FONCICyT 000000000091984;; die Grundlagen der Jeansson, Söderström Königska sjukhemmet, Märtha Lundqvist und Sigurd och Elsa Diese Arbeit wurde von der schwedischen Medical Research Council (K2009-75SX-21028-01-3, K2008-61X-20700-01-3) finanziert Goljes Minne und schwedischen Society of Medicine SLS-95151. Professor Gene D. Block, UCLA, ist dankbar für die wertvollen Hinweise zum Manuskript anerkannt. Wir danken Dr. Michael Andäng und Dr. Helena Johard für die HCN-Kanal-Blocker, und Prof. Abdel El-Manira für die Bereitstellung von Video-Mikroskop. Ethische Überlegungen: Alle Tierversuche wurden in Übereinstimmung mit den Richtlinien und Vorschriften her von Karolinska Institutet und &quot;Stockholm Norra Djurförsöksetiska Nämnd&quot; set durchgeführt. Alle Tierversuche werden mit der Absicht durchgeführt, um mögliche Belastungen oder Unbehagen, das Tier zu minimieren.

<ol>
	<li>Welsh, D. K., Takahashi, J. S., Kay, S. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Suprachiasmatic+nucleus:+cell+autonomy+and+network+properties.">Suprachiasmatic nucleus: cell autonomy and network properties.</a> Annu Rev Physiol. 72, 551-577 (2010).</li><li>Green, D. 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Y., Klein, D., Moore, R., Reppert, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+suprachiasmatic+nucleus+and+the+circadian+timing+system.">The suprachiasmatic nucleus and the circadian timing system.</a> Suprachiasmatic nucleus--The mind's clock. , 13-15 (1991).</li><li>Pol, A. N. V. a. n. d. e. n. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+hypothalamic+suprachiasmatic+nucleus+of+rat:+intrinsic+anatomy.">The hypothalamic suprachiasmatic nucleus of rat: intrinsic anatomy.</a> J Comp Neurol. 191, 661-702 (1980).</li><li>Stoppini, L., Buchs, P. 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Y., Honma, S., Honma, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+circadian+pacemaker+in+the+cultured+suprachiasmatic+nucleus+from+pup+mice+is+highly+sensitive+to+external+perturbation.">The circadian pacemaker in the cultured suprachiasmatic nucleus from pup mice is highly sensitive to external perturbation.</a> Eur J Neurosci. 27, 2686-2690 (2008).</li><li>Yoshikawa, T., Sellix, M., Pezuk, P., Menaker, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Timing+of+the+ovarian+circadian+clock+is+regulated+by+gonadotropins.">Timing of the ovarian circadian clock is regulated by gonadotropins.</a> Endocrinology. 150, 4338-4347 (2009).</li><li>Kohn, R. A., Dunlap, T. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Calculation+of+the+buffering+capacity+of+bicarbonate+in+the+rumen+and+in+vitro.">Calculation of the buffering capacity of bicarbonate in the rumen and in vitro.</a> J Anim Sci. 76, 1702-1709 (1998).</li><li>Wilsbacher, L. D., Yamazaki, S., Herzog, E. D., Song, E. J., Radcliffe, L. A., Abe, M., Block, G., Spitznagel, E., Menaker, M., Takahashi, J. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Photic+and+circadian+expression+of+luciferase+in+mPeriod1-luc+transgenic+mice+in+vivo.">Photic and circadian expression of luciferase in mPeriod1-luc transgenic mice in vivo.</a> Proc Natl Acad Sci U S A. 99, 489-494 (2002).</li><li>Sellix, M. T., Currie, J., Menaker, M., Wijnen, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Fluorescence/luminescence+circadian+imaging+of+complex+tissues+at+single-cell+resolution.">Fluorescence/luminescence circadian imaging of complex tissues at single-cell resolution.</a> J Biol Rhythms. 25, 228-232 (2010).</li></ol>

