Operationsverfahren und Vorsichtsmaßnahmen der Lingnan-Feuernadeltherapie bei Osteoporose-Modellratten

Zusammenfassung

Im Folgenden stellen wir ein Protokoll für die Anwendung der Lingnan Fire-Needle Therapie bei der Intervention von Osteoporose-Modellratten vor.

Zusammenfassung

Im Vergleich zur fadenförmigen Nadeltherapie hat die Feuernadeltherapie sowohl die Stimulation der Nadeln als auch die wärmende Wirkung der Wärme, wodurch sie unerwartete Auswirkungen auf einige chronische und unheilbare Krankheiten hat. Osteoporose (OP) hat eine hohe Inzidenz bei postmenopausalen Frauen und Männern mittleren Alters und älteren Männern, und der Behandlungszyklus ist lang. Laut Traditioneller Chinesischer Medizin (TCM) hat die Lingnan-Feuernadeltherapie Potenzial bei der Behandlung von Osteoporose gezeigt. Bis es flächendeckend eingesetzt werden kann, ist es jedoch noch ein weiter Weg. Dieser Artikel konzentriert sich auf die Anwendung der Lingnan-Feuernadeltherapie bei der Intervention von OP bei Ratten. Es behandelt die Auswahl von Nadelwerkzeugen, die Auswahl von Akupunkturpunkten, die Positionierung von Rattenkörpern und Fixierungsmethoden. Wir skizzieren auch die Schritte und Vorsichtsmaßnahmen, die während und nach der Vernadelung mit Feuernadeln zu treffen sind. Das Experiment wurde mit drei Gruppen durchgeführt: einer Normalgruppe, einer Modellgruppe und einer Feuernadelgruppe, die jeweils 10 Ratten umfassten. Die Ratten in der Feuernadel-Gruppe wurden sechs Sitzungen lang mit Feuernadel-Interventionen behandelt. Nach der Interventionsphase sammelten wir Femurproben und führten Mikro-CT-Scans durch. Die Ergebnisse deuten darauf hin, dass Fire Needling die Knochenmorphologie und Mineraldichte bei OP-Ratten verbessern kann. Diese Informationen können als methodische Grundlage für die Grundlagenforschung zur Feuernadeltherapie dienen.

Einleitung

Die chinesische Medizin geht davon aus, dass Faktoren wie Klima und Umwelt den Körperbau einer Person beeinflussen können, was sich wiederum auf das Auftreten und die Entwicklung von Krankheiten auswirkt. Die Region Lingnan in China, zu der hauptsächlich Guangdong, Guangxi und die Insel Hainan gehören, liegt in der tropischen Monsun-Klimaregion. Das hat zur Folge, dass Menschen, die längere Zeit in dieser Region leben, anfällig für eine Form von Milzschwäche sind. In einigen Fällen breitet es sich auf die Niere und die Leber aus, was zur Prävalenz von Osteoporose^{führt 1}. Die Milz und der Magen übernehmen die Funktion des Transports und der Aufnahme von Wasser und Getreide, die die Quelle für Qi und Blutbiochemie sind, während die Leber zur Erhaltung des Knochenmarks beiträgt. Die Knochenernährung hängt also von der Versorgung der Milz, des Magens und der Leber ab. In der chinesischen Medizin ist die Niere in der Lage, Knochenmark zu bilden und Knochen zu stärken, und ihre Vitalität wirkt sich direkt auf die Stärke und Funktion der Knochen aus. Daher steht Nierenversagen in direktem Zusammenhang mit Osteoporose. Laut TCM sind Leber- (Gan)-Nierenmangel (Shen) und Essenzmangel (Jing) die zugrundeliegenden Ursachen. In einigen Fällen kann eine Mangelernährung aufgrund eines Mangels an Milz (Pi) und Magen (Wei) oder eines Ungleichgewichts der beiden auftreten. Das heißt, der Mangel an Leber (Gan), Nieren (Shen), Milz (Pi) und Magen (Wei) sind die Hauptursachen, während externes Qi (Xie Qi) die Meridiane blockiert und Knochen und Muskeln schädigt. Nach Angaben der Weltgesundheitsorganisation (WHO) ist OP eine Erkrankung, die durch geringe Knochenmasse und Gewebeverschlechterung gekennzeichnet ist², was für ältere Menschen ein ernstes Problem darstellt. Die Auswahl geeigneter Interventionen ist entscheidend für die Prävention und Behandlung von Osteoporose.

