ここでのプロトコルは、心筋虚血の複合動物モデルを構築するためのものです。アテローム性動脈硬化症およびPM急性曝露と組み合わせる。これは、関連疾患の研究のためのより信頼性の高い動物モデルです。
この動物モデルは、実際の状況でそのような病気をよりよくシミュレートすることができます。その上、この方法は成功率が高く、実行が簡単です。このモデルは、複雑な要因を持つ疾患の病理学的研究や医薬品開発に使用できます。
このモデルは、心血管および環境毒性学研究のプラットフォームを提供することができ、多因子疾患の研究のためのアイデアと参照に貢献します。口腔気管挿管、胸部のひび割れた開口部、および正しい結紮位置は、このモデルの成功の鍵です。マウスブリーフィングを維持し、出血を防ぐことが不可欠です。
まず、2〜3匹のマウスをランダムに選択し、超音波画像または直接解剖学的観察によって大動脈弓にプラークがあるかどうかを確認します。選択したマウスを麻酔し、マウスボード上の仰臥位に置きます。上顎切歯を輪ゴムに引っ掛けます。
腋窩線の中点付近にある気管にフレキシブルパイプを備えた小さなLEDスポットライトを集中させます。小さな滅菌綿棒をマウスの口に入れ、綿棒を転がして舌を突き出します。舌を持ってゆっくりと引き上げると、口腔、咽頭、気管が同じ縦方向に作られます。
気管の入り口である声門は、呼吸ごとに開閉する明るいスポットとして見ることができます。声門を狙ってマウスの気管に22ゲージのキャノーラを挿入し、針の芯を引き抜きます。少量の生理食塩水を入れたピペットガンを使用して、チューブが喘鳴液に正しく入っているかどうかをテストします。
チューブが正しい位置にある場合、ピペットガンの液柱は呼吸ごとに跳ね返ります。50マイクロリットルのDPM懸濁液をピペットガンでチューブに落とします。PM曝露後にペットの留置針を取り外します。
意識が回復するまでマウスを加熱パッドの上に置いたまま、マウスをホームケージに戻します。挿管プラットフォームの仰臥位にマウスを置き、マウスを固定します。左胸の毛と隣接する右胸の一部を脱毛クリームで取り除きます。
次に、ペットの留置針を動物用人工呼吸器にリンクします。ヨードホルムとアルコールで皮膚を拭いて消毒します。眼科用ハサミで皮膚を約1センチ切り、筋肉を支えて肋骨を露出させます。
歯付きの眼科用ピンセットで肋骨を固定し、3番目の肋間腔に小さな切り込みを入れます。自家製の胸開きツールで手術窓を作り、心膜を引き裂きます。微小血管止血鉗子を使用して針で滅菌6ゼロシルク縫合糸を保持します。
冠状動脈が位置する領域の2ミリメートル幅の心筋に絹を通します。組織の破損を防ぐために、結紮糸と心筋組織の間に滅菌ファイブゼロシルクの短い部分を置きます。左前下行冠状動脈とその周りの心筋の小さな束をしっかりと結びます。
左心室の前壁が青白くなると、公使館は成功したと見なされます。胸から空気をそっと絞り出します。次に、肋間筋と皮膚を滅菌5つのゼロシルクで順番に縫合します。
手術後にすべての血痕をきれいにしてから、マウスを横臥位の加熱パッドに置きます。麻酔から回復するまで、マウスの兆候を約5〜20分間継続的に監視します。.直立反射が回復したら、マウスをフードと水のボトルと一緒に加熱パッドのきれいな回復ケージに移します。
マウスの生存を確実にするために15〜30分間監視を続けます。最後に、創傷感染を防ぐために、所望の用量に従ってペニシリンナトリウムを筋肉内に注射する。虚血の程度はTTC染色により調べた。
TTCがコハク酸デヒドロゲナーゼと反応すると、正常組織は赤くなります。虚血組織はデヒドロゲナーゼ活性の低下のために淡いままである。代表的な画像は、MI手術またはPM曝露を受けなかった心臓組織、MI手術を受けたがPM曝露を受けなかった心臓組織、およびMI手術およびPM曝露を受けた心臓組織を示しています。
PM曝露は心筋虚血を悪化させた。オイルレッドOは、組織内のトリグリセリドなどの中性脂肪を正確に着色することができます。写真の赤い斑点はプラークを示しています。
通常の食事を摂取した野生型マウス、高脂肪食を摂取したAPO Eノックアウトマウス、および高脂肪食でPM曝露を受けたAPO Eノックアウトマウスの大動脈のプラークをオイルレッドO染色によりここに示す。高脂肪摂食はAPO Eノックアウトマウスのアテローム性動脈硬化症を引き起こし、PM曝露はアテローム性動脈硬化症を悪化させた。血清筋切開術中に気管内チューブが適切に挿入されていることを確認することが重要です。
オペレーターは挿管操作を迅速かつ正確に完了し、手術中の動物の呼吸状態に常に注意を払う必要があります。私たちの方法は、大気汚染と心血管疾患の交差点に関心のある研究者を支援します。ここでアイデアを提供します。
もちろん、研究者は私たちが説明した動物モデルに基づいて直接研究を行うこともできます。
