非人灵长类动物模型中视网膜色素上皮移植治疗退行性视网膜疾病

视网膜色素上皮移植过程中的中央凹创伤可导致不良视力结局。与传统技术相比，该方法可降低中央凹撕裂的可能性。所提出的方法解决了导致中央凹创伤的多种因素，包括视网膜下粘连的释放，视网膜层的更好可视化以及水疱形成过程中的切向剪切力。

该技术涉及玻璃体内纤溶酶原预处理、显微镜集成OCT引导的视网膜水疱形成以及使用双孔套管的全氟碳液体玻璃体填塞，通过更温和的手术产生中央凹创伤的可能性。高级研究员刘善平博士和研究助理Daniel So Lin Wong先生将演示该程序，他们都来自实验室。高级顾问Gopal Lingam教授也将演示操作程序。

首先，使用Vannas剪刀在边缘附近切开结膜进行360度结膜穿刺，并进行钝性解剖以扩大腹膜。使用25号微型玻璃体视网膜刀片在右眼八点钟或左眼四点钟位置的巩膜上做一个三毫米的切口。插入 25 号定制侧端口输液套管，并使用 7-0 Vicryl 缝合线缝合。

确认玻璃体内位置后，开始平衡盐溶液输注，并将系统设置为维持20毫升汞的眼内压。使用25号平头穿刺器在右眼的两点钟位置或左眼的10点钟位置切开巩膜。将 25 号枝形吊灯插入平头穿刺器，并用胶带固定灯。

将光源调整到约60%在10点钟对右眼或两点钟对左眼进行另一次绝食术，如图所示。在巩膜切开术周围放置一条U形的Vicryl 7-0缝合线，而不打结。通过绝育器插入玻璃体切除术穿刺器。

在入口口周围进行玻璃体切除术，然后进行短芯玻璃体切除术，每分钟最多切割5， 000次，最大吸气量为400毫米汞柱。注射 20 至 50 μL 曲安奈德，以更好地观察玻璃体。将玻璃体与视网膜分开，诱导后玻璃体脱离。

将玻璃体放在视盘上方，以轻柔地诱导玻璃体后脱离。玻璃体仅在吸出时将玻璃体保持在最大400毫米汞柱下，不涉及任何切割。如果需要，使用25号眼内镊子撕裂玻璃体皮层，以促进脱离。

用切刀打开后舌膜，取出脱落的玻璃体裙板，直到玻璃体基底。抽吸视网膜表面任何剩余的曲安奈德。注入一至两毫升全氟碳液体，覆盖后极直至前外周和中外周视网膜。

用视网膜下注射套管进入眼睛。使用 25 x 41 规格定制的双孔视网膜下注射插管或 25 x 38 规格视网膜下注射插管连接到 250 微升注射器进行视网膜下注射。将眼内压设置为零至四毫米汞柱。

轻轻进行视网膜下注射BSS以诱导局部视网膜脱离。一旦水疱穿过中央凹，停止注射BSS。从单独的方向创建第二个气泡。

合并两个凸块以完全分离中央凹。启用术中光学相干断层扫描功能，以可视化血疱形成，确保线和立方体扫描处于高清模式，以在中央凹处获取图像。用一把垂直的25号玻璃体视网膜剪刀将视网膜的切口扩大至1.5毫米，以允许进入视网膜下空间进行移植。

将眼压设置为50毫米汞柱。使用拉丝硅胶吸头套管除去全氟碳液体。使用1.4毫米切口刀延长绝育手术。

输入 20 号可扩展环路仪器，通过刮擦去除黄斑下宿主视网膜色素上皮。将射手装置的尖端插入硬化开除术，并以20毫米汞柱的眼压穿过玻璃体腔。通过视网膜表面形成的视网膜切开术边缘将植入物注入视网膜下空间，细胞载体侧面向Brooks膜，异种移植物面向光感受器。

通过启用术中光学相干断层扫描功能，可视化植入物位置。使用视网膜下注射插管或25号弯曲的眼内剪刀调整植入物位置，以确保植入物平放在视网膜下空间的Brooks膜上，视网膜上覆完整，并且位于远离创建的视网膜切开术的位置，并且不会撞击视网膜切开术部位。使用拉丝硅胶尖端插管进行液气交换，轻轻地从视网膜脱离和视网膜切开术边缘夹合中吸出视网膜下积液，直到视网膜重新附着在植入物上。

然后完成手术，使用预先放置的7-0 Vicryl缝合线关闭工作端口巩膜切开术。在8点钟进行宫腔切开术时，每2毫克玻璃体内注射无防腐剂曲安奈德0.05毫升。取下枝形吊灯和输液套管。

用维克里尔缝合线关闭这些硬化切片。触诊眼睛以确保眼内压在可接受的范围内。如果需要，通过30号针注入过滤空气或BSS。

对各种成像方式进行的左眼黄斑下视网膜色素上皮移植的体内成像长达三个月。眼底照片表明，中央凹处移植的移植物不会随时间迁移。眼底自发光成像显示，与视网膜色素上皮移植物重叠的超自动荧光变化最小。

早期和晚期眼底荧光素血管造影未显示移植物周围有任何渗漏。黄斑光学相干断层扫描图像显示，随着时间的推移，移植物上保留了视网膜外层，这表明视网膜色素上皮细胞的功能。HE染色显示视网膜层完整，没有微撕裂的证据。

术中光学相干断层扫描允许在中央凹脱离期间在术中可视化水疱尺寸和潜在的中央凹撕裂。撕裂的存在会干扰水疱的形成。正确形成水疱的成功表现为没有撕裂。

对于视网膜的功能评估，对视网膜色素上皮异种移植眼进行了全场视网膜电图评估。视网膜电图波形中没有显着恶化表明，杆和视锥光感受器的功能都与异种移植物一起维持。在产生局部视网膜水疱期间，请非常轻柔地进行，因为射流速度的任何突然变化都可能导致中央凹撕裂。

缓慢执行此步骤是减少中央凹损伤的关键。多模态成像，包括眼底自发光、荧光素血管造影和光学相干断层扫描以及电生理学研究，可以更深入地了解移植物的生存能力和影响移植物的因素。