Puncta Analyzer Plug-in Ben A. Barres laboratuar J Barry Wark (Güncel adresi: Physion Danışmanlık) tarafından yazılmıştı (Stanford Üniversitesi). Finansman; <ul><li> Alfred P. Sloan Vakfı </li><li> Esther A. ve Joseph Klingenstein Fonu, Inc. </li><li> Geniş Biyomedikal Araştırma Vakfı </li><li> Cure Huntington Hastalığı Girişimi </li></ul>

<ol>
	<li>Barres, B. A., Silverstein, B. E., Corey, D. P., Chun, L. L. Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Immunological,+morphological,+and+electrophysiological+variation+among+retinal+ganglion+cells+purified+by+panning.">Immunological, morphological, and electrophysiological variation among retinal ganglion cells purified by panning.</a> Neuron. 1, 791-803 (1988).</li><li>Meyer-Franke, A., Kaplan, M. R., Pfrieger, F. W., Barres, B. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Characterization+of+the+signaling+interactions+that+promote+the+survival+and+growth+of+developing+retinal+ganglion+cells+in+culture.">Characterization of the signaling interactions that promote the survival and growth of developing retinal ganglion cells in culture.</a> Neuron. 15, 805-819 (1995).</li><li>Eroglu, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Gabapentin+receptor+alpha2delta-1+is+a+neuronal+thrombospondin+receptor+responsible+for+excitatory+CNS+synaptogenesis.">Gabapentin receptor alpha2delta-1 is a neuronal thrombospondin receptor responsible for excitatory CNS synaptogenesis.</a> Cell. 139, 380-392 (2009).</li><li>Pfrieger, F. W., Barres, B. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Synaptic+efficacy+enhanced+by+glial+cells+in+vitro.">Synaptic efficacy enhanced by glial cells in vitro.</a> Science. 277, 1684-1687 .</li><li>Ullian, E. M., Sapperstein, S. K., Christopherson, K. S., Barres, B. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Control+of+synapse+number+by+glia.">Control of synapse number by glia.</a> Science. 291, 657-661 (2001).</li><li>Christopherson, K. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Thrombospondins+are+astrocyte-secreted+proteins+that+promote+CNS+synaptogenesis.">Thrombospondins are astrocyte-secreted proteins that promote CNS synaptogenesis.</a> Cell. 120, 421-433 (2005).</li><li>Godement, P., Salaun, J., Imbert, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Prenatal+and+postnatal+development+of+retinocollicular+projections+in+the+mouse.">Prenatal and postnatal development of retinocollicular projections in the mouse.</a> J. Comp. Neurol. 230, 552-575 (1985).</li><li>Schmidt, J. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Formation+of+retinotopic+connections:+selective+stabilization+by+an+activity-dependent+mechanism.">Formation of retinotopic connections: selective stabilization by an activity-dependent mechanism.</a> Cell. Mol. Neurobiol. 5, 65-84 (1985).</li><li>Sachs, G. M., Jacobson, M., Caviness, V. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Postnatal+changes+in+arborization+patterns+of+murine+retinocollicular+axons.">Postnatal changes in arborization patterns of murine retinocollicular axons.</a> J. Comp. Neurol. 246, 395-408 (1986).</li><li>Elmariah, S. B., Oh, E. J., Hughes, E. G., Balice-Gordon, R. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Astrocytes+regulate+inhibitory+synapse+formation+via+Trk-mediated+modulation+of+postsynaptic+GABAA+receptors.">Astrocytes regulate inhibitory synapse formation via Trk-mediated modulation of postsynaptic GABAA receptors.</a> J. Neurosci. 25, 3638-3650 (2005).</li><li>Hughes, E. G., Elmariah, S. B., Balice-Gordon, R. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Astrocyte+secreted+proteins+selectively+increase+hippocampal+GABAergic+length,+branching+and+synaptogenesis.">Astrocyte secreted proteins selectively increase hippocampal GABAergic length, branching and synaptogenesis.</a> Moll. Cell. Neurosci. 43, 136-145 (2010).</li></ol>

RGCs eksitatör projeksiyonlar büyük ölçüde odak neyin deneysel hedefleri bağlamında kültür arıtılmış veya beyin bölümünde, yukarıda açıklanan sinaps tahlil ya dayanır. Biz eksitatör sinapslar (Tablo 1) etiketleme için iyi bir referans masayı antikorları sağladı. Bu sinaps tahlil, sinaps herhangi bir nöronal nüfusun sayısı ya da seçici bir pre-ve postsinaptik işaretleyici olduğu başka herhangi bir sinaptik alt tipi ölçmek için adapte edilebilir. Örneğin...

