Procédure d’opération et précautions de la thérapie à l’aiguille de feu Lingnan chez les rats modèles d’ostéoporose

Résumé

Ici, nous présentons un protocole pour l’application de la thérapie Lingnan Fire-Needle dans l’intervention de rats modèles d’ostéoporose.

Résumé

Par rapport à la thérapie par aiguille filiforme, la thérapie par aiguille de feu a à la fois la stimulation des aiguilles et l’effet chauffant de la chaleur, ce qui lui confère des effets inattendus sur certaines maladies chroniques et maladies incurables. L’ostéoporose (OP) a une incidence élevée chez les femmes ménopausées et les hommes d’âge moyen et âgés, et le cycle de traitement est long. Selon la médecine traditionnelle chinoise (MTC), la thérapie à l’aiguille de feu Lingnan a montré un potentiel dans le traitement de l’ostéoporose. Cependant, il reste encore un long chemin à parcourir avant qu’il puisse être largement utilisé. Cet article se concentre sur l’application de la thérapie à l’aiguille de feu Lingnan dans l’intervention de la PO chez le rat. Il couvre la sélection des outils d’aiguille, la sélection des points d’acupuncture, le positionnement du corps des rats et les méthodes de fixation. Nous décrivons également les étapes et les précautions à prendre pendant et après l’aiguilletage avec des aiguilles à feu. L’expérience a été réalisée avec trois groupes : un groupe normal, un groupe modèle et un groupe d’aiguilles à feu, chacun contenant 10 rats. Les rats du groupe à l’aiguille de feu ont été traités avec une intervention à l’aiguille de feu pendant six séances. Après la période d’intervention, nous avons prélevé des échantillons fémoraux et effectué des micro-tomodensitogrammes. Les résultats suggèrent que l’aiguilletage par le feu peut améliorer la morphologie osseuse et la densité minérale chez les rats OP. Ces informations peuvent servir de base méthodologique pour mener des recherches fondamentales sur la thérapie par aiguilles de feu.

Introduction

La médecine chinoise croit que des facteurs tels que le climat et l’environnement peuvent affecter le physique d’une personne, ce qui affecte à son tour l’apparition et le développement de maladies. La région de Lingnan en Chine, qui comprend principalement le Guangdong, le Guangxi et l’île de Hainan, est située dans la région du climat tropical de la mousson. En conséquence, les personnes vivant dans cette région depuis longtemps sont sujettes à une forme de carence en rate. Dans certains cas, elle se propage aux reins et au foie, entraînant la prévalence de l’ostéoporose¹. La rate et l’estomac fonctionnent en transportant et en absorbant l’eau et les grains, qui sont la source du qi et de la biochimie du sang, tandis que le foie aide à maintenir les moelles. Ainsi, la nutrition osseuse repose sur l’approvisionnement de la rate, de l’estomac et du foie. En médecine chinoise, le rein est capable de générer de la moelle osseuse et de renforcer les os, et sa vitalité affecte directement la force et la fonction des os. Par conséquent, l’insuffisance rénale est directement liée à l’ostéoporose. Selon la MTC, la carence hépatique (Gan)-rénale (Shen) et le manque d’essence (Jing) sont les causes sous-jacentes. Dans certains cas, la malnutrition peut survenir en raison d’une déficience de la rate (Pi) et de l’estomac (Wei) ou d’un déséquilibre des deux. C’est-à-dire que la déficience du foie (Gan), des reins (Shen), de la rate (Pi) et de l’estomac (Wei) en sont les causes profondes, tandis que le qi externe (Xie qi) bloque les méridiens et endommage les os et les muscles. Selon l’Organisation mondiale de la santé (OMS), l’OP est une affection médicale caractérisée par une faible masse osseuse et une détérioration des tissus², ce qui est une grave préoccupation pour les personnes âgées. Le choix d’interventions appropriées est crucial pour la prévention et le traitement de l’ostéoporose.

