使用基于菲咯啉的比色法测量组织非血红素铁含量

在这里，我们提供了一个用于测量动物组织中非血红素含量的方案。使用简单且完善的比色测定法，可在大多数实验室中轻松实施。基于菲罗啉的比色法不需要复杂的技能或昂贵的设备，并且可以适应微孔板形式，以获得更高的样品通量和成本效益。

该协议适用于检测铁过载或铁效率的各种实验动物模型中组织铁水平的改变。首先用手术刀刀片切割重达10至100克的组织样本。在分析天平中，在一小块胶片上准确称量。

使用塑料镊子将组织片放入24孔板中。让它在65摄氏度的标准培养箱中干燥48小时。或者，使用粘镊子将涉水组织片放入无铁特氟龙杯中，然后在实验室微波消化烤箱中干燥。

将每块干燥的组织放在分析天平内的一小块模板上，并准确称量。将每块干燥的组织转移到1.5毫升的微量离心管中。将点燃的酸混合物加入管中并关闭。

以相同的方式准备酸坯，除了此处省略了组织。将管子在65摄氏度下孵育20小时以消化组织。冷却至室温后，使用装有塑料吸头的微量移液器将500微升透明酸提取物转移到新的1.5毫升微量离心管中。

将染色原反应直接制备到平底96孔中，透明未经处理的聚苯乙烯微孔板中。室温孵育15分钟。在离离子水参考下，以535纳米的波长测量读板器中的样品吸光度。

此处显示了通过比色皿和96孔基于微孔板的比色测定法测定非血红素铁。这里显示了来自6个月大雄性黑，6只小鼠（包括肝脏，脾脏，心脏，肺和骨髓）的55个组织样本中基于比色皿和基于微孔板的非血红素铁水平之间的相关性。两种方法之间的高度相关性表明，基于微孔板的方法是原始比色皿方法的有效替代方案。

最后，用基于微孔板的方法对来自相同组织的样品进行酸性消解后，用盐酸和三氯乙酸或单独盐酸的混合物对非血红素铁水平进行定量。高相关性表明，三氯乙酸可以从酸消解中释放出来。代表性图像显示了雄性黑六野生型小鼠和雄性铁调素敲除小鼠在黑六遗传背景上用基于菲罗林的比色法测量的非血红素铁水平。

铁调素的破坏导致血色病，如铁沉积表型，伴有严重的肝、胰腺和心脏铁蓄积以及脾铁耗竭。这里显示了实验性铁调节后欧洲鲈鱼幼年雌性的肝脏非血红素铁水平。在铁治疗动物中，肝铁水平显着增加。

而贫血导致肝铁储存轻度减少。代表性图像显示了用基于菲罗啉的比色法测量的一个月大果蝇的非血红素铁水平。结果显示了每组20只苍蝇中的非血红素铁含量或每只苍蝇的估计铁含量。

考虑到每只苍蝇的平均重量为0.64毫克。在尝试此过程时，请记住彻底清洁所有玻璃磨损，并且由于存在污染风险，不要让金属实验室材料与任何试剂或溶液接触。