Vorteile und Nachteile, die mit Luciferase-Reporter-Technologie Im Gegensatz zur Ex-vivo-Methoden, wie z. B. RT-PCR, in situ Hybridisierung und Western-Blot, dass Gewebeentnahme erfordert an vielen verschiedenen Zeitpunkten (was zu einem geringen zeitlichen Auflösung von in der Regel 2-4 Stunden je nach Sampling-Frequenz), um tägliche Studie Variationen in der Gen-und Protein-Ausdrücke erlaubt die Luciferase-Reporter-Technologie mit hoher Auflösung (1-10 min) Studien der circadianen Oszillationen für viele Tage in der gleichen Weise vor. So ist die Zahl der verwendeten Tiere auf ein Minimum reduziert und detaillierte Untersuchungen der Auswirkungen auf Phase und Zeit der Rhythmus sind möglich, was normalerweise nicht möglich ist mit konventionellen Sampling-Techniken mit geringer zeitlicher Auflösung. Doch obwohl relative Amplitude Messungen der Rhythmus möglich sind, sollte betont werden, dass Reporter Technologie nicht quantitative und kann daher nicht verwendet werden, um Mengen von transkribierten Gene oder Proteine ​​übersetzt messen werden. Das Gewebe Aufnahmen gestartet und ausgewertet werden sofort nach der Kultivierung, ein großer Vorteil für das direkte Studium der molekularen Effekte in vivo Stress in vivo lichtinduzierten Phasenverschiebungen etc. Die organotypischen SCN Kultur ermöglicht langfristig (Wochen) pharmakologische Manipulation von erwachsenen Gehirn Gewebe mit einer intakten reifen synaptischen Netzwerk und die Luciferase-Reporter-Technologie ermöglicht eine stabile Aufnahmen für viele Wochen. So macht das Gewebe nicht zu Neugeborenen oder frühen postnatalen werden, um gesunde Kulturen zu erhalten, und im Gegensatz zu den akuten Scheibe chronischen pharmakologischen Behandlungen durchgeführt werden können. Im Gegensatz zu Plasmid-reporter Transfektionen in Zellkulturen, die keine auf den Einbau von DNA in das Genom führen, werden die transgenen Luciferase-Tiermodellen (sowie Lenti-Virus Transfektionen) günstig, wenn epigenetische Veränderungen untersucht werden sollen. Es sollte in diesem Zusammenhang auch erwähnt werden, dass Lumineszenzbildgebung heute ist mit hochempfindlicher CCD-Kameras 11 möglich, so dass Aufnahmen auch in einzelnen SCN Neuronen (~ 6-10 um) und anderen Zelltypen, von den großen Labors Studium zirkadianen Rhythmen genutzt werden. Schließlich mehreren circadianen Ermittler verwenden häufig die Überwachung der molekularen Expression mit anderen Reportern, wie das Green Fluorescent Protein, um Clock-Gen / Protein-Oszillationen 16-19 studieren. Aspekte der Schichtdicke Die hier empfohlenen Dicken der SCN Scheibe (200-300 um) könnte reduziert oder erhöht werden, falls gewünscht. Doch obwohl das Gewebe verflacht auf der Membran nach ein paar Tagen in Kultur, ist es nicht empfehlenswert, 500 pm Dicke der zunächst Anschnitt überschreiten, um die Lebensfähigkeit der Gewebe 7 zu erhalten. Ein Stück dünner als 100 pm ist der Maschinen-und praktischen Gründen schwierig zu handhaben. Da der SCN Gewebe ist heterogen die Dicke der Scheibe kann die Phase der Luciferase Ausgangssignal auswirken, da die verschiedenen Regionen innerhalb des SCN (zum Beispiel den &quot;Kern&quot; gegenüber der &quot;Schale&quot; und dorsal gegenüber ventralen Regionen) mit unterschiedlichen Phasen oszillieren 20 und differentiell nach Phase re-synchronisieren verschiebt 21. Die Dicke der Scheibe wirkt sich auch auf die Grundlinie der Photonenzahl seit mehr Gewebe gibt eine größere Anzahl von Photonen. Die Amplitude des molekularen Schwingungen