Analyse de la densité mitochondriale et de la distribution longitudinale dans les fibres musculaires squelettiques vivantes du rat par microscopie confocale

Le remodelage du réseau mitochondrial se produit dans des conditions physiologiques de stress et de pathologie. Cependant, les effets du remodelage mitochondrial dans un muscle squelettique restent incomplètement compris. Ce protocole permet de quantifier les changements des mitochondries dans les muscles squelettiques vivants, améliorant ainsi notre compréhension de l’interaction entre les altérations mitochondriales et la fonction cellulaire.

Travailler avec des muscles squelettiques vivants présente des défis en raison de la contraction des fibres pendant l’isolement et de la sensibilité à l’image pendant le balayage confocal. Ce protocole décrit un processus d’isolement à l’aide d’une solution de relaxation, permettant l’analyse de fibres musculaires viables pour l’évaluation mitochondriale par microscopie confocale. Notre protocole répond au manque de flux de travail pour analyser quantitativement les réseaux mitochondriaux dans les fibres musculaires squelettiques.

Les étapes décrites ici permettent aux utilisateurs de tirer le meilleur parti des images obtenues par microscopie confocale en utilisant le traitement d’images par seuillage et l’analyse de Fourier rapide pour obtenir une quantification de la densité et de la distribution mitochondriales. Nous nous intéressons à l’étude de l’altération des muscles squelettiques, en particulier la dynamique mitochondriale et le remodelage structurel mitochondrial pendant l’adversité et comment ils peuvent être modulés par des interventions telles que l’exercice et le jeûne intermédiaire.