Moderne Akupunkteure haben eine einzigartige Lingnan-Eigenschaft der Fire-Needling-Therapie entwickelt, indem sie das Klima von Lingnan mit den körperlichen Eigenschaften der Lingnan-Menschen kombinieren³. Die Feuernadeltherapie ist eine Art Behandlungsmethode, bei der spezielle Nadeln rot gebrannt und schnell in bestimmte Teile oder Akupunkturpunkte des menschlichen Körpers gestochen werden, um verschiedene Beschwerden zu behandeln. Diese Methode wird häufig bei Hautkrankheiten, Muskel-Skelett- und Gelenkerkrankungen, neurologischen Erkrankungen und anderen systemischen Erkrankungen eingesetzt und zeigt eine gute Wirksamkeit⁴. Die Behandlung von Osteoporose mit Feuernadeln wird seit langem in Kliniken angewendet und hat eine bessere heilende Wirkung als die einfache Akupunktur oder die orale Verabreichung der traditionellen chinesischen Medizin ^5,6,7. Die Lingnan-Feuernadeltherapie integriert Akupunktur, dreischneidige Nadeln und narbenbildende Moxibustion. Es kann das Qi und die Durchblutung der Meridiane verbessern und gleichzeitig die Niere erwärmen. Diese Behandlung kann sowohl die Blutstauung als auch den Nierenmangel (Shen) behandeln, die zur Pathogenese der OP in der TCM beitragen. Darüber hinaus hat es die Vorteile, dass es kostengünstig ist, eine schnelle Wirkung hat, eine kurze Behandlungsdauer hat und sicher ist. Es gibt jedoch einen Mangel an Forschung über seinen Mechanismus. In dieser Arbeit wird ein spezifisches Verfahren der Lingnan Fire-Needle bei Osteoporose-Modellratten vorgestellt und eine methodische Grundlage für die Durchführung entsprechender Grundlagenforschung geschaffen.

Protokoll

Alle Versuche wurden nach dem National Institutes of Health - Leitfaden für die Pflege und Verwendung von Labortieren durchgeführt und von der Hubei University of TCM - Institutional Animal Care and Use Committee genehmigt. Für den Test wurden erwachsene weibliche Sprague-Dawley-Ratten (SD) mit einem Gewicht von 220 ± 20 g verwendet. Alle Ratten wurden in einem 12-stündigen Hell-Dunkel-Zyklus bei 23 ± 1 °C und 40 % bis 50 % Luftfeuchtigkeit gehalten, mit freiem Zugang zu Futter und Wasser.

