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In diesem Artikel

  • Zusammenfassung
  • Zusammenfassung
  • Einleitung
  • Protokoll
  • Ergebnisse
  • Diskussion
  • Offenlegungen
  • Danksagungen
  • Materialien
  • Referenzen
  • Nachdrucke und Genehmigungen

Zusammenfassung

Dieses Manuskript beschreibt die Herstellung von magnetischen und wärmeempfindlichen Mikrogelen über eine temperaturinduzierte Emulsion ohne chemische Reaktion. Diese empfindlichen Mikrogele wurden durch Mischen von Poly ( N- isopropylacrylamid) (PNIPAAm), Polyethylenimin (PEI) und Fe 3 O 4 -NH 2 Nanopartikeln für die potentielle Verwendung in magnetisch und thermisch getriggerter Arzneimittelfreisetzung synthetisiert.

Zusammenfassung

Magnetisch und thermisch empfindliche Poly ( N- isopropylacrylamid) (PNIPAAm) / Fe 3 O 4 -NH 2 -Mikrogele mit dem eingekapselten Anti-Krebs-Medikament Curcumin (Cur) wurden für die magnetisch getriggerte Freisetzung entworfen und hergestellt. PNIPAAm-basierte magnetische Mikrogele mit einer sphärischen Struktur wurden über eine temperaturinduzierte Emulsion hergestellt, gefolgt von einer physikalischen Vernetzung durch Mischen von PNIPAAm, Polyethylenimin (PEI) und Fe 3 O 4 -NH 2 magnetischen Nanopartikeln. Aufgrund ihrer Dispergierbarkeit wurden die Fe 3 O 4 -NH 2 -Nanopartikel in die Polymermatrix eingebettet. Die auf der Fe 3 O 4 -NH 2 und der PEI-Oberfläche exponierten Amin-Gruppen unterstützten die sphärische Struktur durch physikalische Vernetzung mit den Amidgruppen des PNIPAAm. Das hydrophobe Anti-Krebs-Medikament Curcumin kann in Wasser nach der Einkapselung in die Mikrogele dispergiert werden. Die Mikrogele wurden charakterisiertDurch Transmissionselektronenmikroskopie (TEM), Fourier-Transformations-Infrarotspektroskopie (FT-IR) und UV-Vis-Spektralanalyse. Weiterhin wurde die magnetisch getriggerte Freisetzung unter einem externen Hochfrequenzmagnetfeld (HFMF) untersucht. Eine signifikante "Burst-Freisetzung" von Curcumin wurde nach dem Aufbringen des HFMF auf die Mikrogele aufgrund des magnetischen induktiven Erhitzungselements (Hyperthermie) beobachtet. Dieses Manuskript beschreibt die magnetisch getriggerte kontrollierte Freisetzung von Cur-PNIPAAm / Fe 3 O 4 -NH 2 verkapseltem Curcumin, die möglicherweise für die Tumortherapie angewendet werden kann.

Einleitung

Hydrogele sind dreidimensional (3D) polymere Netzwerke, die sich nicht auflösen können, sondern in wässrigen Lösungen aufquellen können 1 . Die polymeren Netzwerke haben hydrophile Domänen (die hydratisiert werden können, um die Hydrogelstruktur zu liefern) und eine vernetzte Konformation (die den Zusammenbruch des Netzwerks verhindern kann). Zur Herstellung von Hydrogelen wurden verschiedene Verfahren untersucht, wie Emulsionspolymerisation, anionische Copolymerisation, Vernetzung von benachbarten Polymerketten und inverse Mikroemulsionspolymerisation 2 . Die physikalische und chemische Vernetzung wird durch diese Methoden eingeführt, um strukturell stabile Hydrogele 1 , 3 zu erhalten . Die chemische Vernetzung erfordert normalerweise die Beteiligung des Vernetzungsmittels, das das Grundgerüst oder die Seitenkette der Polymere verbindet. Im Vergleich zur chemischen Vernetzung ist die physikalische Vernetzung eine bessere Wahl für fabr Ige Hydrogele aufgrund der Vermeidung eines Vernetzungsmittels, da diese Mittel für praktische Anwendungen oft toxisch sind 4 . Es wurden mehrere Ansätze zur Synthese von physikalisch vernetzten Hydrogelen untersucht, wie die Vernetzung mit ionischer Wechselwirkung, Kristallisation, Bindung zwischen amphiphilen Blöcken oder Pfropfen auf die Polymerketten und Wasserstoffbindung 4 , 5 , 6 , 7 .