<table border="1" cellpadding="0" cellspacing="0"><tbody><tr><td></td><td> Antijen </td><td> Tür </td><td> Poliklonal / monoklonal </td><td> Satıcı </td><td> Katalog Numarası </td><td> Seyreltme </td><td> Kültür çalışır. </td><td> İşleri Kısım </td></tr><tr><td rowspan="10"> Presinaptik </td><td> Synapsin </td><td> Tavşan </td><td> Poliklonal </td><td> Synaptic Sistemleri </td><td> 106004 </td><td> 1:750 </td><td> Y </td><td> ND </td></tr><tr><td> Synapsin </td><td> Fare </td><td> Monoklonal </td><td> Synaptic Sistemleri </td><td> 106001 </td><td> 1:500 </td><td> Y </td><td> Y </td></tr><tr><td> Fagot </td><td> Fare </td><td> Monoklonal </td><td> Testi Tasarımlar </td><td> VAM-PS003F </td><td> 1:500 </td><td> Y </td><td> Y </td></tr><tr><td> Fagot </td><td> Guinea Pig </td><td> Poliklonal </td><td> Synaptic Sistemleri </td><td> 141004 </td><td> 1:1000 </td><td> Y </td><td> ND </td></tr><tr><td> Synaptotagmin 1 </td><td> Tavşan </td><td> Poliklonal </td><td> Synaptic Sistemleri </td><td> 105002 </td><td> 1:750 </td><td> Y </td><td> N </td></tr><tr><td> Synaptobrevin 2 (C1.69.1) </td><td> Fare </td><td> Monoklonal </td><td> Synaptic Sistemleri </td><td> 104211 </td><td> 1:500 </td><td> Y </td><td> Y </td></tr><tr><td> Sinaptofizin (C1.7.2) </td><td> Fare </td><td> Monoklonal </td><td> Synaptic Sistemleri </td><td> 101011 </td><td> 1:500 </td><td> Y </td><td> Y </td></tr><tr><td> VGlut1 </td><td> Fare </td><td> Monoklonal </td><td> Millipore </td><td> MAB5502 </td><td> 1:2500 </td><td> N </td><td> Y </td></tr><tr><td> VGlut1 </td><td> Kobay </td><td> Poliklonal </td><td> Millipore </td><td> AB5905 </td><td> 1:2500 </td><td> N </td><td> Y </td></tr><tr><td> VGlut2 </td><td> Kobay </td><td> Poliklonal </td><td> Millipore </td><td> AB2251 </td><td> 1:2500 </td><td> N </td><td> Y </td></tr><tr><td rowspan="6"> Postsinaptik </td><td> PSD-95 (6G6-1C9 klon) </td><td> Fare </td><td> Monoklonal </td><td> Affinity Bio Reaktifleri </td><td> MA1-045 </td><td> 1:750 </td><td> Y </td><td> N </td></tr><tr><td> PSD-95 </td><td> Tavşan </td><td> Poliklonal </td><td> Zymed </td><td> 51-6900 </td><td> 1:500 </td><td> N </td><td> Y </td></tr><tr><td> Beysbolde tur vuruşu </td><td> Fare </td><td> Monoklonal </td><td> Synaptic Sistemleri </td><td> 160011 </td><td> 1:500 </td><td> Y </td><td> ND </td></tr><tr><td> Beysbolde tur vuruşu </td><td> Sıçan </td><td> Poliklonal </td><td> Millipore </td><td> AB5875 </td><td> 1:500 </td><td> Y </td><td> Y </td></tr><tr><td> Gephyrin </td><td> Tavşan </td><td> Poliklonal </td><td> Synaptic Sistemleri </td><td> 147003 </td><td> 1:500 </td><td> Y </td><td> Y </td></tr><tr><td> Gephyrin </td><td> Fare </td><td> Monoklonal </td><td> Synaptic Sistemleri </td><td> 147 </td><td> 1:200 </td><td> Y </td><td> Y </td></tr></tbody></table> Tablo 1: biz bizim sinaps tayininde başarılı bir şekilde kullanılmaktadır olduğunu iyi pre-ve postsinaptik belirteçlerin Listeler örnekler. Bu mevcut tüm belirteçlerin bir liste olmadığını farkında olun. Y = Evet, N = Hayır, ND = Tespit Edilemeyen. <table border="1" cellpadding="0" cellspacing="0"><tbody><tr><td> Reaktif </td><td> Şirket </td><td> Cat. Hayır. </td></tr><tr><td> PBS </td><td> Invitrogen </td><td> 20012-027 </td></tr><tr><td> poli-d-lisin </td><td> Sigma </td><td> P6407 </td></tr><tr><td> Laminin </td><td> Cultrex </td><td> 3400-010-01 </td></tr><tr><td> Triton X-100 </td><td> Roche Diagnostics GmbH </td><td> 9002-93-1 </td></tr><tr><td> Normal Keçi Serum </td><td> Gibco </td><td> 16210 </td></tr><tr><td> DAPI ile VectaShield </td><td> Vektör Laboratuvarları </td><td> H-1200 </td></tr><tr><td> Ekim </td><td> Doku-Tek </td><td> 4583 </td></tr><tr><td> Tris-Baz (50 mM) </td><td> Balıkçı </td><td> BP152-5 </td></tr><tr><td> Sığır Serum Albumin </td><td> Sigma </td><td> A2153 </td></tr><tr><td> l-lizin </td><td> Sigma </td><td> L-1137 </td></tr><tr><td> % 16 PFA çözüm </td><td> Elektron Mikroskopi Bilimler </td><td> 15711 </td></tr><tr><td> Granül PFA </td><td> Elektron Mikroskopi Bilimler </td><td> 19210 </td></tr><tr><td> 24 kuyu kültür plaka </td><td> Şahin </td><td> 35-3047 </td></tr><tr><td> Keçi anti-fare Alexa konjuge antikorların </td><td> Invitrogen </td><td> --- </td></tr><tr><td> Besleme </td><td> Şirket </td><td> Cat. Hayır. </td></tr><tr><td> 12mm, No: 0 cam lamelleri </td><td> Karl Hecht Gmbh </td><td> 1105209 </td></tr><tr><td> No 1.5 cam lamel (dilim için) </td><td> VWR Bilimsel </td><td> 48393241 </td></tr><tr><td> Cam slaytlar </td><td> VWR Bilimsel </td><td> 48311-703 </td></tr></tbody></table>