Les acupuncteurs modernes ont développé une caractéristique unique de Lingnan de la thérapie par aiguille par le feu en combinant le climat de Lingnan et les caractéristiques physiques des gens de Lingnan³. La thérapie à l’aiguille de feu est une sorte de méthode de traitement dans laquelle des aiguilles spéciales sont brûlées rouges et rapidement percées dans des parties spécifiques ou des points d’acupuncture du corps humain pour traiter divers maux. Cette méthode est largement utilisée dans les maladies de la peau, les maladies musculo-squelettiques et articulaires, les maladies neurologiques et d’autres maladies systémiques et montre une bonne efficacité⁴. Le traitement de l’ostéoporose avec des aiguilles de feu est utilisé dans les cliniques depuis longtemps, et il a un meilleur effet curatif que la simple acupuncture ou l’administration orale de la médecine traditionnelle chinoise ^5,6,7. La thérapie à l’aiguille de feu Lingnan intègre l’acupuncture, les aiguilles à trois tranchants et la moxibustion cicatricielle. Il peut améliorer le qi et la circulation sanguine dans les méridiens tout en réchauffant les reins. Ce traitement peut traiter à la fois la stase sanguine et l’insuffisance rénale (Shen), qui contribuent à la pathogenèse de l’OP dans la MTC. De plus, il présente l’avantage d’être peu coûteux, d’avoir des effets rapides, une courte période de traitement et d’être sûr. Cependant, il y a un manque de recherches sur son mécanisme. Cet article présente une procédure spécifique de l’aiguille de feu Lingnan chez des rats modèles d’ostéoporose et fournit une base méthodologique pour mener des recherches fondamentales connexes.

Protocole

Toutes les expériences ont été menées conformément au Guide pour le soin et l’utilisation des animaux de laboratoire des National Institutes of Health et ont été approuvées par le Comité institutionnel de protection et d’utilisation des animaux de l’Université de MTC du Hubei. Des rats femelles adultes de 220 ± 20 g ont été utilisés pour l’essai. Tous les rats ont été maintenus sur un cycle lumière/obscurité de 12 heures à 23 ± 1 °C et 40 à 50 % d’humidité, avec un accès libre à la nourriture et à l’eau.

