Протокол предлагает использовать табачного рогатого червя в качестве системы моделирования насекомых для доклинических исследований каннабиноидов. Эта система позволяет исследователям легко исследовать острые и долгосрочные реакции на каннабиноиды. Система моделирования насекомых позволяет исследователям исследовать каннабиноидные терапевтические эффекты в большой популяции в течение трех-четырех недель с меньшими трудозатратами и затратами, чем другие системы животных.
Получите от 150 до 200 жизнеспособных яиц M.sexta и искусственных диет на основе зародышей пшеницы. Поместите яйца рогатого червя в полистирольную чашку Петри с искусственным слоем диеты на основе зародышей пшеницы и перенесите яйца в камеру выращивания насекомых, поддерживаемую при температуре 25 градусов Цельсия с относительной влажностью от 40 до 60%. Дайте яйцам вылупиться в течение одного-трех дней в камере выращивания насекомых.
Чтобы приготовить 200-миллимолярный раствор каннабидиола, добавьте 1,26 г изолята каннабидиола чистотой более 98% в 20 миллилитрах этанола или 100% триглицеридного масла со средней длиной цепи. Добавьте пять миллилитров и 10 миллилитров из 200 миллимолярного раствора каннабидиола к 1000 граммам искусственной диеты для одного миллимоляра и двух миллимоляров каннабидиола соответственно. Распределите 20 грамм контрольного носителя и каннабидиолсодержащих сред на дно 50-миллилитровой трубки.
Случайным образом распределите примерно две первые личинки звезды длиной около миллиметра по отдельности в 50-миллилитровой пробирке и накройте перфорированной крышкой или марлей. Выращивайте их в камере выращивания насекомых, поддерживаемой при 25 градусах Цельсия с 12-часовым циклом свет-темнота. Чтобы измерить рост личинок, запишите начальную массу и размер каждой группы с помощью аналитического баланса и линейки, соответственно, и введите личинок в их соответствующие рационы.
Вычитайте массу личинок при каждом измерении с двухдневными интервалами из начальной массы, чтобы определить прирост массы между стадиями развития личинок. Кроме того, запишите количество дней между стадиями развития instar, чтобы понять различия во временных рамках развития до окукливания. Чтобы измерить потребление диеты, запишите начальные граммы диеты в начале эксперимента и вычтите его из оставшегося количества диеты, когда личинки вошли в полную стадию окукливания.
Для измерения подвижности личинок позвольте подвергшемуся воздействию насекомому акклиматизироваться в камере кондиционирования страха в течение не менее пяти минут и отслеживать расстояния, которые три группы насекомых пятой звезды прошли в течение пяти минут. Затем запустите программное обеспечение для обнаружения движения, чтобы проанализировать реакцию мобильности. Насекомые, выращенные на искусственной диете, показали лучшие показатели роста.
Контроль транспортного средства, который использовал 0,1% среднецепочечное триглицеридное масло в качестве растворителя для изолята CBD, также показал нормальный рост без каких-либо вредных последствий. Тем не менее, высокая доза КБД в два миллиметра вызвала потерю веса и привела к более высокому уровню смертности, чем контрольная и автомобильная группы. Личинки M.sexta, выращенные на AD с одним миллиметром CBD, потребляли по крайней мере в 3,1 раза больше диеты, чем те, кто выращивался на диете с добавлением этанола.
Тем не менее, диетическое потребление насекомых, выращенных на двух миллимолярных средах с добавлением КБД, существенно не отличалось от личинок, выращенных на диетах только с этанолом. Мобильный индекс личинки M.sexta, выращенной в разных условиях, показывает, что 1% этанола и одна личинка, обработанная миллимоляром CBD, не влияли на подвижность. Обработка 2% этанолом оказалась смертельной.
Добавление высокой дозы КБД в БА, содержащую 2% этанола, восстанавливало низкую подвижность. Как только КБД добавлен в рацион, полностью гомогенизируйте диетическую смесь КБД и выращивайте насекомых в камере выращивания насекомых, поддерживаемой при температуре 25 градусов по Цельсию с влажностью от 40 до 60%, чтобы избежать грибковой вспышки. Электрофизиологические реакции также можно контролировать с помощью ганглиев вентральной цепи, рассеченных из Manduca sexta, чтобы определить, влияет ли КБД на центральную нервную систему табачного рогатого червя.
Система моделирования насекомых позволит исследователям исследовать фармацевтические роли других основных и второстепенных каннабиноидов путем тестирования в течение нескольких поколений, что позволит провести экспериментальный дизайн на высших млекопитающих.