1. Präoperative Vorbereitung

1. Gruppendesign
   1. Nach der Genotypisierung von 30 3 Monate alten weiblichen Ratten werden sie nach dem Zufallsprinzip in drei Gruppen (n = 10 in jeder Gruppe) eingeteilt: die Normalgruppe, die Modellgruppe und die Feuernadelgruppe. Behandeln Sie die Ratten in der Feuernadel-Gruppe 1x täglich für 6 Sitzungen mit einer Feuernadel-Intervention, mit 1 Tag Pause zwischen den Sitzungen.
      HINWEIS: Die normale Gruppe und die Modellgruppe hängten die Ratte mit einem sicheren Mantel gefesselt mit der gleichen Häufigkeit und der gleichen Dauer wie die Feuernadelgruppe auf, jedoch ohne die Feuernadelbehandlung.
2. Erstellung eines Osteoporose-Modells für Ratten
   1. Bei den Ratten in der Modellgruppe und der Feuernadelgruppe wird die Eierstöcke chirurgisch entfernt, um ein Osteoporosemodell zu erstellen, wie in ^8,9,10 beschrieben.
      1. Bei der Ovariektomie ist vor der Operation eine Anästhesie durch intraperitoneale Injektion von 2 % Pentobarbital-Natrium (0,2 ml/100 g) durchzuführen und die Anästhesie als erfolgreich anzusehen, wenn die Tiere in einer chirurgischen Anästhesieebene aufgrund eines mangelnden Ansprechens auf einen Zehenkneiftest nicht ansprechen. Verwenden Sie Tierarztsalbe auf den Augen, um Trockenheit während der Narkose zu verhindern. Injizieren Sie Buprenorphin (0,05 mg/kg) subkutan als Analgetikum vor der Operation. Halten Sie während des Betriebs aseptische Bedingungen aufrecht.
         HINWEIS: Wenn die Operation nicht abgeschlossen ist und die Ratte Anzeichen einer Wiederbelebung zeigt, kann die intraperitoneale Injektion von 2% iger Pentobarbital-Natriumlösung vorübergehend und angemessen ergänzt werden, wobei jede zusätzliche Dosis 20% der injizierten Gesamtmenge nicht überschreiten darf.
      2. Legen Sie die Ratten nach der Operation auf ein Heizkissen für Kleintiere und stellen Sie die Temperatur auf 32 °C ein. Lassen Sie Ratten nicht unbeaufsichtigt, bis sie wieder zu Bewusstsein kommen und frei kriechen können. Geben Sie sie nicht in die Gesellschaft anderer Tiere zurück, bis sie sich vollständig erholt haben.
      3. Wenn die Ratten wiederbelebt werden, überprüfen Sie die Nähte auf Unversehrtheit und setzen Sie die Ratten wieder in den Käfig. Injizieren Sie allen Ratten intramuskulär Penicillin-Natrium (50.000 U pro Tag, 3 Tage lang) und injizieren Sie intraperitoneal 0,1 ml 0,05% Diclofenac-Natriumlösung (pro Tag, 3 Tage lang), um Infektionen zu verhindern und die Heilung zu beschleunigen ^9,10.
   2. Beobachten Sie den Östruszyklus gemäß dem vaginalen exfoliierten Zellabstrich weiblicher Ratten, wie in¹¹ beschrieben. Ist der Zyklus ungeordnet, wird das Modell erfolgreich etabliert¹¹.
      HINWEIS: Es dauert ungefähr 8-12 Wochen, bis Ratten nach einer Ovariektomie Osteoporose entwickeln.
3. Auswahl an Nadelwerkzeugen
   1. Kaufen Sie Feuernadeln von Herstellern medizinischer Geräte. Stellen Sie sicher, dass Nadelwerkzeuge aus einer Wolfram-Mangan-Legierung bestehen, die temperaturbeständig, nicht formbar, nicht leicht zu verformen und gleichmäßig erhitzt wird. Die Feuernadel hat die Form einer Filamentnadel. Stellen Sie sicher, dass die Nadel dick ist, die Spitze scharf und gerade ist und der Griff mit Kupferdraht umwickelt ist, der wärmeisolierend ist und die Hände nicht verbrennt.
   2. Wählen Sie eine Einkopf-Feuernadel mit einer Größe von 0,40 mm x 13 mm, da Ratten klein sind. Prüfen Sie, ob die Feuernadel Widerhaken und Risse aufweist.
      HINWEIS: In der klinischen Praxis werden die meisten der verwendeten Feuernadeln von He Puren, einem nationalen medizinischen Master¹², entwickelt. Auf dieser Grundlage schuf Lin Guohua die Lingnan Langkopf-Feuernadel und die Lingnan Dreiköpfige Feuernadel¹³. Wählen Sie je nach Bedarf des Experiments verschiedene Größen von Feuernadeln.
4. Auswahl und Positionierung von Akupunkturpunkten
   1. Wählen Sie entsprechend den relevanten Daten und der Literatur Akupunkturpunkte für die Behandlung von postmenopausaler Osteoporose aus.
      HINWEIS: Die am häufigsten verwendeten Akupunkturpunkte sind, in der Reihenfolge ihrer Häufigkeit, Shenshu (BL 23), Zusanli (ST 36), Pishu (BL 20), Xuanzhong (GB 39) und Dazhu (BL 11)^14,15. In der Grundlagenforschung zur Akupunkturintervention bei Osteoporose bei deovulatorischen Modellratten sind die am häufigsten verwendeten Akupunkturpunkte Shenshu (BL 23), Sanyinjiao (SP 6), Guanyuan (CV 4) und Zusanli (ST 36)16,17,18.
