Schalten Sie zunächst das Gerät ein und wählen Sie den T-Zell-Transduktionsprozess über die Touchscreen-Oberfläche aus. Klicken Sie auf "Ausführen", um den Vorgang zu starten, und folgen Sie den Anweisungen auf dem Bildschirm. Geben Sie auf dem Perimeter-Eingabebildschirm die Initialen des Bedieners, den Schlauchsatz, die Chargennummer und das Verfallsdatum ein.
Wählen Sie als Nächstes den vollständigen Prozess auf dem Prozess-Setup-Bildschirm aus. Wählen Sie nun zwei Durchstechflaschen mit Auswahlreagenz für die CD4-, CD8-Auswahlmethode. Installieren Sie das Schlauchset, stellen Sie sicher, dass alle Köderverbindungen fest sitzen, und führen Sie die oberen und unteren Integritätstests durch, indem Sie den Anweisungen auf dem Touchscreen folgen.
Befestigen Sie nun die Medium- und Verarbeitungspufferbeutel gemäß der Anleitung auf dem Bildschirm und beginnen Sie mit der automatischen Ansaugung des Schlauchsets. Sobald der Produktbildschirm der Transferzelle angezeigt wird, überführen Sie das aufgetaute T-Zell-Produkt in einen 150-Milliliter-Transferbeutel und schweißen Sie ihn steril an den Anwendungsbeutel des Schlauchsets. Verwenden Sie als Nächstes einen Qualitätskontrollbeutel, um eine Probe aus dem Anwendungsbeutel zu entnehmen, und führen Sie eine Zellzählung mit einem Hämatologie-Analysegerät durch.
Verbinden Sie die CD4- und CD8-Reagenzfläschchen mit dem Schlauchset und starten Sie den Auswahlprozess für die T-Zell-Anreicherung. Entnehmen Sie nach der Anreicherung eine Probe der ausgewählten Zellen aus dem Qualitätskontrollbeutel für die Wiederaufnahmebeutel. Geben Sie die gewünschte Zellkonzentration und Startnummer ein.
Bringen Sie nun eine Durchstechflasche mit dem Aktivierungsreagenz gemäß den Anweisungen auf dem Bildschirm an. Stellen Sie dann die Kohlendioxidkonzentration auf 5 % und die Temperatur der Kulturkammer auf 39 Grad Celsius ein. Erstellen Sie die Aktivitätsmatrix mit dem erweiterten Fütterungsprotokoll als Ausgangspunkt und passen Sie die einzelnen Schritte an Ihr spezifisch optimiertes Protokoll an.
Stellen Sie in diesem Fall die Transduktionsaktivitätszeit auf 24 Stunden nach der Aussaat und die Kulturwäsche auf 48 Stunden nach der Transduktion ein. Stellen Sie die Aktivierungszeit des Schüttlers so ein, dass sie 30 Minuten nach Beginn des Kulturwaschvorgangs beginnt. Löschen Sie alle Aktivitäten zum Austausch von Mediumsäcken und Abfallsäcken, da sie nicht mehr benötigt werden.
Drücken Sie dann OK auf dem Bildschirm, um die Kultivierung zu starten. Lassen Sie das Gerät automatisch das erforderliche Volumen aus dem Wiederauftragsbeutel in die Kulturkammer pumpen. Das berechnete Vektorvolumen wird in einem 20-Milliliter-Reagenzbeutel mit einem kalten Medium aufgetaut und vorbereitet, um ein Endvolumen von 10 Millilitern zu erreichen.
Passen Sie die Aktivitätsmatrix an, um die Transduktionszeit auf zwei Minuten in die Zukunft zu setzen, und drücken Sie OK, um die Transduktionsaktivität zu starten. Schweißen Sie den Vektorbeutel steril an das Schlauchset und befolgen Sie dabei die Anweisungen auf dem Bildschirm. Ändern Sie die Aktivitätsmatrix entsprechend der tatsächlichen Transduktionsstartzeit, wobei die Kulturwäsche 48 Stunden nach der Transduktion geplant ist.
Planen Sie die Zeit für die Aktivierung des Shakers auf 30 Minuten nach dem Kulturwaschen. Stellen Sie schließlich sicher, dass der Medienaustausch am sechsten Tag nachmittags um 14:00 Uhr stattfindet. Drücken Sie die Taste für die Probe und befolgen Sie die Anweisungen auf dem Bildschirm, um eine Qualitätskontrollprobe aus der aktiven Kultur zu entnehmen.
Teilen Sie die Probe für verschiedene Analysen in drei Aliquots von einem Milliliter auf. Bereiten Sie den endgültigen Formulierungspuffer vor und heben Sie einen Teil für die spätere Kryoprotektivenvorbereitung auf. Passen Sie als Nächstes die Aktivitätsmatrix an, indem Sie das Ende der Kultur auf zwei Minuten in der Zukunft festlegen.
Befestigen Sie den endgültigen Formulierungspuffer am Schlauchset und beginnen Sie mit der Ernte. Versiegeln und entfernen Sie den Beutel mit der Zielzelle. Dieser Beutel enthält die CAR-T-Zellen, die für die Infusion oder Kryokonservierung bereit sind.
Die RT-Läufe der klinischen Studie betrugen 46 %Dies deutet darauf hin, dass der TCT-Prozess die Zellexpansion effektiv förderte. Die Zellviabilität des Endprodukts lag zwischen 88 und 94 % und die Reinheit der CD3-T-Zellen bei 89 bis 93 %. Endotoxin, Mykoplasmen, Sterilität, replikationskompetentes Lentivirus und verbleibende leukämische Zellen waren nicht nachweisbar.