Stimuli-empfindliche Polymere, die in Abhängigkeit von unterschiedlichen Umgebungsbedingungen ( dh Temperatur, pH-Wert, Licht, Ionenstärke und Magnetfeld) zu konformationellen, chemischen oder physikalischen Eigenschaftsveränderungen führen können, haben in letzter Zeit als potentielle Plattform für Systeme mit kontrollierter Freisetzung Aufmerksamkeit erregt , Arzneimittelabgabe und Anti-Krebs-Therapie 8 , 9 ,Xref "> 10 , 11 , 12. Die Forscher konzentrieren sich auf thermoempfindliche Polymere, bei denen die intrinsische Temperatur leicht kontrollierbar ist. PNIPAAm ist ein wärmeempfindliches Polymer, das sowohl hydrophile Amidgruppen als auch hydrophobe Isopropylgruppen enthält und eine niedrigere kritische Lösungstemperatur aufweist (LCST) 13. Die Wasserstoffbindung zwischen Amidgruppen und Wassermolekülen liefert die Dispersität von PNIPAAm in wässriger Lösung bei niedrigen Temperaturen (unterhalb des LCST), während die Wasserstoffbrücken zwischen Polymerketten bei hohen Temperaturen (oberhalb des LCST) auftreten und Wasser ausschließt Moleküle, so dass das Polymernetzwerk zusammenbricht.Bei dieser einzigartigen Eigenschaft wurden viele Berichte zur Herstellung von temperaturgesteuerten, selbstorganisierten Hydrogelen durch Einstellen des hydrophoben und hydrophilen Verhältnisses der Polymerkettenlänge, wie Copolymerisation, Pfropfung oder Seiten- Kettenmodifikation für PharmazeutikaPlattformen 14 , 15 , 16 , 17 .

Magnetische Materialien wie Eisen, Kobalt und Nickel haben in den vergangenen Jahrzehnten verstärkte Aufmerksamkeit für biochemische Anwendungen erhalten 18 . Unter diesen Kandidaten ist Eisenoxid am häufigsten wegen seiner Stabilität und geringen Toxizität verwendet. Nano-große Eisenoxide reagieren sofort auf das Magnetfeld und verhalten sich wie superparamagnetische Atome. Solche kleinen Teilchen aggregieren jedoch leicht; Das reduziert die Oberflächenenergie und verliert daher ihre Dispersität. Um die Wasserdispersität zu verbessern, werden Pfropfen oder Beschichten zum Schutz der Schicht üblicherweise nicht nur dazu verwendet, jedes einzelne Teilchen auf Stabilität zu trennen, sondern auch die Reaktionsstelle 19 weiter zu funktionalisieren.

Hier haben wir magnetisches PNIPAAm-basiertes Mikro hergestelltGele, um als Arzneimittelträger für Systeme mit kontrollierter Freisetzung zu dienen. Der Syntheseprozess ist in Fig. 1 beschrieben und dargestellt. Anstelle einer komplizierten Copolymerisation und chemischen Vernetzung wurde die neue temperaturinduzierte Emulsion von PNIPAAm mit anschließender physikalischer Vernetzung zur Gewinnung der Mikrogele ohne zusätzliches Tensid oder Vernetzungsmittel eingesetzt. Dies vereinfachte die Synthese und verhinderte eine unerwünschte Toxizität. Innerhalb eines solchen einfachen Präparationsprotokolls boten die as-synthetisierten Mikrogele sowohl für die magnetischen Eisenoxid-Nanopartikel als auch für die hydrophobe Anti-Krebs-Arzneimittel, Curcumin, Wasserdispersion an. FT-IR, TEM und Imaging lieferten Beweise für Dispersion und Verkapselung. Aufgrund des eingebetteten Fe 3 O 4 -NH 2 zeigten die magnetischen Mikrogete das Potential, als Mikrogeräte für die kontrollierte Freisetzung unter HFMF zu dienen.