können auf diese Weise indirekt von der Größe der Explantation betroffen sein. Aus diesen Gründen sollte die Kontrolle und behandelten Kulturen immer die gleiche Größe, Dicke und mit der gleichen Region des SCN, um in der gleichen Phase und mit gleicher Amplitude schwingen. Die beiden einseitigen Kerne, auf der anderen Seite, in Phase schwingen miteinander und mit ähnlichen Amplituden, solange die Vibratom Schnitt ist horizontal und nicht abgewinkelt (die wiederum abhängig ist, dass die Trennung zwischen Kleinhirn und den beiden Hemisphären Schnitt senkrecht auf die Tischoberfläche). Ein Ermittler, der SCN Kultivierung führt möglicherweise zu, dass SCN Kulturen nicht in Phase schwingen miteinander. Üben und Standardisierung der Slicing-Technik, dh die Scheiben sind immer an der gleichen rostro-kaudal des SCN schneiden, wird das Ergebnis verbessern. Kritische Schritte <ol><li> Sauerstoffversorgung ist kritisch. Weil das Gehirn braucht viel Sauerstoff 22, muss das Aufschneiden Verfahren schnell zu sein (Je näher 3,1-3,10 ist auf ~ 5-6 Minuten desto besser ist es in Ordnung zu halten das Gewebe gesund ist). </li><li> Der SCN ist empfindlich gegen Temperaturschwankungen und mittlere auszutauschen. Der SCN ist temperaturempfindlich und großen Temperaturschwankungen können Phasenverschiebung der Herzschrittmacher und verursachen experimentelle Artefakte 23. Wenn mittel-oder Lösungen ausgetauscht werden oder während eines laufenden Experiments, zum Beispiel bei der Anwendung eines Arzneimittels nach ein paar Tagen in Kultur, mittel-oder solutio hinzugefügtn muss vorgewärmt auf 36-37 ° C (die gleiche Temperatur wie in der Kammer) vor der Zugabe werden. In pharmakologischen Experimenten, die mittel-Austausch beteiligen, ist es wichtig, immer mit konditionierten Zellkulturmedium Arbeit. Addition / Wash-out mit frischen, können unbedingte Medium potentiell Phasenverschiebung der molekularen SCN Rhythmus 24 sowie anderen Zelltyp Kulturen 25. </li><li> Medium Zusammensetzung. Es ist wichtig, die Kultur des Gewebes in der richtigen pH-Wert und Osmolalität. Die Luft-Buffering Medium enthält eine große Menge von HEPES, die eine optimale Pufferkapazität im Bereich von pH 6,8 bis 8,2 hat und eignet sich auch für die Pufferung der pH-Änderungen, die als Folge der Zellatmung entstehen können. HEPES, auf der anderen Seite, ist empfindlicher auf Temperaturänderungen als mit Natriumbicarbonat, die in kleinen Mengen in das Kulturmedium enthalten ist verglichen. Natriumbicarbonat hat eine größere Pufferkapazität in den unteren pH-Wert (5,1-7,1)-Bereich 26, also gegebenenfalls in einem CO 2-Atmosphäre. Allerdings erhöhte Mengen von Natriumbicarbonat in der Luft-Buffering Medium (DMEM 2902) erhöht sich die Osmolalität erheblich und kann nicht ohne gleichzeitig Verdünnung des Mediums, was wiederum in die falsche Zusammensetzung der Aminosäuren, Vitaminen und Ionen. Hinzugefügt werden Beratung für die Vorbereitung des Mediums: <ol><li> Seien Sie präzise und vorsichtig beim Mischen des Mediums. </li><li> Verwenden Sie nur frisches oder frisch aufgetaut Stammlösungen. </li><li> Bei sehr hohen Osmolalität ist es nicht wert, Verdünnung. Mehr als 5-6% verdünnten Medium wird wahrscheinlich nicht funktionieren. Verwenden Sie D-Glucose zu Osmolalität erhöhen, wenn sie zu niedrig ist. </li></ol></li><li> Phasenverschiebungen aufgrund Vorbereitungszeit Die Zeit der Scheibe ist von kritischer Bedeutung. Null oder nur minimale Auswirkungen auf Phase ist erreicht, wenn die Scheibe Verfahren zwischen ZT 06-12 