   2. Bestimmen Sie die für dieses Experiment ausgewählten Akupunkturpunkte. Unter Bezugnahme auf die in früheren Studien^{ausgewählten} Akupunkturpunkte 14,15,16,17,18 und die Pathogenese der Osteoporose wählen Sie für diese Studie vier Akupunkturpunkte aus, nämlich Shenshu (BL 23), Pishu (BL 20), Zusanli (ST 36) und Sanyinjiao (SP 6). Diese entsprechen dem Blasenmeridian, dem Du-Meridian, dem Milzmeridian und dem Nierenmeridian.
      HINWEIS: Es ist verboten, Feuernadeln an Teilen mit großen Gefäßen und Nervenstämmen zu verwenden.
   3. Rasieren Sie die Akupunkturstelle mit einem elektrischen Haarschneider für Haustiere, bevor Sie sie positionieren, um den Akupunkturpunkt freizulegen.
   4. Die Position der Akupunkturpunkte bezieht sich auf die Namen und die Position der häufig verwendeten Akupunkturpunkte in¹⁹. Lokalisieren Sie die Akupunkturpunkte wie folgt: Das Shenshu (BL 23) befindet sich an den unteren beiden Seiten des zweiten Lendenwirbels, 6 mm von der mittleren Rückenlinie entfernt; der Pishu (BL 20) befindet sich zwischen den Rippen an den unteren beiden Seiten des 12^. Brustwirbels, 6 mm von der mittleren Rückenlinie entfernt; das Zusanli (ST 36) befindet sich an der hinteren und lateralen Seite des Knies, etwa 3 mm unterhalb des kleinen Wadenbeinkopfes; und Sanyinjiao (SP 6) befindet sich etwa 10 mm gerade von der Spitze des inneren Knöchels der Hintergliedmaße entfernt.
   5. Markieren Sie sie mit einem Marker auf Ölbasis, nachdem Sie die Punkte lokalisiert haben.
5. Methode der Rattenfixierung
   ANMERKUNG: Um den Stress während der Immobilisierung und Behandlung von Ratten zu reduzieren, wurde als Immobilisierungsmethode die suspendierten Ratten, die mit einem sicheren Mantel^20,21 gebunden sind, gewählt. Die Methode der Rattenfellaufhängung hat folgende Vorteile: Zum einen nutzt sie die Gewohnheit der Ratte, eine dunkle Umgebung zu bevorzugen, voll aus und reduziert die Stressreaktion der Ratte während der Fixierung. Zweitens sind die Schweberatten während des gesamten Prozesses der Fire-Needling-Behandlung ruhiger und kooperativer, da es an ihren Gliedmaßen und Zehen keine Kraftpunkte gibt. Drittens waren die Akupunkturpunkte am Rücken und an den Gliedmaßen der Ratten ausreichend freigelegt, um die Behandlung zu erleichtern. Eine einzige Behandlung erfordert eine Fixierung der Ratte für 5-10 Minuten. Wenn sie sicher im Fell sitzen, kämpfen Ratten nicht mit dem Gurt und sind ruhig.
   1. Bereiten Sie das Rattenfell vor. Nähen Sie den gereinigten Stoff und machen Sie ihn zu einem 50 cm x 13 cm großen röhrenförmigen Rattenmantel. Schneide Löcher für jedes der vier Gliedmaßen und die Rückseite des Rattenmantels und nähe Krawatten an den vier Ecken.
   2. Ziehen Sie Handschuhe an, setzen Sie die Ratte auf einen nicht rutschigen Tisch, halten Sie den Schwanz der Ratte mit der linken Hand fest und ziehen Sie sie vorsichtig zurück. Öffne mit der rechten Hand die Öffnung des Rattenmantels. Wenn du die Gewohnheit der Ratte nutzt, dunkel zu sein und zu graben, platziere sie an der Mündung des Rattenfells, die Ratte würde sich von selbst darin eingraben.
   3. Wenn sich die Ratte in die Mitte des Rattenfells eingräbt, halte mit der linken Hand beide Seiten der Schulterblätter der Ratte fest und ziehe mit der rechten Hand die beiden Vorderbeine der Ratte heraus.
   4. Ziehe die Seile an der Vorderseite des Mantels fest, kreuze die Seile und wickle sie um den Rücken der Ratte. Passen Sie die Elastizität der Seile an und binden Sie den Knoten auf dem Rücken der Ratte. Zum Schluss fixieren Sie das hintere Ende des Rattenkörpers auf ähnliche Weise, so dass sich seine beidseitigen Hinterbeine außerhalb des Rattenfells befinden.
   5. Für die Schaukelaufhängung nehmen Sie zwei S-Haken und haken sie in den Knoten auf der Rückseite des Rattenmantels ein und haken die Haken am Eisenrahmen ein. Zu diesem Zeitpunkt wird die Ratte in einem leicht schwingenden Zustand an dem Stoffstreifen aufgehängt (Abbildung 1).
      HINWEIS: Die Höhe des Stoffstreifens vom Boden beträgt ca. 70 cm, damit der Experimentator, der auf einem Hocker sitzt, bequem und mühelos arbeiten kann. Legen Sie vorsichtshalber eine dicke Polsterung auf die ebene Fläche unter der Ratte, falls das Tier ausrutscht.

