يقترح البروتوكول استخدام دودة قرن التبغ كنظام نموذجي للحشرات للدراسات قبل السريرية للقنب. يسمح هذا النظام للباحثين بالتحقيق في الاستجابات الحادة والطويلة الأجل للقنب بسهولة. يمكن نظام نموذج الحشرات الباحثين من التحقيق في الآثار العلاجية للقنب في عدد كبير من السكان في غضون ثلاثة إلى أربعة أسابيع مع عمالة وتكاليف أقل من الأنظمة الحيوانية الأخرى.
احصل على 150 إلى 200 بيضة M.sexta قابلة للحياة ووجبات غذائية اصطناعية قائمة على جرثومة القمح. ضع بيض الدودة القرنية في طبق بتري من البوليسترين مع طبقة حمية اصطناعية قائمة على جرثومة القمح وانقل البيض إلى غرفة تربية الحشرات التي يتم الحفاظ عليها عند 25 درجة مئوية مع رطوبة نسبية تتراوح بين 40 و 60٪. اسمح للبيض بالفقس لمدة يوم إلى ثلاثة أيام داخل غرفة تربية الحشرات.
لإعداد محلول مخزون الكانابيديول 200 ملليمولار ، أضف 1.26 جرام من عزل الكانابيديول الأكثر نقاء بنسبة 98٪ في 20 ملليلتر من الإيثانول أو 100٪ من زيت الدهون الثلاثية متوسط السلسلة. أضف خمسة ملليلترات و 10 ملليلترات من محلول مخزون الكانابيديول 200 ملليمولار إلى 1000 جرام من نظام غذائي اصطناعي لمليمولار واحد واثنين من ملليمولار من الكانابيديول ، على التوالي. قم بتوزيع 20 جراما من مركبة التحكم والوسائط المحتوية على الكانابيديول في الجزء السفلي من الأنبوب سعة 50 ملليلتر.
قم بتوزيع ما يقرب من يرقات النجمة الأولى التي يبلغ طولها مليمترين بشكل عشوائي بشكل فردي في أنبوب اختبار سعة 50 ملليلتر وتغطيتها بغطاء مثقب أو قماش قطني. قم بزراعتها داخل غرفة تربية الحشرات التي يتم الحفاظ عليها عند 25 درجة مئوية مع دورة ضوء مظلمة مدتها 12 ساعة. لقياس نمو اليرقات ، سجل الكتلة والحجم الأوليين لكل مجموعة بتوازن تحليلي ومسطرة ، على التوالي ، وأدخل اليرقات إلى وجباتها الغذائية.
اطرح كتلة اليرقات في كل قياس على فترات يومين من الكتلة الأولية لتحديد مكاسب الكتلة بين مراحل نمو اليرقات. أيضا ، سجل عدد الأيام بين مراحل النمو instar لفهم الاختلافات في الإطار الزمني التنموي حتى الجرو. لقياس استهلاك النظام الغذائي ، سجل الجرامات الأولية من النظام الغذائي في البداية في التجربة واطرحها من الكمية المتبقية من النظام الغذائي عندما دخلت اليرقات مرحلة الجرو الكاملة.
لقياس حركة اليرقات ، اسمح للحشرة الخاضعة بالتأقلم مع غرفة تكييف الخوف لمدة خمس دقائق على الأقل وتتبع المسافات التي قطعتها المجموعات الثلاث من الحشرات النجمية الخامسة لمدة خمس دقائق. ثم قم بتشغيل برنامج اكتشاف الحركة لتحليل استجابة التنقل. أظهرت الحشرات التي تربت على نظام غذائي اصطناعي أفضل أداء للنمو.
كما أظهر التحكم في السيارة الذي استخدم زيت الدهون الثلاثية متوسط السلسلة بنسبة 0.1٪ كعامل إذابة لعزل CBD نموا طبيعيا دون أي آثار ضارة. ومع ذلك ، فإن جرعة عالية من CBD من اثنين ملليمتر تسببت في فقدان الوزن وأدت إلى معدل وفيات أعلى من مجموعات التحكم والمركبات. استهلكت يرقات M.sexta التي تربى على AD مع ملليمتر واحد CBD ما لا يقل عن 3.1 مرات من النظام الغذائي الذي تم تربيته على نظام غذائي مضاف إليه الإيثانول.
ومع ذلك ، فإن استهلاك النظام الغذائي للحشرات التي تربى على وسائط مضافة من مليمولار CBD لم يكن مختلفا اختلافا كبيرا عن اليرقات التي تربى على الوجبات الغذائية التي تحتوي على الإيثانول فقط. يظهر المؤشر المحمول ليرقة M.sexta التي تربى في ظروف مختلفة أن 1٪ من الإيثانول واليرقات المعالجة باتفاقية التنوع البيولوجي الملليمولار الواحدة لم تؤثر على الحركة. تبين أن علاجات الإيثانول بنسبة 2٪ قاتلة.
إضافة جرعة عالية من CBD إلى AD تحتوي على 2 ٪ من الإيثانول استعادت انخفاض الحركة. بمجرد إضافة CBD إلى الوجبات الغذائية ، قم بتجانس خليط CBD الغذائي تماما وزراعة الحشرات في غرفة تربية الحشرات التي يتم الحفاظ عليها عند 25 درجة مئوية مع رطوبة تتراوح من 40 إلى 60٪ لتجنب تفشي الفطريات. يمكن أيضا مراقبة الاستجابات الكهروفسيولوجية باستخدام عقد السلسلة البطنية التي تم تشريحها من Manduca sexta لتحديد ما إذا كانت اتفاقية التنوع البيولوجي تؤثر على الجهاز العصبي المركزي لدودة قرن التبغ.
سيمكن نظام نموذج الحشرات الباحثين من استكشاف الأدوار الصيدلانية للقنب الرئيسي والثانوي الآخر من خلال الاختبار على مدى أجيال متعددة ، مما يسمح بتصميم تجريبي في الثدييات العليا.