Protokoll

1. Synthese von oberflächenmodifizierten, wasserdispergierbaren magnetischen Nanopartikeln, Fe 3 O 4 und Fe 3 O 4 -NH 2

  1. Zugabe von 14,02 g FeCl 3 , 8,6 g FeCl 2 · 4H 2 O und 250 mL Wasser zu einem 500 ml-Becherglas.
  2. Verbinden Sie den Rotor und den Regler mit dem mechanischen Rühren. Die Lösung bei 300 U / min für 30 min bei Raumtemperatur (RT) mischen.
  3. Man gibt 25 ml Ammoniumhydroxid (33%) in die Lösung bei RT zu und rührt (300 U / min) für 30 min. Halten Sie den Becher offen.
    ACHTUNG: Ammoniumhydroxid kann bei Einatmen Nasenreizung verursachen. Dieser Schritt muss in einer geeigneten Dunstabzugshaube durchgeführt werden.
  4. Um die magnetischen Eisenoxide (Fe 3 O 4 ) zu sammeln, entfernen Sie das mechanische Rühren. Setzen Sie einen Magnet unter den Becher, um die schwarzen Partikel zu sammeln.
    1. Nachdem die Fe 3 O 4 Nanopartikel vollständig ausgefällt sind, entfernen Sie vorsichtig den Überstand. Schüttle nicht das bEaker beim Ausgießen des Überstandes, um den Verlust von Fe 3 O 4 zu vermeiden.
    2. Entfernen Sie den Magneten und fügen Sie 50 ml Frischwasser zum Becher hinzu.
    3. Schütteln Sie den Becher, um das Fe 3 O 4 erneut zu dispergieren. Wiederholen Sie die Schritte 1.4 bis 1.4.2 dreimal, um das Fe 3 O 4 zu reinigen.
  5. Nach dem letzten Waschvorgang alle Fe 3 O 4 (10 g) in eine 100-ml-Glasflasche überführen. Wasser zugeben, bis das Gesamtlösungsvolumen 100 ml beträgt. Schütteln Sie die Glasflasche kräftig, bis keine Klumpen sichtbar sind.
    HINWEIS: Das Protokoll kann hier pausiert werden. Die Fe 3 O 4 Nanopartikel werden hergestellt.
  6. Das Fe 3 O 4 mit Aminosilan (Fe 3 O 4 -NH 2 ) modifizieren.
    1. Nehmen Sie die 100-ml-Lösung aus Schritt 1.5 und überführen Sie sie in ein 1.000-ml-Becherglas. Füge 10 ml Ammoniaklösung, 90 ml Wasser und 900 ml Ethanol zum Becher hinzu.
    2. Verwenden Sie einen Magnetrührer, um die Lösung zu mischen300 U / min. Man gibt 500 μl (3-Aminopropyl) triethoxysilan (APTES) tropfenweise zum Becher bei RT zu und rührt noch 12 h.
  7. Reinigen und sammeln Sie das Fe 3 O 4 -NH 2 wie in Abschnitt 1.4 beschrieben.
  8. 1 g Fe 3 O 4 -NH 2 (ab Schritt 1.7) in einer 20-ml-Glasflasche mit 20 mL Wasser erneut dispergieren.
    HINWEIS: Das Protokoll kann hier pausiert werden. Die Fe 3 O 4 -NH 2 -Nanopartikel werden hergestellt.

