通过磁活化细胞分选在脱髓鞘动物模型中分离小鼠原代小胶质细胞

该方案有助于从成年小鼠大脑的微剖脱髓鞘病变中分离出小胶质细胞，以研究体内的小胶质细胞特征。这种技术节省了时间，对实验人员和设备的要求也更低。这种方法有助于从动物的大脑中分离出小胶质细胞，特别是那些处于各种疾病状态的微切片组织。

首先在立体显微镜下对胼胝体周围由中性染料标记的病变进行微剖。将解剖的组织以300倍离心30秒，以收集管底部的样品。在培养箱中预热酶混合物一和酶混合物两到37摄氏度。

然后，加入1， 950微升预热酶，一对一样品混合，并在37摄氏度的培养箱中消化五分钟。加入30微升预热酶混合物两种，轻轻混合。消化后，向管中加入四毫升冷PBS，轻轻摇匀。

将组织样品在4摄氏度下以300倍g离心10分钟，并缓慢而完全地吸出上清液。用1， 550微升冷PBS轻轻地重悬细胞沉淀。加入450微升冷溶液以去除碎屑，并充分混合。

使用1， 000微升移液器非常缓慢地覆盖混合物，并用两毫升冷PBS轻轻覆盖混合物。离心混合物，然后寻找三层。使用1， 000微升移液器完全吸出两层顶层，并用冷上样缓冲液填充管子多达五毫升。

轻轻倒置管子三次。接下来，在离心和抽吸上清液后，用90微升的上样缓冲液重悬细胞沉淀，并加入10微升CD11b珠。充分混合，在4摄氏度下孵育15分钟。

孵育后，加入一毫升上样缓冲液，并用1， 000微升移液器轻轻地上下移液来洗涤细胞。将细胞以300倍g在4摄氏度下离心10分钟，并完全吸出上清液以除去未结合的珠子。将细胞重悬于500微升的上样缓冲液中，并将MS柱与其分离器一起放置在磁场中进行正选择。

用500微升的上样缓冲液冲洗色谱柱，以保护细胞并确保基于制造商协议的磁选效率。将细胞悬浮液涂在MS柱上，并丢弃含有未标记细胞的流通液。加入500微升上样缓冲液洗涤色谱柱，并将其从分离器中取出。

将色谱柱放在15毫升离心管上，并向色谱柱中加入一毫升上样缓冲液。最后，将柱塞推到柱的底部以冲洗出磁性标记的细胞。这里显示了在磁激活细胞分选之前和之后从成年小鼠脱髓鞘病变中分离出的小胶质细胞的流式细胞术分析中使用的门控策略的示意图。

图形图像表示选择细胞的前向散射高度和侧散射高度，选择单个细胞的前向散射区域和前向散射高度，以及选择骨髓细胞和小胶质细胞的CD11b-FITC和CD45-APC。磁活化细胞分选后，小胶质细胞的比例明显增加。图形图像代表了磁激活细胞分选后流式细胞术分析中使用的活细胞和死单细胞的门控策略。

在这里，7-氨基放线菌素D和侧散射高度已被用于选择活细胞。在尝试此程序时，请记住根据中性红色标记在立体显微镜下精确地显微切片脱髓鞘病变。