Um mit der Zellkultur zu beginnen, bereiten Sie das DMEM-Kulturmedium und die für die Zellkultur erforderlichen Lösungen vor. Säen Sie 1 x 10 auf die 6. HEK293-Zellen in einer 60-Millimeter-Platte oder einer 6-Well-Platte pro Behandlungsbedingung plus Kontrolle. Behandeln Sie die Zellen am nächsten Tag mit DNA-Protein-Crosslinks (DPCs), Induktoren Ihrer Wahl.
Um DPCs, ihre Ubiquitylierung und SUMOylierung zu induzieren, sammeln Sie die Zellen nach 20, 60 und 180 Minuten oder zwei Stunden im Falle von nicht-enzymatischen DPCs. Um die PARylierung von TOP1-DPCs zu induzieren, werden die Zellen eine Stunde lang mit 10 mikromolaren Poly-ADP-Ribose-Glykohydrolase oder PARP-Inhibitoren PDD00017273 vorbehandelt, bevor sie 20, 60 und 180 Minuten lang mit 20 mikromolaren Camptothecin gleichzeitig behandelt werden.
