这里的方案用于构建心肌缺血的复合动物模型。结合动脉粥样硬化和PM急性暴露。这是研究相关疾病较为可靠的动物模型。
该动物模型可以更好地模拟真实情况下的此类疾病。此外,这种方法具有很高的成功率并且易于执行。该模型可用于具有复杂因素的疾病的病理研究和药物开发。
该模型可为心血管和环境毒理学研究提供平台,为多因素病害研究提供思路和参考。口腔插管、胸部开口破裂和正确的结扎姿势是该模型成功的关键。保持鼠标简报并防止出血至关重要。
首先随机选择两到三只小鼠,并通过超声成像或直接解剖观察检查主动脉弓中是否有斑块。麻醉选定的鼠标并将其置于鼠标板上的仰卧位置。将上门牙钩在橡皮筋上。
将带有柔性管的小 LED 聚光灯聚焦在气管上,气管位于腋窝线的中点附近。将一小根无菌棉签放入小鼠的嘴里,然后将棉签卷起来将舌头伸出。握住舌头并轻轻向上拉,使口腔、咽部和气管沿同一纵向。
声门是气管的入口,可以看作是每次呼吸时打开和关闭的亮点。通过瞄准声门将22号油菜籽插入小鼠的气管中,然后拔出针芯。使用带有少量生理盐水的移液器枪来测试管子是否正确在喘息中。
如果管子处于正确的位置,移液器枪中的液柱将随着每次呼吸而弹跳。用移液枪将 50 微升 DPM 悬浮液滴入管中。PM 暴露后取下宠物留置针头。
将鼠标放在加热垫上,直到它恢复意识,然后将鼠标放回主笼中。将鼠标仰卧放在插管平台上并固定鼠标。用脱毛膏去除左胸部的毛发和相邻右胸部的一部分。
然后将宠物留置针与动物呼吸机连接。用碘仿和酒精擦拭皮肤进行消毒。用眼科剪刀切开约一厘米的皮肤,支撑肌肉以露出肋骨。
用带齿的眼科镊子夹住肋骨,并在第三肋间隙做一个小切口。用自制的开胸工具制作手术窗口,然后撕开心包膜。使用微血管止血钳用针夹住无菌六零丝缝合线。
将丝绸穿过冠状动脉所在区域的两毫米宽的心肌。在结扎和心肌组织之间放置一小块无菌五零丝,以防止组织破裂。将左前降冠状动脉和它周围的小束心肌紧紧地绑在一起。
当左心室前壁变白时,使馆被视为成功。轻轻挤出胸部的空气。然后依次用无菌的五零丝缝合肋间肌肉和皮肤。
手术后清理所有血迹,然后将鼠标放在加热垫上,侧卧位置。持续监测小鼠体征约5至20分钟,直到它们从麻醉中恢复。恢复矫正反射后,将鼠标转移到装有食物和水瓶的加热垫上的干净恢复笼中。
继续监测15至30分钟,以确保小鼠存活。最后,根据所需剂量肌内注射青霉素钠,以防止伤口感染。通过TTC染色检查缺血程度。
当TTC与琥珀酸脱氢酶反应时,正常组织变为红色。而缺血组织由于脱氢酶活性降低而保持苍白。代表性图像显示了未接受心肌梗死手术或PM暴露的心脏组织,遭受MI手术但没有PM暴露的心脏组织,以及遭受MI手术和PM暴露的心脏组织。
PM暴露加重心肌缺血。油红O可以精确地着色中性脂肪,例如组织中的甘油三酯。图片中的红色斑点表示斑块。
这里通过油红O染色显示常规饮食的野生型小鼠,高脂肪饮食的APO E敲除小鼠和高脂肪饮食的APO E敲除小鼠的主动脉斑块。高脂肪喂养导致APO E基因敲除小鼠动脉粥样硬化和PM暴露加重动脉粥样硬化。确保在血清肌切开术中正确插入气管插管很重要。
操作人员需要快速、准确地完成插管操作,并在操作过程中时刻注意动物的呼吸状况。我们的方法可以帮助关注空气污染和心血管疾病交叉点的研究人员。在这里,我们提供一个想法。
当然,研究人员也可以根据我们描述的动物模型直接进行研究。