このプロトコルは、カンナビノイド前臨床試験のための昆虫モデルシステムとしてタバコホーンワームを使用して提案しています。このシステムは、研究者がカンナビノイドに対する急性および長期的な反応を容易に調査することを可能にする。昆虫モデルシステムは、研究者が他の動物システムよりも少ない人数とコストで3〜4週間以内に大規模な集団におけるカンナビノイド治療効果を調査することを可能にする。
150〜200個の実行可能なM.sexta卵と小麦胚芽ベースの人工食を得る。小麦胚芽ベースの人工ダイエット層を備えたポリスチレンペトリ皿にホーンワームの卵を入れ、40〜60%の相対湿度で摂氏25度に維持された昆虫飼育室に卵を移します。卵が昆虫飼育室の中で1〜3日間孵化することを許可します。
200ミリモルカンナビジオールストック溶液を調製するには、エタノールの20ミリリットルまたは100%中鎖トリグリセリド油で98%純度カンナビジオール分離株の1.26グラムを追加します。1ミリモルとカンナビジオールの2ミリモルの人工食の1,000グラムに200ミリモルカンナビジオールストック溶液の5ミリリットルと10ミリリットルを追加します。50ミリリットルチューブの底に制御車両とカンナビジオール含有培地の20グラムを分配します。
50ミリリットルの試験管に約2ミリメートルの最初のインスター幼虫をランダムに分配し、穿孔蓋またはチーズクロスで覆います。12時間の明暗サイクルで摂氏25度に維持された昆虫飼育室内でそれらを成長させます。幼虫の成長を測定するには、各グループの初期質量とサイズを分析バランスと定規でそれぞれ記録し、それぞれの食事に幼虫を導入します。
初期の質量から2日間間隔で各測定で幼虫の質量を差し引き、幼虫発生段階間の質量増加を決定します。また、インスター発達段階間の日数を記録して、子犬までの発達期間の違いを理解する。食事の消費量を測定するには、実験の開始時にダイエットの最初のグラムを記録し、幼虫が完全な子犬の段階に入ったときの食事の残量から減算します。
幼虫移動度測定では、受けた昆虫が少なくとも5分間恐怖調節室に順応し、5分間移動した5番目のインスター昆虫の3つのグループの距離を追跡することを可能にする。次に、動き検出ソフトウェアを実行して、移動応答を解析します。人工食で飼育された昆虫は、最高の成長性能を示しました。
CBD分離剤の溶解剤として0.1%中鎖トリグリセリド油を使用した車両制御も、有害な影響を及ぼすことなく正常な成長を示した。しかし、2ミリメートルの高用量のCBDは体重減少を誘発し、対照群および車両群よりも高い死亡率につながった。1ミリメートルCBDでADで飼育されたM.sexta幼虫は、エタノール添加食で飼育されたものよりも少なくとも3.1倍大きな食事を消費した。
しかし、2つのミリモルCBD添加培地で飼育された昆虫の食事消費量は、エタノールのみの食事で飼育された幼虫と有意に変わらなかった。異なる条件で飼育されたM.sexta幼虫の移動式指数は、1%エタノールおよび1ミリモルCBD処理幼虫が移動性に影響を与えなかったことを示している。2%エタノール処理は致死的であることが判明した。
2%エタノールを含むADに高用量のCBDを添加すると、低移動性が回復した。CBDが食事に追加されると、完全に食事CBD混合物を均質化し、真菌の発生を避けるために40〜60%の湿度で摂氏25度で維持昆虫飼育室で昆虫を成長させます。電気生理学的応答はまた、CBDがタバコホーンワームの中枢神経系に影響を与えるかどうかを判断するために、カンドゥカ・セクスタから解剖された腹側鎖神経節で監視することができる。
昆虫モデルシステムは、研究者が複数世代にわたってテストすることにより、他の主要およびマイナーカンナビノイドの医薬的役割を探求することを可能にし、より高い哺乳類の実験的設計を可能にする。
