用于检测按蚊媒介中恶性疟原虫感染的标准膜喂养测定

该方案使我们能够检测治疗对非洲疟疾病媒疟疾易感性的影响。例如，旨在阻止从人类到蚊子传播的化合物。该技术允许研究人员在实验室条件下评估大量化合物，甚至在毒性GATEs可用之前。

中肠解剖一开始可能具有挑战性，但只需要一些练习。此外，能够识别卵囊并不总是那么容易。首先，使用口吸器，将25只未喂食的雌性冈比亚按蚊放入350毫升的喂食杯中。

清楚地标记杯子以区分对照组和治疗组。根据所包含的技术重复次数选择每次处理的杯数。将玻璃进料器系统连接到水浴，并将温度保持在 37 摄氏度。

然后，用自来水冲洗牛肠或合成膜并将其切成适合每个喂食器的碎片来准备牛肠或合成膜。盖住每个喂料器的底部，并用松紧带固定膜。要将喂食杯用作感染杯，首先，将膜保持在杯子网的顶部。

然后将感染杯放在喂食器下方。现在，将一毫升配子细胞感染的血液添加到对照杯的喂食器中，并将配子细胞感染的血液与测试化合物添加到治疗杯的喂食器中。然后让蚊子喂食约 40 分钟。

喂食后，从杯子中取出喂食器，冲洗喂食器，并用次氯酸盐处理多余的血液。然后，将所有蚊子都打倒在冰上一到两分钟，并通过寻找肿胀和红色的腹部来选择已经吃血的蚊子。用10%糖水垫代替隔天给予每个感染杯的糖水，并将感染杯在生物安全室中孵育8至10天。

喂食后 8 到 10 天，将受感染的蚊子放在冰上将它们击倒。然后，将它们转移到带有70%乙醇的标记管中，将每个处理组的对照保持在单独的管中。将对照组和测试组分开，将蚊子转移到衬有滤纸的标记培养皿中。

在适当标记的载玻片上加入一滴PBS，然后将蚊子从滤纸转移到滴剂中。用解剖针钉住蚊子的胸部。然后，用镊子拉动第七腹节来去除中肠，并将其转移到新的显微镜载玻片上的0.1%汞铬液滴中。

让肠道染色 8 到 10 分钟。然后将盖玻片放在染色的肠道上，并在明场照明下以 20 到 40 倍放大倍率观察它。记录对照组和每个治疗组每个中肠的卵囊数。

在这项研究中，与对照相比，发现化合物MMV1581558显着限制了雌性冈比亚按蚊中肠中肠恶性疟原虫卵囊的数量。在对照组中，中肠卵囊的平均患病率为89%，平均强度为每中肠9.5个卵囊。但在MMV1581558治疗组中，平均卵囊患病率为36%，平均强度仅为每中肠1.5个卵囊。

因此，MMV1581558处理在所有三个生物学重复中均具有58%的传播阻断活性和82%的传播减少活性。确保蚊子以健康的配子细胞培养物为食至关重要。如果这些是未成熟的配子细胞，或者不是五期配子细胞，则蚊子感染的可能性有限或不可能。

该测定使用视觉形态学鉴定方法，但是可以使用分子定量测定。然而，这更昂贵，可能会限制它们在资源有限的实验室中的使用。拥有这种技术的能力为评估蚊子中几乎所有东西之间的疟疾流行率和强度的变化开辟了新的途径。

例如，比较物种载体容量。