1. Préparation préopératoire

1. Conception de groupe
   1. Après avoir génotyypage 30 rats femelles de 3 mois, divisez-les au hasard en trois groupes (n = 10 dans chaque groupe) : le groupe normal, le groupe modèle et le groupe à aiguille de feu. Traitez les rats du groupe avec une intervention à l’aiguille à feu 1x par jour pendant 6 séances, avec 1 jour de repos entre les séances.
      REMARQUE : Le groupe normal et le groupe modèle ont suspendu le rat lié avec une couche sûre selon la même fréquence et la même durée que le groupe à l’aiguille de feu, mais sans le traitement à l’aiguille de feu.
2. Préparation du modèle d’ostéoporose chez le rat
   1. Pour les rats du groupe modèle et du groupe à aiguille de feu, enlever chirurgicalement leurs ovaires pour établir un modèle d’ostéoporose tel que décrit en ^8,9,10.
      1. Pour l’ovariectomie, administrer l’anesthésie par injection intrapéritonéale de pentobarbital sodique à 2 % (0,2 ml/100 g) avant l’opération, et considérer que l’anesthésie est réussie lorsque les animaux ne répondent pas dans un plan chirurgical de l’anesthésie en raison de l’absence de réponse à un test de pincement des orteils. Utilisez une pommade vétérinaire sur les yeux pour prévenir la sécheresse sous anesthésie. Injecter de la buprénorphine (0,05 mg/kg) par voie sous-cutanée comme analgésique avant la chirurgie. Maintenir des conditions aseptiques pendant l’opération.
         REMARQUE : Si l’intervention chirurgicale n’est pas terminée et que le rat présente des signes de réanimation, l’injection intrapéritonéale d’une solution sodique de pentobarbital à 2% peut être complétée temporairement et de manière appropriée, chaque dose supplémentaire ne dépassant pas 20% de la quantité totale injectée.
      2. Après l’opération, placez les rats sur un coussin chauffant pour petit animal et réglez la température à 32 °C. Ne laissez pas les rats sans surveillance jusqu’à ce qu’ils reprennent conscience et puissent ramper librement. Ne les remettez pas en compagnie d’autres animaux avant qu’ils ne soient complètement rétablis.
      3. Lorsque les rats sont ranimés, vérifiez l’intégrité des sutures et remettez-les dans la cage. Injecter par voie intramusculaire de la pénicilline sodique (50 000 U par jour, pendant 3 jours) et injecter par voie intrapéritonéale 0,1 mL de solution de diclofénac sodique à 0,05 % (par jour, pendant 3 jours) pour prévenir l’infection et accélérer la guérison ^9,10.
   2. Observez le cycle œstral en fonction du frottis vaginal exfolié des rats femelles, comme décrit au^{point 11}. Si le cycle est perturbé, le modèle est établi avec succès¹¹.
      REMARQUE : Il faut environ 8 à 12 semaines pour que les rats développent une ostéoporose après une ovariectomie.
3. Sélection d’outils à aiguille
   1. Achetez des aiguilles à feu auprès de fabricants de dispositifs médicaux. Assurez-vous que les outils à aiguille sont fabriqués en alliage de tungstène-manganèse, qui résiste à la température, n’est pas malléable, ne se déforme pas facilement et chauffe uniformément. L’aiguille de feu a la forme d’une aiguille à filament. Assurez-vous que l’aiguille est épaisse, que la pointe est tranchante et droite et que le manche est enveloppé de fil de cuivre, qui est isolant thermiquement et ne brûle pas les mains.
   2. Choisissez une aiguille à feu à tête unique de 0,40 mm x 13 mm, car les rats sont petits. Vérifiez si l’aiguille à feu a des ardillons et des fissures.
      REMARQUE : Dans la pratique clinique, la plupart des aiguilles à feu utilisées sont celles développées par He Puren, un maître médical national¹². Sur cette base, Lin Guohua a créé l’Aiguille de Feu à Longue Tête Lingnan et l’Aiguille de Feu à Trois Têtes^{Lingnan 13}. Choisissez différentes tailles d’aiguilles à feu en fonction du besoin de l’expérience.
4. Sélection et positionnement des points d’acupuncture
   1. Selon les données et la littérature pertinentes, sélectionnez des points d’acupuncture pour le traitement de l’ostéoporose post-ménopausique.
      REMARQUE : Les points d’acupuncture les plus fréquemment utilisés sont, par ordre de fréquence, Shenshu (BL 23), Zusanli (ST 36), Pishu (BL 20), Xuanzhong (GB 39) et Dazhu (BL 11)^14,15. Dans la recherche fondamentale sur l’intervention d’acupuncture pour l’ostéoporose chez les rats modèles désovulatoires, les points d’acupuncture les plus utilisés sont Shenshu (BL 23), Sanyinjiao (SP 6), Guanyuan (CV 4) et Zusanli (ST 36)16,17,18.
   2. Déterminez les points d’acupuncture sélectionnés pour cette expérience. En se référant aux points d’acupuncture sélectionnés dans les études précédentes 14,15,16,17,18 et à la pathogenèse de l’ostéoporose, sélectionnez quatre points d’acupuncture, à savoir, Shenshu (BL 23), Pishu (BL 20), Zusanli (ST 36) et Sanyinjiao (SP 6), pour cette étude. Ceux-ci correspondent au méridien de la vessie, au méridien de Du, au méridien de la rate et au méridien du rein.
      REMARQUE : Il est interdit d’utiliser des aiguilles à feu sur des pièces avec de gros vaisseaux et des troncs nerveux.
   3. Rasez le site d’acupuncture avec une tondeuse électrique pour animaux de compagnie avant de le positionner pour exposer le point d’acupuncture.
   4. L’emplacement des points d’acupuncture fait référence aux noms et à l’emplacement des points d’acupuncture couramment utilisés en¹⁹. Localisez les points d’acupuncture comme suit : le Shenshu (BL 23) est situé sur les deux côtés inférieurs de la deuxième vertèbre lombaire, à 6 mm de la ligne médiane dorsale ; le Pishu (BL 20) est situé entre les côtes sur les deux côtés inférieurs de la 12^e vertèbre thoracique, à 6 mm de la ligne médiane dorsale ; le Zusanli (ST 36) est situé sur la face postérieure et latérale du genou, à environ 3 mm en dessous de la petite tête du péroné ; et Sanyinjiao (SP 6) est situé à environ 10 mm vers le haut de l’extrémité de la cheville interne du membre postérieur.
   5. Marquez-les avec un marqueur à base d’huile après avoir localisé les points.
5. Méthode de contention du rat
   REMARQUE : Afin de réduire le stress lors de l’immobilisation et du traitement des rats, les rats suspendus liés avec un pelage sécurisé^20,21 ont été choisis comme méthode d’immobilisation. La méthode de suspension du pelage du rat présente les avantages suivants : Tout d’abord, elle tire pleinement parti de l’habitude du rat de préférer un environnement sombre et réduit la réaction de stress du rat lors de la fixation. Deuxièmement, les rats suspendus sont plus silencieux et plus coopératifs pendant tout le processus de traitement par aiguilletage par le feu en raison de l’absence de points de force sur leurs membres et leurs orteils. Troisièmement, les points d’acupuncture sur le dos et les membres des rats ont été suffisamment exposés pour faciliter le traitement. Un seul traitement nécessite de retenir le rat pendant 5 à 10 minutes. Lorsqu’ils sont en sécurité dans le pelage, les rats ne luttent pas dans la contention et sont calmes.
   1. Préparez le pelage de rat. Cousez le tissu nettoyé et faites-en un manteau de rat en forme de tube de 50 cm x 13 cm. Découpez des trous pour chacun des quatre membres et le dos du pelage de rat et cousez des attaches aux quatre coins.
   2. Mettez des gants, placez le rat sur une table qui n’est pas glissante, tenez la queue du rat avec la main gauche et tirez doucement vers l’arrière. Ouvrez le port de la pelure de rat avec la main droite. En utilisant l’habitude du rat de s’enfoncer et de s’enfouir, placez-le à la bouche du pelage du rat, le rat s’y enfouirait de lui-même.
   3. Lorsque le rat s’enfonce au milieu du pelage du rat, utilisez la main gauche pour tenir les deux côtés des omoplates du rat et tirez les deux membres antérieurs du rat avec la main droite.
   4. Serrez les cordes sur le devant du pelage, croisez les cordes et enroulez-les autour du dos du rat. Ajustez l’élasticité des cordes et faites le nœud sur le dos du rat. Enfin, fixez l’extrémité arrière du corps du rat de la même manière afin que ses membres postérieurs bilatéraux soient situés à l’extérieur du pelage du rat.
   5. Pour la suspension de type balançoire, prenez deux crochets en S et accrochez-les dans le nœud à l’arrière du manteau de rat et accrochez les crochets sur le cadre en fer. À ce stade, le rat est suspendu à la bande de tissu, dans un état de balancement léger (Figure 1).
      REMARQUE : La hauteur de la bande de tissu par rapport au sol est d’environ 70 cm, pour que l’expérimentateur assis sur un tabouret puisse fonctionner confortablement et sans effort. Placez un rembourrage épais sur la surface plane sous le rat par précaution si l’animal glisse.

