto, aconsejamos practicar en modelos microquirúrgicos antes de trabajar en los animales, que se incluirán en el análisis final. El método será demostrado por Kaixuan Yan, un doctor en medicina y el estudiante de mi laboratorio.
Comience por preparar el equipo y las herramientas necesarias para la cirugía. Después de administrar la anestesia al ratón, aplique ese ungüento en los ojos para prevenir la sequedad. Luego coloque el mouse en una almohadilla térmica para mantener la temperatura corporal central a aproximadamente 37 grados centígrados.
Usando un hisopo de algodón y una crema depilatoria, elimine cuidadosamente el vello de la piel de la extremidad posterior en el lado derecho. Coloque el ratón en posición supina sobre la almohadilla térmica bajo un microscopio de disección. Use alcohol para desinfectar la piel y limpie con el algodón lejos del lado de la planta de la incisión.
Usando las pinzas puntiagudas y las tijeras quirúrgicas se realiza una incisión de aproximadamente tres a cuatro milímetros en el centro de la región inguinal. Retire cuidadosamente el tejido graso subcutáneo con la ayuda de fórceps puntiagudos finos para exponer el haz neurovascular femoral proximal. Usando un hisopo de algodón humedecido con solución salina, mueva cuidadosamente la arteria femoral lejos del nervio femoral y la vena femoral.
Luego, usando la punta de una sutura 7.0, perfore cuidadosamente la membrana de la vaina femoral. Luego pase a 7-0 suturas absorbibles a través de la arteria femoral proximal y haga nudos dobles usando las tijeras de resortes. Posteriormente transecta la arteria femoral entre los dos lazos.
Pase la sutura absorbible 6-0 a través del borde inferior de la incisión y arrastre suavemente la incisión a la región del lado derecho de la rodilla de la extremidad posterior para exponer la arteria femoral distal. Mueva con cuidado el tejido subcutáneo a un lado para exponer el haz neurovascular. Diseccionar la arteria femoral de la vena femoral y el nervio femoral, y usar algodón para proteger el nervio.
Luego, usando la punta de una sutura 7.0, perfore la membrana de la vaina femoral. Pase dos suturas absorbibles 7-0 a través de la arteria femoral distal y haga nudos dobles usando las tijeras de resorte para transectar la arteria femoral entre dos lazos. Después, sutura la incisión con las suturas absorbibles 6-0.
Coloque el ratón en una almohadilla térmica en una jaula limpia y continúe monitoreando sus parámetros vitales hasta la recuperación. Determinar el éxito de la doble ligadura de la arteria femoral o DLFA al día siguiente a través de una resonancia magnética. Antes del procedimiento DLFA, los pesos de los ratones oscilaban entre 29,6 y 38,0 gramos.
Siete días después de la cirugía DLFA, los pesos variaron de 26.5 a 34.1 gramos, significativamente más bajos que los pesos pre-DLFA. Las regiones proximal y distal de la AF derecha no mostraron perfusión. Los resultados de la escala de Tarlov disminuyeron significativamente un día después de la cirugía.
Aunque aumentaron lentamente durante los días siguientes, todavía fueron más bajos que la línea de base hasta el día siete. Las patas de las extremidades posteriores isquémicas en siete ratones no pudieron estirarse naturalmente en comparación con el lado contralateral. Además, cuatro de los ratones exhibieron una ligera decoloración de las patas en comparación con el lado contralateral.
La tinción H&E del músculo GM derecho reveló miofibras que exhibían necrosis isquémica irregular, donde las células satélite proliferantes habían reemplazado a las miofibras necróticas y se distribuían en una masa o con una dispersión regular. Las miofiberes que exhibían infiltración inflamatoria por macrófagos multinucleados habían perdido sus características morfológicas normales, con muy pocas miofibras regeneradas presentes. Las secciones transversales de estos miofibras regeneradas eran redondas.
El citoplasma se tiñó de rojo y un núcleo pequeño o múltiples núcleos se localizaron en el centro. Sin embargo, este tipo de patrón inflamatorio no se observó en el GM izquierdo. La tinción de anticuerpos CD31 realizada para observar la densidad microvascular, indicó que las extremidades posteriores isquémicas exhibieron significativamente más densidad microvascular que el lado no isquémico. Lo más importante es la disección de la arteria femoral.
El operador debe tener experiencia en técnicas microquirúrgicas, así como estar familiarizado con la anatomía de las extremidades posteriores del ratón. En principio, este método también podría utilizarse para estudiar la lesión por isquemia-reperfusión en la pierna. Por lo tanto, la arteria se puede ocluir con una abrazadera de vaso blando antes de permitir la reperfusión.
