该协议利用人CAR-T和肿瘤细胞,并准确证明与CART19给药相关的毒性。因此,概括一下在临床上观察到的情况。使用该平台的主要优点是它提供了一个可翻译的和临床相关的模型,其中利用了人类T细胞和肿瘤细胞。
该模型不仅可以有效评估CART19相关毒性,还可以让我们更好地了解如何通过改进治疗策略来克服这些毒性。首先,每天两次监测CART19小鼠,以评估其健康状况的任何变化,例如运动无力,驼背和体重减轻。一旦小鼠出现运动无力和体重减轻,收集外周血以分析肿瘤负荷。
并进行细胞因子的血清分离,如手稿中所述。分离后,将血清微量离心管储存在80摄氏度,并使用CERA使用多重测定法分析趋化因子和细胞因子。对于MRI成像,将120微升钆与880微升盐水溶液混合,然后装入一毫升胰岛素注射器中。
将100微升制备的溶液腹膜内注射到每只小鼠中。麻醉鼠标并将其放在与啮齿动物兼容的摇篮探针上。然后用牙齿钩在咬杆上。
将鼠标头拉入25毫米体积线圈中,并调整拴在异氟烷麻醉系统上的鼻锥。拧紧咬杆的旋钮,以在扫描期间保持该位置。对于呼吸评估,将呼吸监测装置的探头靠近横膈膜,并用手术胶带固定。
将呼吸频率保持在每分钟20至60次呼吸之间,以使小鼠状况保持稳定。将动物探头插入垂直孔小动物MRI系统内的小孔中,并在线圈中心调整动物的头部。使用锁将设备固定在直立位置并将仪器连接到计算机。
接下来,打开ParaVision软件以设置扫描位置和扫描类型。确定最佳矢状位和轴向位置,同时保持所有实验组的一致性。要收集 T1 加权 MRI 数据,请使用 T1 加权多层、多回波序列,重复时间为 300 毫秒,回波时间为 9.5 毫秒,视野为 4.00 X 2.00 X 2.00 厘米,矩阵为 192 X 96 X 96。
对于 T2 加权 MRI 图像,请使用具有相似参数的多层、多回波序列。扫描完成后,从孔中取出探头,然后通过从咬杆上取下牙齿来轻轻拔出鼠标。从软件中提取数据后,使用分析软件对用CART19处理的小鼠和使用流式细胞术的未处理小鼠进行比较,对高信号区域的CD19 +肿瘤细胞群进行定量和3D体积渲染。
在用CART19细胞处理的小鼠中观察到显着的体重减轻。体重减轻被认为是CRS外观的症状,这与CART细胞相关的毒性有关。多重测定揭示了CART19给药前后NSG小鼠血清中细胞因子和趋化因子的表达。
T2加权图像显示CART19治疗小鼠在神经炎症期间水肿和可能的炎症浸润的证据。而T1加权MRI显示脑实质内的对比增强,表明血管通透性增加。基于与血管通透性相对应的T1高信号区域组装啮齿动物大脑的三维重建,该区域呈现大脑中钆渗漏的体积。
重要的是要记住,CART19给药后对小鼠的日常身体监测以及外周出血将是进行MRI以全面评估大脑中指示CRS或神经毒性的任何变化的最佳指标。该技术广泛适用于其他CAR-T细胞疗法,并将使科学家能够有效地测试新型CAR-T细胞产生的潜在毒性。该模型是了解如何监测,治疗和用于验证新的CAR-T细胞模型的垫脚石。