2. Akupunktur-Behandlung

1. Desinfektion
   1. Sterilisieren Sie den lokalen Bereich 3x vor der Akpunktur mit 5%iger Iodophor-Desinfektionslösung. Geben Sie nach jedem Iodophor-Peeling Alkohol ein.
2. Brennende Nadeln
   HINWEIS: Es sollten Sicherheitsvorkehrungen getroffen werden, um Verbrennungen und Verletzungen zu vermeiden.
   1. Nehmen Sie die hämostatische Pinzette, um den mit 95% Alkohol getränkten Wattebausch mit der linken Hand aufzunehmen und zünden Sie ihn mit einem Feuerzeug an.
   2. Halten Sie den Griff der Nadel mit Daumen, Zeigefinger und Mittelfinger der rechten Hand in einer leicht gebogenen Position, als ob Sie einen Stift halten würden.
   3. Legen Sie die Nadelspitze und den Nadelkörper auf die Alkoholwattebällchen und erhitzen Sie sie; Erhitzen Sie zuerst den Nadelkörper und dann die Nadelspitze. Brennen Sie die Nadel, bis sie je nach Behandlungszweck hellweiß oder rot ist (Abbildung 2).
      HINWEIS: Der Nadelkörper sollte vollständig hellweiß oder rot verbrannt sein, da er sonst die Wirksamkeit der Akupunktur beeinträchtigt oder postoperative Infektionen und andere Probleme verursacht.
3. Akupunktur
   HINWEIS: Je nach Geschwindigkeit, Tiefe, Reichweite, Verweilzeit der Nadel und Behandlungszweck kann die Lingnan Fire-Needle in verschiedene Operationstechniken wie Punktakupunktur, Streuakupunktur, dichte Akupunktur, schnelle Akupunktur und langsame Akupunktur^{unterteilt werden 22}. Der Schlüssel zum Betrieb mit der Lingnan Fire-Needle ist rot, präzise und schnell.
   1. Warten Sie, bis die Nadel rot brennt, bewegen Sie die Nadel von der Flamme weg und halten Sie sie über den Akupunkturpunkt.
   2. Richten Sie die Nadelspitze senkrecht auf den Akupunkturpunkt, stechen Sie schnell ein und ziehen Sie sie heraus. Stellen Sie sicher, dass der gesamte Vorgang innerhalb von 1 s abgeschlossen ist.
   3. Die Eindringtiefe der Akupunkturpunkte beträgt ca. 1-2 mm, durchstechen Sie nur die glühende Nadelspitze.
      HINWEIS: Die Tiefe der Akupunktur sollte in Abhängigkeit von dem Zustand, der Konstitution, dem Alter, der Muskeldicke des Akupunkturpunkts, der Tiefe der Blutgefäße und der Verteilung der Nerven bestimmt werden.
   4. Punktion jedes Akupunkturpunkts 3x-5x. Wiederholen Sie dies für alle Akupunkturpunkte (Abbildung 3).
      HINWEIS: Seien Sie bei der Durchführung des Vorgangs voll konzentriert und agil. Bei der gleichen Prozedur bei einer Ratte sollte die gleiche Feuernadel verwendet werden, wobei die Nadel durch Flammen zwischen jeweils zwei Einstichen erneut sterilisiert wird; Die Nadel sollte nicht abgelegt werden oder unsteril werden.