Dezember durchgeführt wird. Alle Scheiben Dissektionen sollte bei der gleichen Phase des tageszeitlichen oder circadianen Zyklus durchgeführt werden, um Fehler aufgrund von Abweichungen zwischen der Vorbereitungsphase zu minimieren. </li></ol> Mögliche Änderungen <ol><li> Bei akuten SCN Elektrophysiologie, hat das Schneiden mit einem Ringer (Artificial Cerebro Rückenmarksflüssigkeit; ACSF) durchgeführt werden Puffer, mit Sauerstoff (95% O 2, 5% CO 2) vor dem Schneiden beginnt gesättigt. Darüber hinaus braucht Sauerstoff, kontinuierlich in den Puffer hinzugefügt werden während der gesamten Slicing Verfahren, wie die Elektro-und synaptische Aktivität ist direkt abhängig von Sauerstoff-Versorgung 22. </li><li> Horizontal und sagittalen Schnitten können auch erfolgreich vorbereitet und kultivierten des SCN. Die Autoren haben Erfahrung mit Luciferase-Aufnahmen in horizontale Schnitte, die nach unseren Erfahrungen geben circadianen Oszillationen mit niedriger Amplitude, wie mit dem koronalen Schnitt verglichen. </li><li> Der SCN ist etwa 1 mm langen rostro-kaudal und das Schneiden hier beschriebene Technik ist auf den Erwerb eines SCN Abschnitt in der zentralen Region ausgerichtet. Allerdings kann mehr als eine SCN Abschnitt von Maus und Ratte Gehirn gewonnen werden, so dass die Untersuchung der circadianen Gen / Protein-Expression in mehr rostral gegen kaudalen Ebenen des SCN Kern. </li><li> Slice-Kulturen von jüngeren Tieren, postnatale Welpen oder auch Embryonen, können ebenfalls hergestellt werden. Bitte beachten Sie, dass das Gehirn und dem Schädel in sehr jungen Welpen sehr weich und empfindlich sind. Darüber hinaus ist der Sehnerv dünn und nicht voll entwickelt. Seien Sie vorsichtig beim Sezieren des Gehirns der Jungtiere, so dass die SCN Region nicht beschädigt wird. Zum Beispiel kann micro Rongeur Werkzeuge nicht verwendet werden, um den Schädel des Jungen Maus geöffnet werden, weil sie zu groß sind. Feine Schere genug sind, um die Weichteile in jungen Welpen geschnitten. </li><li> Das Deckglas auf Kultur hier beschriebene Technik kann auch zum Bild Lumineszenz mit einer CCD-/ EM-CCD-Kamera, auch in einzelnen SCN Neuronen verwendet werden. </li><li> Andere zentrale Nervensystem Regionen und periphere Organgewebe aus transgenen PER2:: LUC Tiere können leicht zu erhalten, kultiviert und im Hinblick auf die molekularen Schwingungen analysiert, wie die PER2:: LUC Ausdruck weiterhin für viele Tage auch oszillieren in einer Reihe anderer Gewebe und Zell-Typen 10. Die meisten dieser peripheren Geweben, zum Beispiel Leber, benötigen keine Membran für das Überleben, sondern werden gezüchtet direkt in das Medium 11 getaucht. Bitte beachten Sie, dass Phasenverschiebung durch Schneiden, Kultivierung und mittlere Austausch kann nicht nach den gleichen Grundsätzen wie bei SCN. </li></ol> Bedeutung In transgenen Mäusen und Ratten-Stämme (mPER2:: LUC; mPer1-luc 8, 10, 27) Luciferase-Enzymaktivität spiegelt Protein oder Genexpression Rhythmen und kann durch Biolumineszenz Aufnahme beurteilt werden. Die Luciferase-generated Biolumineszenz gibt ein schwaches Signal, aber der Hintergrund Lumineszenz ist nahe Null, so dass diese Methode von Vorteil. Darüber hinaus, da die Luciferase-Molekül instabil und schnell abgebaut wird es keinen phOtotoxizität, die während einer langfristigen erregenden Beleuchtung 28 angezeigt werden können. Zusammengenommen ermöglichen diese Eigenschaften dauerhaft Experimente machen die Luciferase-Reporter-Technologie sehr vorteilhaft in circadianen Forschung.

