Analyse der mitochondrialen Dichte und Längsverteilung in lebenden Skelettmuskelfasern von Ratten mittels konfokaler Mikroskopie

Der Umbau des mitochondrialen Netzwerks erfolgt unter physiologischem Stress und pathologischen Bedingungen. Die Auswirkungen des mitochondrialen Umbaus in einem Skelettmuskel sind jedoch noch nicht vollständig verstanden. Dieses Protokoll ermöglicht die Quantifizierung von Veränderungen von Mitochondrien in lebender Skelettmuskulatur und verbessert unser Verständnis des Zusammenspiels zwischen mitochondrialen Veränderungen und zellulärer Funktion.

Die Arbeit mit lebenden Skelettmuskeln stellt aufgrund der Faserkontraktion während der Isolierung und der Bildempfindlichkeit während des konfokalen Scannens eine Herausforderung dar. Dieses Protokoll beschreibt einen Isolierungsprozess mit einer Entspannungslösung, der die Analyse lebensfähiger Muskelfasern für die mitochondriale Beurteilung mittels konfokaler Mikroskopie ermöglicht. Unser Protokoll adressiert den Mangel an Arbeitsabläufen zur quantitativen Analyse mitochondrialer Netzwerke in Skelettmuskelfasern.

Die hier beschriebenen Schritte ermöglichen es Benutzern, die Vorteile von Bildern, die durch konfokale Mikroskopie gewonnen wurden, mithilfe von Bildverarbeitung durch Schwellwertbildung und schnelle Fourier-Analyse zu nutzen, um eine Quantifizierung der mitochondrialen Dichte und Verteilung zu erreichen. Wir interessieren uns für die Untersuchung von Veränderungen der Skelettmuskulatur, insbesondere der mitochondrialen Dynamik und des mitochondrialen strukturellen Umbaus während widriger Umstände und wie sie durch Interventionen wie Bewegung und Zwischenfasten moduliert werden können.