2. Traitement d’acupuncture

1. Désinfection
   1. Stérilisez la zone locale avec une solution désinfectante à l’iodophore à 5 % 3 fois avant l’acupuncture. Ajoutez un mélange d’alcool après chaque gommage à l’iodophore.
2. Brûler des aiguilles
   REMARQUE : Des précautions de sécurité doivent être prises pour éviter les brûlures et les blessures.
   1. Prenez la pince hémostatique pour prélever la boule de coton, imbibée d’alcool à 95%, avec la main gauche et allumez-la avec un briquet.
   2. Tenez le manche de l’aiguille avec le pouce, l’index et le majeur de la main droite dans une position légèrement incurvée, comme si vous teniez un stylo.
   3. Placez la pointe et le corps de l’aiguille sur les boules de coton à l’alcool et chauffez-les ; Chauffez d’abord le corps de l’aiguille, puis chauffez la pointe de l’aiguille. Brûlez l’aiguille jusqu’à ce qu’elle devienne blanche ou rouge vif, selon l’objectif du traitement (figure 2).
      REMARQUE : Le corps de l’aiguille doit être entièrement brûlé en blanc ou rouge, sinon cela affectera l’efficacité de l’acupuncture ou provoquera une infection postopératoire et d’autres problèmes.
3. Acupuncture
   REMARQUE : En fonction de la vitesse, de la profondeur, de la portée, du temps de rétention de l’aiguille et de l’objectif du traitement, l’aiguille de feu Lingnan peut être divisée en diverses techniques opératoires telles que l’acupuncture ponctuelle, l’acupuncture par dispersion, l’acupuncture dense, l’acupuncture rapide et l’acupuncture lente²². La clé pour opérer avec Lingnan Fire-Needle est rouge, précise et rapide.
   1. Attendez que l’aiguille brûle en rouge, éloignez l’aiguille de la flamme et maintenez-la au-dessus du point d’acupuncture.
   2. Pointez la pointe de l’aiguille verticalement vers le point d’acupuncture, percez rapidement et retirez-la. Assurez-vous que l’ensemble du processus est terminé en 1 s.
   3. La profondeur de pénétration des points d’acupuncture est d’environ 1 à 2 mm, ne percez que la pointe de l’aiguille chauffée au rouge.
      REMARQUE : La profondeur de l’acupuncture doit être déterminée en fonction de l’état, de la constitution, de l’âge, de l’épaisseur musculaire du point d’acupuncture, de la profondeur des vaisseaux sanguins et de la distribution des nerfs.
   4. Percez chaque point d’acupuncture 3 à 5 fois. Répétez cette opération pour tous les points d’acupuncture (Figure 3).
      REMARQUE : Lors de l’exécution de l’opération, soyez pleinement concentré et agile. Dans la même procédure sur un rat, la même aiguille de feu doit être utilisée, l’aiguille étant restérilisée par flamme entre deux piqûres ; L’aiguille ne doit pas être placée vers le bas ou devenir non stérile.

