Puncta Analyzer Plug-in für Bild J von Barry Wark (aktuelle Adresse: Physion Consulting) geschrieben wurde im Labor von Ben A. Barres (Stanford University). Finanzierung; <ul><li> Alfred P. Sloan Foundation </li><li> Die Esther A. und Joseph Klingenstein Fund, Inc. </li><li> Broad Biomedical Research Foundation </li><li> Heilung für Huntington-Krankheit Initiative </li></ul>

<ol>
	<li>Barres, B. A., Silverstein, B. E., Corey, D. P., Chun, L. L. Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Immunological,+morphological,+and+electrophysiological+variation+among+retinal+ganglion+cells+purified+by+panning.">Immunological, morphological, and electrophysiological variation among retinal ganglion cells purified by panning.</a> Neuron. 1, 791-803 (1988).</li><li>Meyer-Franke, A., Kaplan, M. R., Pfrieger, F. W., Barres, B. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Characterization+of+the+signaling+interactions+that+promote+the+survival+and+growth+of+developing+retinal+ganglion+cells+in+culture.">Characterization of the signaling interactions that promote the survival and growth of developing retinal ganglion cells in culture.</a> Neuron. 15, 805-819 (1995).</li><li>Eroglu, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Gabapentin+receptor+alpha2delta-1+is+a+neuronal+thrombospondin+receptor+responsible+for+excitatory+CNS+synaptogenesis.">Gabapentin receptor alpha2delta-1 is a neuronal thrombospondin receptor responsible for excitatory CNS synaptogenesis.</a> Cell. 139, 380-392 (2009).</li><li>Pfrieger, F. W., Barres, B. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Synaptic+efficacy+enhanced+by+glial+cells+in+vitro.">Synaptic efficacy enhanced by glial cells in vitro.</a> Science. 277, 1684-1687 .</li><li>Ullian, E. M., Sapperstein, S. K., Christopherson, K. S., Barres, B. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Control+of+synapse+number+by+glia.">Control of synapse number by glia.</a> Science. 291, 657-661 (2001).</li><li>Christopherson, K. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Thrombospondins+are+astrocyte-secreted+proteins+that+promote+CNS+synaptogenesis.">Thrombospondins are astrocyte-secreted proteins that promote CNS synaptogenesis.</a> Cell. 120, 421-433 (2005).</li><li>Godement, P., Salaun, J., Imbert, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Prenatal+and+postnatal+development+of+retinocollicular+projections+in+the+mouse.">Prenatal and postnatal development of retinocollicular projections in the mouse.</a> J. Comp. Neurol. 230, 552-575 (1985).</li><li>Schmidt, J. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Formation+of+retinotopic+connections:+selective+stabilization+by+an+activity-dependent+mechanism.">Formation of retinotopic connections: selective stabilization by an activity-dependent mechanism.</a> Cell. Mol. Neurobiol. 5, 65-84 (1985).</li><li>Sachs, G. M., Jacobson, M., Caviness, V. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Postnatal+changes+in+arborization+patterns+of+murine+retinocollicular+axons.">Postnatal changes in arborization patterns of murine retinocollicular axons.</a> J. Comp. Neurol. 246, 395-408 (1986).</li><li>Elmariah, S. B., Oh, E. J., Hughes, E. G., Balice-Gordon, R. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Astrocytes+regulate+inhibitory+synapse+formation+via+Trk-mediated+modulation+of+postsynaptic+GABAA+receptors.">Astrocytes regulate inhibitory synapse formation via Trk-mediated modulation of postsynaptic GABAA receptors.</a> J. Neurosci. 25, 3638-3650 (2005).</li><li>Hughes, E. G., Elmariah, S. B., Balice-Gordon, R. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Astrocyte+secreted+proteins+selectively+increase+hippocampal+GABAergic+length,+branching+and+synaptogenesis.">Astrocyte secreted proteins selectively increase hippocampal GABAergic length, branching and synaptogenesis.</a> Moll. Cell. Neurosci. 43, 136-145 (2010).</li></ol>

Die Synapse oben beschriebenen Test wird im Rahmen unserer experimentellen Ziele, wobei wir vor allem Fokus auf exzitatorische Projektionen RGCs basieren, entweder in gereinigtem Kultur oder im Gehirn Abschnitt. Wir haben eine Referenz Tabelle mit Antikörpern, die gut für die Kennzeichnung Synapsen (Tabelle 1). Diese Synapsen Test lässt sich an Synapsen bei jedem neuronalen Population oder einer anderen synaptischen Subtyp, für die es eine selektive prä-und postsynaptischen Marker zu qu...

