우리가 오늘 소개한 것은 ApoE 마우스에 뒷다리 이혈증을 확립하기 위하여 단순화된 수정되고 외과적으로 능률적인 방법입니다. 이 방법은 모든 동물 시설에서 구현할 수 있습니다. 용압 방법의 주요 장점은 5 밀리미터 미만의 절개를 사용하여 낮은 침습성입니다.
이 방법에는 학습 hof가 있습니다. 따라서 최종 분석에 포함될 동물에 대해 작업하기 전에 미세 수술 모델을 연습하는 것이 좋습니다. 이 방법은 의학 의사인 Kaixuan Yan과 제 실험실의 학생에 의해 입증될 것입니다.
수술에 필요한 장비와 도구를 준비하여 시작합니다. 마우스에 마취를 투여 한 후, 건조를 방지하기 위해 눈에 그 연고를 적용합니다. 그런 다음 마우스를 가열 패드에 놓고 코어 체온을 섭씨 약 37도에서 유지합니다.
면 봉면과 제모 크림을 사용하여 오른쪽의 뒷다리 피부에서 모발을 조심스럽게 제거합니다. 해부 현미경아래 가열 패드의 척추 위치에 마우스를 놓습니다. 알코올을 사용하여 피부를 소독하고 절개 의 식물 측에서 멀리 면으로 닦아.
뾰족한 집게와 외과 가위를 사용하여 인구이날 부위의 한가운데에서 약 3~4밀리미터절개를 한다. 조심스럽게 근위 대퇴 신경 혈관 번들을 노출하는 미세 뾰족한 집게의 도움으로 피하 지방 조직을 제거합니다. 식염수로 촉촉한 면봉을 사용하여 대퇴동맥을 대퇴신경과 대퇴정맥에서 조심스럽게 옮겨서 움직입니다.
그런 다음 7.0 봉합사의 끝을 사용하여 대퇴 칼집의 막을 조심스럽게 관통합니다. 그런 다음 근위 대퇴 동맥을 통해 7-0 흡수 가능한 봉합사에 전달하고 스프링 가위를 사용하여 이중 매듭을 만듭니다. 그 후 두 관계 사이의 대퇴 동맥을 분리.
절개 하부 가장자리를 통해 6-0 흡수 가능한 봉합사를 통과하고 후드 사지의 무릎 오른쪽 부위로 절개를 부드럽게 드래그하여 태아 동맥을 노출시합니다. 조심스럽게 피하 조직을 옆으로 움직여 신경 혈관 번들을 노출시합니다. 대퇴정맥과 대퇴신경으로부터 대퇴동맥을 해부하고 면화로 신경을 보호한다.
그런 다음 7.0 봉합사의 끝을 사용하여 대퇴 칼집의 막을 관통합니다. 두 개의 7-0 흡수 성 봉합사를 탈모 성 동맥을 통과하고 스프링 가위를 사용하여 두 개의 동점 사이의 대퇴동맥을 트랜스포메이크합니다. 그 후, 6-0 흡수성 봉합사를 사용하여 절개를 바느질한다.
깨끗한 케이지에 가열 패드에 마우스를 놓고 복구 될 때까지 중요한 매개 변수를 계속 모니터링합니다. MRI를 통해 다음 날 대퇴동맥 또는 DLFA의 이중 결찰의 성공을 결정합니다. DLFA 절차 전에, 마우스의 무게는 29.6에서 38.0 그램에 구역 수색했습니다.
DLFA 수술 후 7 일, 무게범위 26.5 받는 사람의 34.1 그램, 이전 DLFA 무게 보다 훨씬 낮은. 오른쪽 FA의 근위 및 탈구 영역은 더 많은 구류를 보여주지 않았다. 탈로프 스케일 결과는 수술 후 하루 만에 크게 감소했습니다.
그(것)들은 다음 일 동안 천천히 증가하더라도, 7 일까지 기준선 보다는 아직도 낮았습니다. 7마리의 마우스에 있는 허혈성 뒷다리의 발은 반대로 측에 비해 자연적으로 스트레칭할 수 없었습니다. 또한, 마우스 의 4개는 반대로 측에 비해 발의 약간의 변색을 나타냈다.
오른쪽 GM 근육의 H&E 염색은 불규칙한 허혈성 괴사를 전시하는 근섬유를 밝혔는데, 여기서 확산위성 세포가 괴사 심섬유를 대체하고 질량또는 정기적인 분산으로 분배되었다. 다핵대식 세포에 의한 염증성 침투를 나타내는 근섬유는 정상적인 형태학적 특성을 잃었으며, 재생된 근섬유가 거의 존재하지 않았다. 이 재생된 근섬유의 횡단 구간은 둥글게 진행되었다.
세포질은 적색으로 염색되었고 하나의 작은 핵 또는 다중 핵이 중앙에 위치했다. 그러나, 염증 패턴의이 종류는 왼쪽 GM에서 관찰 되지 않았다. CD31 항체 염색은 미세 혈관 밀도를 관찰하기 위해 수행, 허혈성 뒷다리가 비 허혈성 측보다 훨씬 더 많은 미세 혈관 밀도를 나타냈다. 가장 중요한 것은 대퇴동맥의 해부입니다.
작업자는 미세 수술 기술뿐만 아니라 마우스 뒷다리 해부학에 익숙해져야합니다. 원칙적으로,이 방법은 또한 다리에 이혈 혈증 -reperfusion 부상을 연구하는 데 사용할 수 있습니다. 이에 따라, 동맥은 재퍼퓨전을 허용하기 전에 부드러운 용기 클램프로 가려질 수 있다.