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		<div>
		<table border="1">
		<thead>
		<tr>
		<th>Material Name</th>
		<th>Type</th>
		<th>Company</th>
		<th>Catalogue Number</th>
		<th>Comment</th>
		</tr>
		</thead>
		<tbody>
		
<tr>
<td>B27 supplement 50x</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Invitrogen/Gibco</td>
<td>17504-044</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Cover glasses</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Menzel-Gl&auml;ser</td>
<td>40#1</td>
<td>&#8776; 40 mm</td>
</tr>
<tr>
<td>Culture membranes</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Millipore</td>
<td>PICMORG50</td>
<td>0.4 &mu;m</td>
</tr>
<tr>
<td>DMEM low glucose w/o phenol red</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Sigma</td>
<td>D2902</td>
<td>Powder for 1L</td>
</tr>
<tr>
<td>Filter paper</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Whatman</td>
<td>1003 055</td>
<td>&#8776; 55 mm</td>
</tr>
<tr>
<td>Filtration set</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Corning</td>
<td>431097</td>
<td>Pore size 0.22 &mu;m
Polyethersulfone</td>
</tr>
<tr>
<td>Forceps </td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Allgaier Instrumente</td>
<td>0203-7-PS</td>
<td>Dumant #7</td>
</tr>
<tr>
<td>HEPES</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Invitrogen/Gibco</td>
<td>15630-056</td>
<td>100 ml</td>
</tr>
<tr>
<td>HBSS 10x</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Invitrogen/Gibco </td>
<td>14065-049</td>
<td>500 ml</td>
</tr>
<tr>
<td>NaOCH3 7.5%</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Invitrogen/Gibco</td>
<td>25080-060</td>
<td>50 ml</td>
</tr>
<tr>
<td>Luciferin </td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Promega</td>
<td>E1602</td>
<td>Beetle luciferin, potassium salt</td>
</tr>
<tr>
<td>Micro rongeur tool</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Allgaier Instrumente</td>
<td>332-097-140</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>PenStrep 10,000 U/ml</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Invitrogen/Gibco</td>
<td>15140-122</td>
<td>100 ml</td>
</tr>
<tr>
<td>Petri dishes</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Corning</td>
<td>430165</td>
<td>&#8776; 35 mm</td>
</tr>
<tr>
<td>PMT</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Hamamatsu</td>
<td>H9319-11MOD</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Disposable scalpels</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Paragon</td>
<td>P503</td>
<td>Size 11</td>
</tr>
<tr>
<td>Vacuum filter</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Fisher </td>
<td>09-761-5</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Vacuum grease</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Dow Corning</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>50 g</td>
</tr>
<tr>
<td>Vibratome</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Campden Instruments</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>		</tbody>
		</table>
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slice preparation, organotypic tissue culturing and luciferase recording of clock gene activity in the suprachiasmatic nucleus

