用于组织工程应用的尺寸控制和无乳化壳聚糖 -染料木酚微凝胶的制备

该协议允许方便地制造壳聚糖微凝胶，而无需有毒溶剂，可用于各种组织工程和药物输送应用。该技术不需要特殊设备或培训，也不需要有毒乳液技术或溶剂冲洗，使其具有高度的生物相容性并可转化为临床环境。我们将该技术作为治疗生长板损伤的生物材料策略。

但是，我们相信这种技术也将在其他再生医学应用中有用。该技术可以应用于其他再生医学应用，这些应用将受益于可注射，可生物降解的生物材料支架系统，具有持续药物释放的潜力。首先将乙酸和纯化的壳聚糖加入10毫升的鲁尔锁定注射器中，形成6%重量体积的壳聚糖溶液。

使用母头鲁尔锁连接器，连接两个鲁尔锁注射器，然后来回混合溶液，直到壳聚糖完全溶解在苦行酸中。现在将100微升的Genipin溶液加入含壳聚糖的注射器中，并在注射器之间来回混合30秒，然后将混合物从注射器中弹出到35毫米的培养皿中。用石蜡膜覆盖培养皿，并在37摄氏度的潮湿气氛中孵育过夜。

使用刮刀将水凝胶破碎成更小的碎片，然后将所需网孔大小的过滤器放入干净的10毫升注射器的背面。将破碎的凝胶片转移到装有过滤器的注射器中，并加入6毫升双蒸馏水。通过鲁尔锁连接器将注射器连接到另一个干净的10毫米注射器。

用过滤器将凝胶和水混合物通过注射器以产生微凝胶。第一次过滤后，打开装有过滤器的注射器，然后将混合物重新加入该注射器中。再次用力使混合物通过过滤器。

现在，将过滤后的凝胶混合物转移到50毫升的锥形管中，并加入双蒸馏水，使体积达到20毫升。涡旋溶液以获得均匀溶液。在室温下以100倍g离心微凝胶5分钟。

离心后，除去上层水相，将微凝胶重悬于10毫升70%乙醇中，然后涡旋微凝胶并将其置于紫外光下一小时灭菌。现在，在室温下以1000倍g离心微凝胶5分钟。丢弃乙醇，用双蒸馏水冲洗3次。

将微凝胶沉淀重悬于等体积的双蒸馏水中。随着pH值的增加，微凝胶显示出肿胀的减少，如Feret直径的变化所描绘的那样。此外，微凝胶颗粒的大小取决于所用过滤器的孔径大小。

200目产生小颗粒，而100目产生大颗粒。受伤部位微凝胶的存在促进了软骨再生。Alcian蓝苏木精染色表明，在受伤组织注射微凝胶可防止早期骨条形成，而含有生物活性剂SDF-1a和TGF-B3的微凝胶促进软骨形成。

重要的是要确保将金属丝网过滤器正确放入注射器中，以便进行有效的过滤。重复过滤几次以确保微凝胶尺寸的均匀分布也很重要。这些微凝胶可应用于各种组织工程应用，这些应用需要具有持续释放治疗药物潜力的生物材料支架基质。