Verwenden Sie für die Durchführung der Myomerkryoverletzung bei Zebrafischen eine speziell angefertigte Kryosonde aus Edelstahl. Um Erfrierungen bei der Handhabung der Sonde während des Eingriffs zu vermeiden, führen Sie den Sondengriff in eine Pipettenspitze ein und befestigen Sie ihn, indem Sie ihn mit Klebeband umwickeln. Bevor Sie mit der Kryoverletzung beginnen, bereiten Sie ein Becherglas für die Anästhesiearbeitslösung, einen Löffel für den Umgang mit dem Fisch, einen feuchten Schwamm und einen Tank mit Systemwasser für die Wiederherstellung des Fisches nach dem Eingriff vor.
Bereiten Sie die Anästhesielösung vor, indem Sie die auf dem Bildschirm angezeigten Schritte befolgen. Anschließend vier Milliliter der vorbereiteten Stammlösung zu 100 Milliliter Systemwasser in einem Becherglas geben, um die Tricain-Arbeitslösung herzustellen. Um mit der Kryoverletzung zu beginnen, tauchen Sie die Sonde mindestens drei Minuten lang in flüssigen Stickstoff.
Befeuchten Sie den Schwamm mit Systemwasser und legen Sie ihn auf eine ebene Fläche. Bestätigen Sie dann ein bis zwei Minuten, nachdem Sie einen einzelnen erwachsenen Zebrafisch in die Tricain-Arbeitslösung gegeben haben, dass er nicht reagiert, indem Sie den Fisch vorsichtig mit dem Löffel berühren. Legen Sie den betäubten Fisch auf den nassen Schwamm.
Lokalisieren Sie den Schwanzstiel hinter der Afterflosse und vor der Schwanzflosse. Entfernen Sie in diesem Stadium die Kryosonde aus dem flüssigen Stickstoff. Schütteln Sie die Sonde vorsichtig, um sicherzustellen, dass kein flüssiger Stickstoffrest auf der Spitze verbleibt.
Legen Sie den Rand des Spatels senkrecht zum Körper auf den Schwanzstiel. Halten Sie die Sonde sechs Sekunden lang in dieser Position, ohne Druck auszuüben, bevor Sie die Kryosonde aus dem Gewebe lösen. Übertragen Sie die Fische dann in das Systemwasser im Auffangbecken.
Beobachten Sie den Fisch, während er nach dem Aufwachen aus der Narkose wieder atmet und schwimmt. Wenn nach 30 Sekunden keine operativen Bewegungen auftreten, stimulieren Sie den Fisch, indem Sie Systemwasser in die Kiemen pipettieren, bis das Tier von selbst die Atmung einleitet. Videoaufzeichnungen von Kontroll- und kryoverletzten Fischen einen Tag nach der Verletzung oder DPCI zeigten, dass die kryoverletzten Fische zwar weniger aktiv schwammen, aber keine abnormalen Bewegungen wie Wirbeln, Faltungen oder Gleichgewichtsstörungen zeigten.
Im Haltungssystem war ihre Position im Becken und die Nahrungsaufnahme ähnlich wie bei den unverletzten Fischen. Wie bei 5 DPCI beobachtet, war das normale Verhalten immer noch anhaltend, was darauf hindeutet, dass die Kryoverletzung das Wohlbefinden der Tiere nicht ernsthaft beeinträchtigte.
