ويسمح لنا البروتوكول بالكشف عن أثر العلاج على قابلية نواقل الملاريا الأفريقية للتأثر بالملاريا. على سبيل المثال ، المركبات التي تهدف إلى منع انتقال العدوى من الإنسان إلى البعوض. تسمح هذه التقنية للباحثين بتقييم عدد كبير من المركبات تحت ظروف المختبر ، حتى قبل توفر بوابات السمية.
يمكن أن يكون تشريح الأمعاء الوسطى تحديا في البداية ولكنه يتطلب فقط بعض الممارسة. أيضا ، لتكون قادرة على تحديد البويضات ليست دائما سهلة. أولا ، باستخدام شفاط الفم ، ضع 25 أنثى من بعوض Anopheles gambiae غير المتغذى في كوب تغذية 350 ملليلتر.
ضع علامة على الكؤوس بوضوح للتمييز بين مجموعات التحكم والعلاج. اختر عدد الأكواب لكل علاج وفقا لعدد النسخ المتماثلة الفنية المضمنة. قم بتوصيل نظام التغذية الزجاجية بحمام مائي وحافظ على درجة الحرارة عند 37 درجة مئوية.
ثم ، قم بإعداد أمعاء البقرة أو الغشاء الاصطناعي عن طريق شطفها في ماء الصنبور وتقطيعها إلى قطع يتم تركيبها لكل وحدة تغذية. قم بتغطية الجزء السفلي من كل وحدة تغذية واربط الغشاء بشريط مرن. لاستخدام أكواب التغذية كأكواب عدوى ، أولا ، حافظ على الغشاء فوق شبكات الكؤوس.
ثم ضع أكواب العدوى تحت المغذيات. الآن ، أضف ملليلتر واحد من الدم المصاب بالخلايا المشيمية إلى مغذيات أكواب التحكم ، والدم المصاب بالخلايا المشيمية مع مركب اختبار إلى مغذيات أكواب العلاج. ثم اترك البعوض لإطعام لمدة 40 دقيقة.
بعد الرضاعة ، قم بإزالة المغذيات من الكؤوس ، وشطف المغذيات ، وعالج الدم الزائد بهيبوكلوريت. ثم ، اضرب كل البعوض على الجليد لمدة دقيقة إلى دقيقتين ، وحدد البعوض الذي تناول وجبة دم من خلال البحث عن البطن المتورمة والحمراء. استبدل ماء السكر الذي يعطى في أيام بديلة لكل كوب عدوى بوسادة ماء سكر بنسبة 10٪ ، واحتضن أكواب العدوى في غرفة السلامة البيولوجية لمدة ثمانية إلى 10 أيام.
بعد ثمانية إلى 10 أيام من الرضاعة ، قم بضرب البعوض المصاب عن طريق وضعه على الجليد. ثم ، قم بنقلها إلى أنابيب ذات علامات مع 70٪ من الإيثانول ، مع الحفاظ على التحكم في كل مجموعة علاج في أنابيب منفصلة. مع الحفاظ على مجموعات التحكم والاختبار منفصلة ، قم بنقل البعوض إلى أطباق بتري المبطنة بورق الترشيح.
أضف قطرة من PBS على شريحة زجاجية مميزة بشكل مناسب ، وانقل البعوضة من ورقة الترشيح إلى القطرة. دبوس صدر البعوض بإبرة تشريح. ثم ، قم بإزالة القناة الهضمية الوسطى عن طريق سحب الجزء البطني السابع باستخدام ملقط ، ونقله إلى قطرة من 0.1٪ زئبق على شريحة مجهر جديدة.
اترك الأمعاء لتلطخ لمدة ثماني إلى 10 دقائق. ثم ضع زلة غطاء على الأمعاء الملطخة ، وشاهدها تحت إضاءة المجال الساطعة عند 20 إلى 40 مرة تكبير. سجل عدد البويضات لكل من منتصف الأمعاء للتحكم وكل مجموعة علاجية.
في هذه الدراسة ، وجد أن مركب MMV1581558 يحد بشكل كبير من عدد البويضات المتصورة المنجلية في الأمعاء الوسطى لإناث البعوض الأنوفيلية الغامبية مقارنة بالسيطرة. في المجموعة الضابطة ، كان متوسط انتشار البويضات في الأمعاء الوسطى 89٪ بمتوسط كثافة 9.5 بويضة لكل من الأمعاء الوسطى. ولكن في المجموعة المعالجة MMV1581558 ، كان متوسط انتشار البويضات 36٪ بمتوسط كثافة 1.5 فقط لكل بويضة لكل الأمعاء الوسطى.
وهكذا، أسفرت معالجة MMV1581558 عن نشاط منع انتقال بنسبة 58٪ ونشاط الحد من انتقال العدوى بنسبة 82٪ في جميع النسخ البيولوجية الثلاثة. من الأهمية بمكان التأكد من أن البعوض يتغذى على ثقافة أمشاج صحية. إذا كانت هذه الخلايا الأمشاج غير ناضجة ، أو لم تكن المرحلة الخامسة من الخلايا المشيمة ، فإن احتمال الإصابة بالعدوى في البعوض محدود أو مستحيل.
يستخدم الفحص طريقة تحديد مورفولوجية بصرية ، ومع ذلك ، يمكن استخدام مقايسات القياس الكمي الجزيئي. غير أن هذا الأمر أكثر تكلفة وقد يحد من استخدامها في المختبرات المحدودة الموارد. إن امتلاك القدرة على القيام بهذه التقنية يفتح آفاقا جديدة لتقييم تغير انتشار الملاريا وشدتها بين أي شيء تقريبا في البعوض.
على سبيل المثال ، مقارنة القدرة الناقلة للأنواع.
