一种快速、简单、标准化的均质化制备抗原/辅助乳剂以诱导实验性自身免疫性脑脊髓炎的方法

实验性自身免疫性脑脊髓炎或EAE是一种动物模型，用于为多发性硬化症患者开发新的和改进的治疗方法。EAE中诱发疾病需要完美的油和水乳液才能获得一致的结果。这里介绍的乳液制备方法不受人为影响，从而限制了从一个实验到另一个实验的不一致。

尽管该方法已针对EAE进行了优化，但它也可用于其他自身免疫性疾病模型以及测试癌症疫苗。在100毫克冻干结核分枝杆菌H37 RA和5个3.2毫米钢珠中制备CFA浆料到7毫升管中。以最高速度设置在均质机中摇动试管60秒。

向试管中加入五毫升IFA佐剂，并以最高速度再次摇晃60秒。然后用移液器将浆液转移到新管中，留下珠子并储存在四摄氏度直至使用。要制备CFA/肽乳液，请下载补充文件一以计算每种试剂所需的量。

然后将螺旋盖管和要使用的试剂放在冰上。接下来，添加乳液组分。首先是PBS，然后是肽，CFA浆液。

最后，IFA。用盖子牢固地关闭管子，将其拧紧并松开几次。用手剧烈摇动试管 5 到 10 秒以预混合试剂。

将管子放入振荡均质器中，并用杆固定。将速度设置为最高设置，将时间设置为 60 秒。运行完成后，将试管放在冰上三分钟，然后使用相同的设置再重复运行一两次。

从一分钟开始以 300 G 离心管以去除滞留的空气并压实乳液。从管子上取下盖子。将柱塞插入管中，然后缓慢向下推，直到到达乳液的顶部。

通过扭转管子底部的卡扣外壳将其卸下。接下来，从所有注射器中取出柱塞，并在注射器中加入针头。然后将注射器的背面连接到管底部的专用锁上，并用短促的扭转将其锁定。

通过轻轻推动柱塞将乳液从管转移到注射器中。当乳液达到注射器的0.15毫升刻度时停止。将注射器与管子分开，并小心地插入柱塞，注意没有空气进入该注射器。

推动柱塞，直到乳液从针头中出来，并对管中存在的其余乳液重复该过程。为了分析水和油颗粒的大小，将一小滴乳液添加到显微镜载玻片中，用盖玻片将其涂抹掉，然后以圆周运动用力推动以压平乳液。在放大倍数为400倍的相差显微镜下检查涂抹的乳液，并聚焦在具有单层乳液的场上。

确保小的、均匀的、灰色或白色的颗粒是可见的。通过均质方法生产的乳液显示出灰色或白色的豆形颗粒，代表微小的水滴和油乳液。相比之下，使用注射器方法产生的乳液液滴更大更宽。

在涡旋法中，观察到与乳液中捕获的气泡相对应的大灰色或黑色颗粒。使用激光折射粒度分析仪测量的水和油乳液的粒度分布随时间的变化在六周内没有显示出颗粒大小的任何变化。新鲜的3周龄和15周龄的乳剂在整个实验过程中测试的所有动物中都诱导了相似的EAE疾病。

小鼠在所有实验中都出现了类似的疾病模式，表明这里介绍的均质化方法产生了以一致和可重复的方式诱导EAE的乳液。在为实验制作乳液之前，请下载补充文件编号一，以计算减少浪费所需的每种组分的量。这里介绍的方法不仅可用于临床前研究的乳剂制备标准化，而且可用于将来在临床上制备癌症疫苗。