3. Behandlung nach der Akupunktur

1. Heben Sie die Feuernadel von der Haut weg und halten Sie einen sterilen, trockenen Wattebausch, um das Nadelloch zu drücken und ein Ausbluten zu vermeiden. Nach der Feuernadeltherapie zeigten die Ratten eine uneingeschränkte Beweglichkeit und keine nachweisbaren Komplikationen.
   HINWEIS: Wenn nach dem Fire Needling Blutungen auftreten, muss die Blutung nicht gestoppt werden, sondern wischen Sie sie einfach mit einem trockenen Wattebausch ab, nachdem sie auf natürliche Weise gestoppt wurde.

4. Datenerhebung und -analyse

1. Nach 6 Zyklen der Fire-Needling-Intervention werden die Ratten durch hochdosierte intraperitoneale Injektion von Pentobarbital-Natrium (150-200 mg/kg) eingeschläfert. Entnahme von Oberschenkelproben und Durchführung von Mikro-CT-Scans²³.
2. Analysieren Sie die Daten statistisch mit Hilfe von Analysesoftware. Zeigen Sie Messungen als Mittelwert an und analysieren Sie sie mit einer unidirektionalen ANOVA, wobei p <0,05 als statistisch signifikant angesehen wird.

Ergebnisse

Die Daten in Tabelle 1 zeigen, dass im Vergleich zur Normalgruppe die Dicke des trabekulären Knochens (Tb.Th), die Anzahl der trabekulären Knochen (Tb.N) und der statische Parameter Knochenvolumenanteil des trabekulären Knochens (BV/TV) in der Modellgruppe signifikant reduziert waren (p <0,05) und die Trennung von trabekulärem Knochen (tb.Sp) erhöht war (p <0,05); Dies deutet darauf hin, dass die Knochenstruktur des trabekulären Knochens in trabekulären knochenang...

Diskussion

Die Lingnan-Feuernadeltherapie hat einen tiefgreifenden historischen Hintergrund. Aufzeichnungen über Brandnadeln und Vernadelungsmethoden lassen sich bis nach Huangdi Neijing zurückverfolgen. Die modernen Akupunkteure Situ Bell und Zhang Jiawei kombinierten das Klima von Lingnan und die körperlichen Eigenschaften seiner Bewohner, um die Lingnan-Feuernadel-Therapie³ zu entwickeln. Lin Guohua fasste die Lingnan-Feuernadeltherapie zusammen als wärmend, ausbagger...

Materialien

Name	Company	Catalog Number	Comments
75% Alcohol	Shandong Lircon medicaltechnology co., ltd		Disinfection
95% Alcohol	Shandong Lircon medicaltechnology co., ltd		Burn needles
Adult female Sprague-Dawley (SD) rats	Liaoning Changsheng biotechnology co., Ltd.	SCXK 2020-0001	Modeling of osteoporosis
Deluxe thermostat heat mat	Zhenhua Instruments		For maintaining the body temperature of rats.
Diclofenac sodium injection	Shandong Province Jianmu Bio-pharmaceutical Co.	150182913	Antipyretic and analgesic
Elevated fixation rack	Taizhou Shi Ai Scientific and Educational Instruments and Equipment Co.		Fix rats
Fire needles	Beijing Luoya Shanchuan Medical Equipment Co., Ltd.	20190240	A tool of needling
Hemostatic forceps	Qingdao Schultz Biotechnology Co.		Fix rats
Liguter	Shanghai Machi Trading Co.	H5	Ignite alcohol
Lodophor disinfecting solution	Qingdao Hai's Hainuo Inovation Disinfection Technology Co., Ltd.	2016-0604	Disinfection
Medical cotton ball	Jiangsu Misawa Medical Supplies Co., Ltd.	20172142357	Disinfection
pentobarbital sodium	Beijing Jiehui Biotechnology Co.	P3761	anesthesia
Pet electric clipper	Fenghua Xikou Lubao Knives & Scissors Electrical Appliance Factory		Shave the hair of rats
Self-made rat coat			Fix rats
Tweezers	Qingdao Schultz Biotechnology Co.		Pinch cotton balls