3. Prise en charge post-acupuncture

1. Soulevez l’aiguille à feu pour l’éloigner de la peau et tenez une boule de coton sèche stérile pour appuyer sur le trou de l’aiguille afin d’éviter tout saignement. Après la thérapie à l’aiguille de feu, les rats ont montré une mobilité non altérée et aucune complication détectable.
   REMARQUE : Si un saignement après l’aiguilletage du feu se produit, il n’est pas nécessaire d’arrêter le saignement, il suffit d’essuyer avec une boule de coton sèche après qu’il s’arrête naturellement.

4. Collecte et analyse des données

1. Après 6 cycles d’intervention par aiguilletage, euthanasier les rats par injection intrapéritonéale à forte dose de pentobarbital sodique (150-200 mg/kg). Prélever des échantillons de fémur et effectuer des micro-tomodensitogrammes²³.
2. Analysez les données statistiquement à l’aide d’un logiciel d’analyse. Montrer les mesures sous forme de moyenne et les analyser à l’aide de l’ANOVA à un facteur, p <0,05 étant considérée comme statistiquement significative.

Résultats

Les données du tableau 1 montrent que, par rapport au groupe normal, l’épaisseur de l’os trabéculaire (Tb.Th), le nombre d’os trabéculaire (Tb.N) et la fraction du volume osseux de l’os trabéculaire (BV/TV) dans le groupe modèle étaient tous significativement réduits (p <0,05), et la séparation de l’os trabéculaire (Tb.Sp) était élevée (p <0,05) ; indiquant que la structure osseuse de l’os trabéculaire dans les zones enrichies en os trabéculair...

Discussion

La thérapie à l’aiguille de feu de Lingnan a un profond arrière-plan historique. Les archives sur les aiguilles à feu et les méthodes d’aiguilletage remontent à Huangdi Neijing. Les acupuncteurs modernes Situ Bell et Zhang Jiawei ont combiné le climat de Lingnan et les caractéristiques physiques de ses habitants pour créer la thérapie à l’aiguille de feu de Lingnan³. Lin Guohua a résumé la thérapie à l’aiguille de feu de Lingnan comme étant...

matériels

Name	Company	Catalog Number	Comments
75% Alcohol	Shandong Lircon medicaltechnology co., ltd		Disinfection
95% Alcohol	Shandong Lircon medicaltechnology co., ltd		Burn needles
Adult female Sprague-Dawley (SD) rats	Liaoning Changsheng biotechnology co., Ltd.	SCXK 2020-0001	Modeling of osteoporosis
Deluxe thermostat heat mat	Zhenhua Instruments		For maintaining the body temperature of rats.
Diclofenac sodium injection	Shandong Province Jianmu Bio-pharmaceutical Co.	150182913	Antipyretic and analgesic
Elevated fixation rack	Taizhou Shi Ai Scientific and Educational Instruments and Equipment Co.		Fix rats
Fire needles	Beijing Luoya Shanchuan Medical Equipment Co., Ltd.	20190240	A tool of needling
Hemostatic forceps	Qingdao Schultz Biotechnology Co.		Fix rats
Liguter	Shanghai Machi Trading Co.	H5	Ignite alcohol
Lodophor disinfecting solution	Qingdao Hai's Hainuo Inovation Disinfection Technology Co., Ltd.	2016-0604	Disinfection
Medical cotton ball	Jiangsu Misawa Medical Supplies Co., Ltd.	20172142357	Disinfection
pentobarbital sodium	Beijing Jiehui Biotechnology Co.	P3761	anesthesia
Pet electric clipper	Fenghua Xikou Lubao Knives & Scissors Electrical Appliance Factory		Shave the hair of rats
Self-made rat coat			Fix rats
Tweezers	Qingdao Schultz Biotechnology Co.		Pinch cotton balls