quantifying synapses: an immunocytochemistry-based assay to quantify synapse number

Nörobilim en önemli hedeflerinden biri talimat sinaps oluşumu erken aşamalarında moleküler ipuçları anlamak için. Gibi sinaptik bağlantı değişiklikleri ölçmek için objektif yaklaşımlar geliştirmek zorunlu hale gelmiştir. Örnek fiksasyon itibaren, bu protokol detaylarının nasıl ayrışmış nöronal kültür ve immünsitokimya kullanarak beyin bölümlerinde de sinaps sayısı ölçmek için. Kompartman-spesifik antikorların kullanarak, presinaptik terminalleri yanı sıra postsinaptik uzmanlık siteleri etiket. Biz bu belirteçler tarafından oluşturulan sinyaller arasındaki sinaps ko noktaları olarak tanımlar. Bu colocalizations sayısı ImageJ analiz yazılımı platformu altında Puncta Analyzer (istek üzerine Bary Wark, c.eroglu @ cellbio.duke.edu yazılı) bir eklenti kullanarak miktarı. Bu protokol açıklanan sinaps tahlil seçici pre-ve postsinaptik belirteçlerinin sahip olduğunuz herhangi bir sinir doku veya kültür hazırlama uygulanabilir. Bu Sinaps tahlil, sinaptik gelişme çalışmada yaygın olarak kullanılan değerli bir araçtır.

Watch this Scientific Journal Video about Quantifying Synapses: an Immunocytochemistry-based Assay to Quantify Synapse Number at JoVE.com

Quantifying Synapses: an Immunocytochemistry-based Assay to Quantify Synapse Number

Bu protokol, ayrışmış nöronal kültür ve immünsitokimya kullanarak beyin bölümlerinde de sinaps sayısını ölçmek için nasıl ayrıntıları. Kompartman-spesifik antikorların kullanarak, presinaptik terminalleri yanı sıra postsinaptik uzmanlık siteleri etiket. Biz bu belirteçler tarafından oluşturulan sinyaller arasındaki sinaps ko noktaları olarak tanımlar.

Sinapslar miktarının: Synapse Numarası ölçmek için bir İmmünositokimya tabanlı Testi

One of the most important goals in neuroscience is to understand the molecular cues that instruct early stages of synapse formation. As such it has become ...

quantifying-synapses-an-immunocytochemistry-based-assay-to-quantify

Research

JoVE Journal

Neuroscience

35.4K Görüntüleme.  Duke University. Bu protokol, ayrışmış nöronal kültür ve immünsitokimya kullanarak beyin bölümlerinde de sinaps sayısını ölçmek için nasıl ayrıntıları. Kompartman-spesifik antikorların kullanarak, presinaptik terminalleri yanı sıra postsinaptik uzmanlık siteleri etiket. Biz bu belirteçler tarafından oluşturulan sinyaller arasındaki sinaps ko noktaları olarak tanımlar.