2. Synthese von organisch-anorganischen Hybrid-Mikrogelen durch thermoinduzierte Emulsion

  1. Vorbereitung der Lösung 1-1 und 1-2 .
    1. Für die Lösung 1-1 werden 0,25 g PNIPAAm, 5 ml Fe 3 O 4 -Lösung (aus Schritt 1,5) und 0,2 g PEI zu einer 50-ml-Glasflasche gegeben. Fügen Sie 20 ml Wasser hinzu und verwenden Sie einen Magnetrührstab, um bei 300 U / min für 30 min zu rühren.
    2. Für Lösung 1-2 wiederholen Sie Schritt 2.1.1, aber ersetzen Sie Fe 3 O 4 als Fe3 O 4 -NH 2 -Lösung (ab Schritt 1.8).
  2. Zur Herstellung von Lösung 2 werden 0,8 g PEI und 18,2 ml Wasser zu einer 50-ml-Glasflasche gegeben. Verwenden Sie ein Wasserbad, um die Lösung auf 30 ° C für 30 min aufzuheizen. Vorbereitung einer zweiten Flasche Lösung 2 .
  3. Vorbereitung von PNIPAAm / Fe 3 O 4 .
    1. Verwenden Sie einen Ultraschall-Zell-Disruptor zu sonicate (50 w), ein Magnetrührstab zu rühren (300 U / min) und ein Wasserbad, um Lösung 2 (70 ° C) zu erhitzen.
    2. Die Lösung 1-1 der erhitzten Lösung 2 tropfenweise unter Verwendung einer 3-ml-Spritze mit einer Geschwindigkeit von 1 ml / min zugeben.
    3. Setzen Sie die Beschallung fort, rühren und erhitzen bei 70 ° C für 30 min.
    4. Die Lösung auf RT abkühlen lassen. Entfernen Sie die Lösung aus dem Zellstörer und Wasserbad.
    5. Sammeln Sie die Mikrogele, indem Sie den Magneten nahe an die Glasflasche legen.
    6. Den Überstand entfernen afDie Mikrogele sind auf den Boden der Glasflasche gefällt.
    7. Füge weitere 25 ml Wasser in die Glasflasche und re-dispergieren die Mikrogele durch Vortexen. Diese Lösung ist PNIPAAm / Fe 3 O 4 .
      HINWEIS: Das Protokoll kann hier pausiert werden.
  4. Herstellung von PNIPAAm / Fe 3 O 4 -NH 2 .
    1. Verwenden Sie einen Ultraschall-Zell-Disruptor zu sonicate (50 w), ein Magnetrührstab zu rühren (300 U / min) und ein Wasserbad, um Lösung 2 (70 ° C) zu erhitzen.
    2. Addieren Sie die Lösung 1-2 zu der erhitzten Lösung 2 tropfenweise unter Verwendung einer 3-ml-Spritze mit einer Geschwindigkeit von 1 ml / min.
    3. Setzen Sie die Beschallung fort, rühren und erhitzen bei 70 ° C für 30 min.
    4. Die Lösung auf RT abkühlen lassen. Entfernen Sie die Lösung aus dem Zellstörer und Wasserbad.
    5. Sammeln Sie die Mikrogele, indem Sie den Magneten nahe an die Glasflasche legen.
    6. Sobald die Mikrogele ausfallen, entfernen SieDer Überstand.
    7. Füge weitere 25 ml Wasser in die Glasflasche und re-dispergieren die Mikrogele durch Vortexen. Diese Lösung ist PNIPAAm / Fe 3 O 4 -NH 2 .
      HINWEIS: Das Protokoll kann hier pausiert werden.

3. Herstellung von mit Curcumin beladenen Mikrogelen (Cur-PNIPAAm / Fe 3 O 4 -NH 2 )

HINWEIS: Diese Schritte müssen im Dunkeln durchgeführt werden.

  1. Füge 100 mg Cur und 20 ml Ethanol zu einer 20-ml-Glasflasche hinzu.
  2. Nehmen Sie 2 ml der Cur-Lösung und überweisen Sie auf die PNIPAAm / Fe 3 O 4 -NH 2 -Lösung (Schritt 2.4.7). Rühre bei 400 U / min und RT über Nacht.
  3. Nach dem Rühren bei 400 U / min und RT über Nacht, verwenden Sie den Magneten, um PNIPAAm / Fe 3 O 4 -NH 2 zu sammeln, wie in den Schritten 2.4.5 und 2.4.6 beschrieben.
  4. Füge weitere 25 ml Wasser in die Glasflasche und re-dispergieren die Mikrogele durch Vortexen. Diese Lösung ist C Ur-PNIPAAm / Fe & sub3; O & sub4; -NH & sub2 ;.

4. Magnetisch ausgelöste Drug Release

  1. Übertragen Sie 10 ml der Cur-PNIPAAm / Fe 3 O 4 -NH 2 -Lösung und fügen Sie 2 ml Wasser zu einem 15-mL-Zentrifugationsröhrchen hinzu.
  2. Setzen Sie das Zentrifugationsrohr in die Mitte der Spule, um den HFMF 20 anzuwenden. HFMF bei 15 KHz für 20 min auftragen.
  3. 50 ml der HFMF-Lösung entnehmen und mit frischem 0,5 ml Wasser in jedem 2-minütigen Intervall bei Anwendung des HFMF ersetzen.
  4. Die entnommene Lösung in die 1-ml-Küvette überführen.
  5. Messung der Absorption der entnommenen Lösung durch UV / Vis bei 482 nm 21 .
  6. Bestimmen Sie die Konzentration der freigesetzten Medikamente unter Verwendung der Beziehung von Absorption und Konzentration von einer Standard-Eichkurve 22 .
    HINWEIS: Die Standard-Kalibrierrelation ist:
    S / ftp_upload / 55648 / 55648eq1.jpg "/>
    Wobei der Korrelationskoeffizient 0,9993 beträgt.

