烟草角虫作为大麻素临床前研究的昆虫模型系统

该协议建议使用烟草角虫作为大麻素临床前研究的昆虫模型系统。该系统使研究人员能够轻松研究对大麻素的急性和长期反应。昆虫模型系统使研究人员能够在三到四周内研究大麻素在大量人群中的治疗效果，而劳动力和成本比其他动物系统少。

获得150至200个可行的M.sexta鸡蛋和基于小麦胚芽的人造日粮。将角虫卵放入具有小麦胚芽人造饮食层的聚苯乙烯培养皿中，并将卵转移到保持25摄氏度且相对湿度为40%至60%的昆虫饲养室中。让卵在昆虫饲养室内孵化一到三天。

为了制备200毫摩尔大麻二酚储备溶液，在20毫升乙醇或100%中链甘油三酯油中加入1.26克大于98%纯度的大麻二酚分离物。将5毫升和10毫升的200毫摩尔大麻二酚储备溶液分别添加到1， 000克人工饮食中，分别用于一毫摩尔和两毫摩尔大麻二酚。将20克对照载体和含大麻二酚的培养基分配到50毫升管的底部。

将大约两毫米长的首龄幼虫随机分布在50毫升的试管中，并用穿孔的盖子或干酪布盖住。将它们生长在保持25摄氏度的昆虫饲养室中，具有12小时的光暗循环。为了测量幼虫的生长，分别用分析天平和标尺记录每个组的初始质量和大小，并将幼虫引入各自的饮食中。

在每次测量时，以两天的间隔从初始质量中减去幼虫的质量，以确定幼虫发育阶段之间的质量增益。此外，记录幼虫发育阶段之间的天数，以了解化蛹前发育时间框架的差异。为了测量饮食消耗，在实验开始时记录饮食的初始克数，并在幼虫进入完全化蛹阶段时从剩余的饮食量中减去它。

对于幼虫活动性测量，让受试昆虫适应恐惧调节室至少五分钟，并跟踪三组五龄昆虫行进五分钟的距离。然后，运行运动检测软件以分析移动响应。在人工饮食中饲养的昆虫显示出最佳的生长性能。

使用0.1%中链甘油三酯油作为CBD分离物溶解剂的载体对照组也显示出正常生长，没有任何不利影响。然而，两毫米的高剂量CBD诱导了体重减轻，并导致死亡率高于对照组和车辆组。在AD上饲养的M.sexta幼虫，用一毫米CBD消耗的饮食量至少是乙醇添加饮食的3.1倍。

然而，在两毫摩尔CBD添加培养基上饲养的昆虫的饮食消耗与仅用乙醇饮食饲养的幼虫没有显着差异。不同条件下饲养的M.sexta幼虫的移动指数表明，1%乙醇和1毫摩尔CBD处理的幼虫不影响活动性。2%乙醇处理被证明是致命的。

在含有2%乙醇的AD中添加高剂量的CBD可恢复低流动性。一旦CBD被添加到饮食中，就将饮食CBD混合物完全同质化，并在保持25摄氏度，湿度为40%至60%的昆虫饲养室中生长昆虫，以避免真菌爆发。电生理反应也可以通过从Manduca sexta解剖的腹链神经节进行监测，以确定CBD是否影响烟草角虫的中枢神经系统。

昆虫模型系统将使研究人员能够通过多代测试来探索其他主要和次要大麻素的药物作用，从而允许在高等哺乳动物中进行实验设计。