<table border="1" cellpadding="0" cellspacing="0"><tbody><tr><td></td><td> Antigen </td><td> Spezies </td><td> Monoklonale / polyklonale </td><td> Verkäufer </td><td> Catalog Number </td><td> Verdünnung </td><td> Works in Kultur </td><td> Works in den Abschnitten </td></tr><tr><td rowspan="10"> Präsynaptische </td><td> Synapsin </td><td> Kaninchen </td><td> Polyklonale </td><td> Synaptic Systems </td><td> 106004 </td><td> 1:750 </td><td> Y </td><td> ND </td></tr><tr><td> Synapsin </td><td> Maus </td><td> Monoklonale </td><td> Synaptic Systems </td><td> 106001 </td><td> 1:500 </td><td> Y </td><td> Y </td></tr><tr><td> Fagott </td><td> Maus </td><td> Monoklonale </td><td> Assay Designs </td><td> VAM-PS003F </td><td> 1:500 </td><td> Y </td><td> Y </td></tr><tr><td> Fagott </td><td> Guinea Pig </td><td> Polyklonale </td><td> Synaptic Systems </td><td> 141004 </td><td> 1:1000 </td><td> Y </td><td> ND </td></tr><tr><td> Synaptotagmin 1 </td><td> Kaninchen </td><td> Polyklonale </td><td> Synaptic Systems </td><td> 105002 </td><td> 1:750 </td><td> Y </td><td> N </td></tr><tr><td> Synaptobrevin 2 (C1.69.1) </td><td> Maus </td><td> Monoklonale </td><td> Synaptic Systems </td><td> 104211 </td><td> 1:500 </td><td> Y </td><td> Y </td></tr><tr><td> Synaptophysin (C1.7.2) </td><td> Maus </td><td> Monoklonale </td><td> Synaptic Systems </td><td> 101011 </td><td> 1:500 </td><td> Y </td><td> Y </td></tr><tr><td> VGLUT1 </td><td> Maus </td><td> Monoklonale </td><td> Millipore </td><td> MAB5502 </td><td> 1:2500 </td><td> N </td><td> Y </td></tr><tr><td> VGLUT1 </td><td> Meerschweinchen </td><td> Polyklonale </td><td> Millipore </td><td> AB5905 </td><td> 1:2500 </td><td> N </td><td> Y </td></tr><tr><td> VGLUT2 </td><td> Meerschweinchen </td><td> Polyklonale </td><td> Millipore </td><td> AB2251 </td><td> 1:2500 </td><td> N </td><td> Y </td></tr><tr><td rowspan="6"> Postsynaptischen </td><td> PSD-95 (6G6-1C9-Klon) </td><td> Maus </td><td> Monoklonale </td><td> Affinity Bio-Reagenzien </td><td> MA1-045 </td><td> 1:750 </td><td> Y </td><td> N </td></tr><tr><td> PSD-95 </td><td> Kaninchen </td><td> Polyklonale </td><td> Zymed </td><td> 51-6900 </td><td> 1:500 </td><td> N </td><td> Y </td></tr><tr><td> Homer </td><td> Maus </td><td> Monoklonale </td><td> Synaptic Systems </td><td> 160011 </td><td> 1:500 </td><td> Y </td><td> ND </td></tr><tr><td> Homer </td><td> Ratte </td><td> Polyklonale </td><td> Millipore </td><td> AB5875 </td><td> 1:500 </td><td> Y </td><td> Y </td></tr><tr><td> Gephyrin </td><td> Kaninchen </td><td> Polyklonale </td><td> Synaptic Systems </td><td> 147003 </td><td> 1:500 </td><td> Y </td><td> Y </td></tr><tr><td> Gephyrin </td><td> Maus </td><td> Monoklonale </td><td> Synaptic Systems </td><td> 147 </td><td> 1:200 </td><td> Y </td><td> Y </td></tr></tbody></table> Tabelle 1: Listen Beispiele für gute prä-und postsynaptischen Markern, die wir erfolgreich in unseren Synapsen Assay genutzt haben. Seien Sie sich bewusst, dass dies nicht eine vollständige Liste aller verfügbaren Markern. Y = Ja, N = Nein, ND = nicht bestimmt. <table border="1" cellpadding="0" cellspacing="0"><tbody><tr><td> Reagens </td><td> Firma </td><td> Cat. Nein. </td></tr><tr><td> PBS </td><td> Invitrogen </td><td> 20012-027 </td></tr><tr><td> Poly-D-Lysin </td><td> Sigma </td><td> P6407 </td></tr><tr><td> Laminin </td><td> Cultrex </td><td> 3400-010-01 </td></tr><tr><td> Triton X-100 </td><td> Roche Diagnostics GmbH </td><td> 9002-93-1 </td></tr><tr><td> Normalem Ziegenserum </td><td> Gibco </td><td> 16210 </td></tr><tr><td> Vectashield mit DAPI </td><td> Vector Laboratories </td><td> H-1200 </td></tr><tr><td> Oktober </td><td> Tissue-Tek </td><td> 4583 </td></tr><tr><td> Tris-Base (50 mM) </td><td> Fischer </td><td> BP152-5 </td></tr><tr><td> Bovine Serum Albumin </td><td> Sigma </td><td> A2153 </td></tr><tr><td> L-Lysin </td><td> Sigma </td><td> L-1137 </td></tr><tr><td> 16% PFA-Lösung </td><td> Electron Microscopy Sciences </td><td> 15711 </td></tr><tr><td> Granular PFA </td><td> Electron Microscopy Sciences </td><td> 19210 </td></tr><tr><td> 24-well Platte </td><td> Falke </td><td> 35-3047 </td></tr><tr><td> Ziege anti-Maus Alexa konjugierten Antikörpern </td><td> Invitrogen </td><td> --- </td></tr><tr><td> Versorgung </td><td> Firma </td><td> Cat. Nein. </td></tr><tr><td> 12mm, Nr. 0 Deckgläser </td><td> Karl Hecht GmbH </td><td> 1105209 </td></tr><tr><td> Nr. 1,5 Deckglas (für Scheiben) </td><td> VWR Scientific </td><td> 48393241 </td></tr><tr><td> Glasobjektträger </td><td> VWR Scientific </td><td> 48311-703 </td></tr></tbody></table>