5. Charakterisierung der magnetischen Mikrogele

  1. Thermogravimetrischer Analysator (TGA) 23 .
    1. Messen Sie den Gewichtsverlust von PNIPAAm / Fe 3 O 4 und PNIPAAm / Fe 3 O 4 -NH 2 gegenüber der Temperatur unter Luftatmosphäre durch TGA.
      1. Die Probe von RT auf 100 ° C erhitzen und 10 min bei 10 ° C aufnehmen, um Feuchtigkeit zu vermeiden. Die Probe von 100 ° C auf 800 ° C mit einer Geschwindigkeit von 10 ° C / min erhitzen. Wiegen Sie die Proben.
      2. Zeichnen Sie den Gewichtsverlust gegen die Temperatur von PNIPAAm / Fe 3 O 4 und PNIPAAm / Fe 3 O 4 -NH 2 .
        HINWEIS: Das Restgewicht ist entweder Fe 3 O 4 oder Fe 3 O 4 -NH 2 , während das verlorene Gewicht PNIPAAm ist.
  2. FT-IR"> 24
    1. Trocknen Sie 10 mg Probe mit 1 g KBr bei 100 ° C über Nacht.
    2. Drücken Sie die Mischung aus Schritt 5.2.1 in Pellets, wie in den folgenden Schritten beschrieben (5.2.2.1 - 5.2.2.5):
      1. Schleifen Sie die Materialien aus Schritt 5.2.1 in ein feines Pulver mit einem Mörser und Pistill.
      2. Setzen Sie den zusammengebauten Apparat (Mörser und Stößel) in die Pelletpresse. Richten Sie das Gerät in der exakten Mitte der Presse aus.
      3. Pumpen Sie die Presse, bis ein Druck von 20.000 psi erreicht ist. Lassen Sie das Pellet bei diesem Druck für 5 min sitzen.
        VORSICHT: Richten Sie das Gerät in der exakten Mitte der Presse aus, sonst wird die Probe aus dem Mörser herausdrücken und Verletzungen durch die Belichtung verursachen.
      4. Entfernen Sie die Matrize, die das Pellet und den Kolben enthält, aus der Presse.
      5. Drehen Sie ihn um und pumpen Sie den Kolben, um das Pellet herauszuziehen.
    3. Aufzeichnen der FT-IR-Absorptionsspektren von Proben durch FT-IR bei Frequenzen im Bereich von 400 bis 4.000 cm -1 mit 4 cm -1 Auflösung 24 .
  3. Morphologiebeobachtungen nach TEM 25 .
    1. Die Probenlösung auf ein mit einem Kollodion beschichtetes Kupfergitter tropfen und dann bei RT oder in einem 70 ° C-Ofen über Nacht trocknen lassen.
    2. Nehmen Sie TEM Bilder.
      HINWEIS: Starke Elektronenstrahlen können die Proben beschädigen. Daher sollten TEM-Bilder so schnell wie möglich genommen werden.
  4. Wässrige Dispersionsfähigkeiten von Polymeren und Mikrogelen.
    1. Zur Vorbereitung der PNIPAAm-Lösung werden 7 mg PNIPAAm und 7 ml Wasser zu einer 7-ml-Glasflasche gegeben. Verwenden Sie einen Wirbel, um die Lösung zu mischen, bis es keine Aggregate gibt.
    2. Zur Herstellung von PNIPAAm / Fe 3 O 4 -NH 2 -Lösung werden 0,7 ml PNIPAAm / Fe 3 O 4 -NH 2 -Lösung (Schritt 2.4.7) auf eine 7-ml-Glasflasche gegeben und 6,3 ml Wasser zugesetzt. Verwenden Sie einen Wirbel, um die Lösung zu mischen, bis es keinen Niederschlag gibt.
    3. Zur Vorbereitung von Cur-PNIPAAM / Fe 3 O 4 -NH 2 -Lösung, 0,7 ml Cur-PNIPAAm / Fe 3 O 4 -NH 2 -Lösung (Schritt 3,4) zu einer 7-ml-Glasflasche überführen und 6,3 ml Wasser zugeben. Verwenden Sie einen Wirbel, um die Lösung zu mischen, bis es keinen Niederschlag gibt.
    4. Nehmen Sie ein Bild von den Lösungen (Schritte 5.4.1 - 5.4.3) mit einer Digitalkamera.
    5. Legen Sie die Lösungen in einen Ofen und stellen Sie die Temperatur auf 70 ° C. 2 Stunden bis zum Gleichgewicht warten
    6. Nehmen Sie ein anderes Bild von den Lösungen. Um die Temperatur aufrechtzuerhalten, nehmen Sie das Bild innerhalb von 1 min. Vermeiden Sie es, die Glasflasche zu schütteln, da dies die Niederschläge re-dispergieren kann.
  5. Zur magnetischen Sammlung von Mikrogelen legen Sie den starken Magneten in die Nähe der Cur-PNIPAAm / Fe 3 O 4 -NH 2 -Lösung (Schritt 5.4.3). Warten Sie, bis die Mikrogele vollständig gesammelt sind, dann nehmen Sie ein Bild.
    1. Entfernen Sie den Magneten und verwirren Sie die Mikrogel-Lösung bis vollständig dispergiert. Nehmen Sie ein anderes Bild.

