이 프로토콜은 카나비노이드 전임상 연구를 위한 곤충 모델 시스템으로 담배 뿔웜을 사용하는 것을 제안합니다. 이 시스템은 연구원이 쉽게 카나비노이드에 대한 급성 및 장기 반응을 조사 할 수 있습니다. 곤충 모델 시스템은 연구원이 다른 동물 시스템보다 인건비와 비용이 적은 3 ~4 주 이내에 큰 인구에서 카나비노이드 치료 효과를 조사 할 수 있습니다.
150에서 200의 실행 가능한 M.sexta 계란과 밀 배아 기반인공 식단을 얻습니다. 혼웜 알을 밀 배아 기반 인공 식단 층으로 폴리스티렌 페트리 접시에 넣고 달걀을 섭씨 40~60%의 습도로 유지되는 곤충 사육실로 옮긴다. 계란이 곤충 사육 실 내부에서 1 ~3 일 동안 부화하도록 허용합니다.
200 밀리머 칸나비디올 스톡 솔루션을 준비하려면 에탄올 20 밀리리터 또는 100% 중간 사슬 트리글리세라이드 오일에 98% 이상의 순도 칸나비디올 이소레이트 1.26 그램을 추가하십시오. 5 밀리리터와 10 밀리리터의 200 밀리머 칸나비디올 스톡 솔루션1, 000 그램의 인공 식단을 1 밀리머와 칸나비디올 2밀리머에 각각 추가합니다. 제어 차량 20그램과 칸나비디올 함유 미디어를 50밀리리터 튜브 의 바닥에 분배합니다.
50밀리리터 테스트 튜브에 약 2밀리미터 길이의 첫 번째 인스타 애벌레를 개별적으로 배포하고 천공 된 뚜껑이나 치즈 클로로 덮습니다. 12 시간 밝은 어두운 주기와 함께 25섭씨에서 유지되는 곤충 사육 챔버 내부에서 성장하십시오. 애벌레의 성장을 측정하기 위해 각 그룹의 초기 질량과 크기를 분석 균형과 통치자로 기록하고 각 식단에 애벌레를 소개합니다.
애벌레 발달 단계 사이의 질량 이득을 결정하기 위해 초기 질량으로부터 2 일 간격으로 각 측정에서 애벌레의 질량을 빼는다. 또한, 인스타 발달 단계 사이의 일 수를 기록하여 새끼까지 발달 기간의 차이를 이해합니다. 다이어트 소비를 측정하려면, 실험에서 처음에 다이어트의 초기 그램을 기록하고 애벌레가 완전한 새끼 단계에 들어갔을 때 다이어트의 나머지 양에서 빼.
애벌레 이동성 측정을 위해, 복종된 곤충이 적어도 5분 동안 공포 컨디셔닝 챔버에 적응하고 5분 동안 이동한 다섯 번째 인스타 곤충의 세 그룹의 거리를 추적하도록 한다. 그런 다음 모션 감지 소프트웨어를 실행하여 이동성 반응을 분석합니다. 인공 식단에서 자란 곤충은 최고의 성장 성과를 보였습니다.
CBD 분리용 용해제로서 0.1%의 중형 사슬 트리글리세라이드 오일을 사용한 차량 제어도 해로운 영향 없이 정상적인 성장을 보였다. 그러나, 2 밀리미터의 CBD의 높은 복용량은 체중 감소를 유도하고 제어 및 차량 그룹보다 높은 사망률을 주도. M.sexta 애벌레는 1 밀리미터 CBD와 AD에 양육 에탄올 추가 다이어트에 양육 보다 적어도 3.1 배 더 큰 다이어트를 소비.
그러나, 두 밀리머 CBD 추가 미디어에 사육 곤충의 다이어트 소비는 에탄올 전용 식단에 양육 애벌레와 크게 다르지 않았다. 다른 조건에서 자란 M.sexta 애벌레의 모바일 지수는 1 %에탄올과 1 밀리모어 CBD 처리 애벌레가 이동성에 영향을 미치지 않았다는 것을 보여줍니다. 2%에탄올 치료는 치명적인 것으로 밝혀졌습니다.
2 %에탄올을 포함하는 AD에 CBD의 높은 복용량을 추가 낮은 이동성을 복원. CBD가 다이어트에 추가되면, 완전히 다이어트 CBD 혼합물을 균질화하고 곰팡이 발생을 피하기 위해 40 ~ 60 %의 습도와 섭씨 25도에서 유지 곤충 사육 챔버에서 곤충을 성장. 전기 생리학적 반응은 CBD가 담배 혼벌레의 중추 신경계에 영향을 미치는지 여부를 결정하기 위해 Manduca sexta에서 해부 된 복부 사슬 신경망으로 모니터링 할 수 있습니다.
곤충 모델 시스템은 연구원이 여러 세대에 걸쳐 테스트하여 다른 주요 및 사소한 카나비노이드의 제약 역할을 탐구 할 수 있게하여 더 높은 포유류에서 실험 설계를 가능하게합니다.