quantifying synapses: an immunocytochemistry-based assay to quantify synapse number

Eines der wichtigsten Ziele in den Neurowissenschaften ist es, die molekularen Signale, die frühen Stadien der Synapsenbildung anweisen, zu verstehen. Als solches ist es unumgänglich geworden, um objektive Ansätze zu entwickeln, um Veränderungen der synaptischen Verbindungen zu quantifizieren. Ausgehend vom Beispiel Fixierung dieses Protokoll Details, wie man Synapse Anzahl sowohl in dissoziierten neuronalen Kultur und in Hirnschnitten mittels Immunzytochemie quantifizieren. Mit Fach-spezifische Antikörper, label wir präsynaptischen Terminals sowie Standorte der postsynaptischen Spezialisierung. Wir definieren Synapsen als Punkte der Kolokalisation zwischen den Signalen, die von dieser Marker erzeugt. Die Zahl dieser Kolokalisationen wird unter Verwendung eines Plug in Puncta Analyzer (geschrieben von Bary Wark, auf Anfrage, c.eroglu @ cellbio.duke.edu) unter dem ImageJ-Software-Plattform. Die Synapse-Assay in diesem Protokoll beschrieben, kann auf jeden Nervengewebe oder Kultur Vorbereitung, für die Sie selektiv prä-und postsynaptischen Markern angewendet werden. Diese Synapsen Assay ist ein wertvolles Werkzeug, das weit in das Studium der synaptischen Entwicklung genutzt werden kann.

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Quantifying Synapses: an Immunocytochemistry-based Assay to Quantify Synapse Number

Dieses Protokoll beschreibt, wie zu Synapse Anzahl sowohl in dissoziierten neuronalen Kultur und in Hirnschnitten mittels Immunzytochemie quantifizieren. Mit Fach-spezifische Antikörper, label wir präsynaptischen Terminals sowie Standorte der postsynaptischen Spezialisierung. Wir definieren Synapsen als Punkte der Kolokalisation zwischen den Signalen, die von dieser Marker erzeugt.

Die Quantifizierung der Synapsen: eine Immunzytochemie-basierten Assay zur Synapse Anzahl Quantify

One of the most important goals in neuroscience is to understand the molecular cues that instruct early stages of synapse formation. As such it has become ...

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35.4K Aufrufe.  Duke University. Dieses Protokoll beschreibt, wie zu Synapse Anzahl sowohl in dissoziierten neuronalen Kultur und in Hirnschnitten mittels Immunzytochemie quantifizieren. Mit Fach-spezifische Antikörper, label wir präsynaptischen Terminals sowie Standorte der postsynaptischen Spezialisierung. Wir definieren Synapsen als Punkte der Kolokalisation zwischen den Signalen, die von dieser Marker erzeugt.