Ergebnisse

Das Schema zur Synthese von PNIPAAm / PEI / Fe 3 O 4 -NH 2 -Mikrogelen ist in 1 gezeigt . TGA wurde angewendet, um die relative Zusammensetzung der organischen Verbindung gegen das gesamte Mikrogel zu schätzen. Da nur die organische Verbindung PNIPAAm verbrannt werden konnte, wurde die relative Zusammensetzung von PNIPAAm und Fe 3 O 4 (oder Fe 3 O 4 -NH 2 ) bestimmt und ...

Diskussion

Die wichtigsten Schritte der Präparation sind im Protokollabschnitt 2 für die Synthese der magnetischen Mikrogele durch thermoinduzierte Emulsion. Wie in Fig. 2 (TEM-Bilder) gezeigt, konnte die sphärische Struktur von Mikrogelen aufgrund der physikalischen Vernetzung aufgrund der starken H-Bindung zwischen PNIPAAm (Amidgruppen), PEI (Aminogruppen) auf RT (niedriger als das LCST) gehalten werden, Und Fe & sub3; O & sub4; -NH & sub2; (Amingruppen). Basierend auf dem Vergleich i...

Offenlegungen

Die Autoren haben nichts zu veröffentlichen.

Danksagungen

Diese Arbeit wurde finanziell vom Ministerium für Wissenschaft und Technologie von Taiwan (MOST 104-2221-E-131-010, MOST 105-2622-E-131-001-CC2) unterstützt und teilweise unterstützt vom Institut für Atom- und Molekulare Wissenschaften, Academia Sinica

Materialien

NameCompanyCatalog NumberComments
Poly(N-isopropylacrylamide)Polyscience, Inc21458-10Mw ~40,000
(3-aminopropyl)trimethoxysilaneSigma-Aldrich440140> 99 %
Iron(II) chloride tetrahydrateSigma-Aldrich4493999%
Iron(III) chlorideSigma-Aldrich15774097%
CurcuminSigma-Aldrich00280590
Ammonia hydroxideFisher ChemicalA/3240/PB1535%
Phosphate Buffered SalineSigma-Aldrich806552pH 7.4, liquid, sterile-filtered
Polyethylenimine (PEI)Sigma-AldrichP314350 % (w/v) in water
High-frequency magnetic field (HFMF)Lantech Industrial Co., Ltd.,TaiwanLT-15-8015 kV, 50–100 kHz
Ultraviolet-Visible SpectrophotometryThermo Scientific Co.Genesys
Transmission electron microscopy (TEM)JEM-2100JEOL
Fourier transform infrared spectroscopy (FTIR)PerkinElmerSpectrum 100
Thermogravimetric analyzerPerkinElmerPyris 1
Ultrasonic cell disruptorHielscher UltrasonicsUP50H

Referenzen

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