线粒体网络的重塑发生在生理应激和病理条件下。然而,骨骼肌线粒体重塑的影响仍不完全清楚。该协议能够量化活骨骼肌中线粒体的变化,从而增强我们对线粒体改变与细胞功能之间相互作用的理解。
由于分离期间的纤维收缩和共聚焦扫描期间对图像的敏感性,使用活体骨骼肌会带来挑战。该协议描述了使用松弛溶液的分离过程,能够通过共聚焦显微镜分析活肌肉纤维以进行线粒体评估。我们的协议解决了缺乏定量分析骨骼肌纤维中线粒体网络的工作流程的问题。
这里描述的步骤允许用户更多地利用共聚焦显微镜获得的图像,通过阈值和快速傅里叶分析进行图像处理,以实现线粒体密度和分布的定量。我们对骨骼肌改变的研究感兴趣,特别是逆境中的线粒体动力学和线粒体结构重塑,以及如何通过运动和中期禁食等干预来调节它们。