Eine zentrale circadiane (~ 24 Std.) Uhr koordinierende Tagesrhythmus in Physiologie und Verhalten liegt in der suprachiasmatischen Nukleus (SCN) im vorderen Hypothalamus. Die Uhr ist direkt durch Licht über die Netzhaut und Sehnerv synchronisiert. Circadian Schwingungen werden durch die Interaktion negativen Feedback-Schleifen einer Reihe von sogenannten &quot;Clock-Gene&quot; und ihrer Eiweiss-Produkte, einschließlich der für den Zeitraum (pro-) Gene generiert. Die Core-Taktfrequenz ist auch abhängig von Membrandepolarisation, Kalzium und cAMP 1. Der SCN zeigt täglichen Schwankungen in Takt Genexpression, Stoffwechsel und spontane elektrische Aktivität. Bemerkenswert ist, besteht diese endogene zyklische Aktivität in adulten Geweben Scheiben des SCN 2-4. Auf diese Weise kann die biologische Uhr einfach in vitro untersucht werden, so dass molekulare, elektrophysiologischen und metabolischen Untersuchungen der Schrittmacherfunktion. Der SCN ist eine kleine, gut definierte bilaterale Struktur direkt über dem Chiasma 5 befindet. In der Ratte enthält ~ 8.000 Neuronen in jeder Kern und hat Abmessungen von ca. 947 mu m (Länge, rostrokaudalen Achse) x 424 um (Breite) x 390 um (Höhe) 6. Um sezieren die SCN ist es notwendig, einen Hirnschnitt auf der jeweiligen Ebene des Gehirns, wo die SCN identifiziert werden können geschnitten. Hier beschreiben wir die Zerlegung und Slicing Verfahren des SCN, die ähnlich für Maus und Ratte Gehirn ist. Darüber hinaus zeigen wir, wie die Kultur der sezierten Gewebes organotypically auf einer Membran 7, eine Technik für die SCN Gewebekultur von Yamazaki et al. 8. Schließlich zeigen wir, wie transgene Gewebe zur Messung Ausdruck der Uhren-Gene / Proteine ​​mittels dynamischer Luciferase-Reporter-Technologie, einer Methode, die ursprünglich für circadiane Messungen Geusz et al verwendet wurde. 9 verwendet werden kann. Wir verwenden hier SCN Gewebe aus den transgenen Knock-in Periode2: LUCIFERASE Mäusen durch Yoo et al 10.. Die Mäuse enthalten ein Fusionsprotein aus PERIOD (PER) 2 und die Glühwürmchen-Enzym Luciferase. Wenn PER2 in der Gegenwart des Substrats für die Luciferase, dh Luciferin übersetzt wird, kann die PER2 Ausdruck als Biolumineszenz überwacht werden, wenn Luciferase katalysiert die Oxidation von Luciferin. Die Anzahl der emittierten Photonen positiv korreliert mit der Menge des produzierten PER2 Protein, und die Biolumineszenz-Rhythmen passen die PER2 Protein Rhythmus in vivo 10. Auf diese Weise den zyklischen Schwankungen in PER2 Ausdruck kann kontinuierlich überwacht werden Echtzeit während viele Tage. Das Protokoll folgen wir für Gewebekulturen und real-time Biolumineszenz Aufnahme wurde eingehend von Yamazaki und Takahashi 11 beschrieben.

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Slice Preparation, Organotypic Tissue Culturing and Luciferase Recording of Clock Gene Activity in the Suprachiasmatic Nucleus

Das Verfahren zur Herstellung von Scheiben mit der adulten Maus Hypothalamus suprachiasmatischen Nukleus (SCN), und einen schnellen Weg zur Kultur der SCN Gewebe in organotypischen Kultur Zustand, gemeldet werden. Darüber hinaus ist die Messung der oszillatorischen Uhr-Gen-Protein-Expression mittels dynamischer Luciferase-Reporter-Technologie beschrieben.

Slice-Vorbereitung, Organotypische Gewebekulturen und Luciferase Aufzeichnung von Clock Gen-Aktivität in den Nucleus suprachiasmaticus

A central circadian (~24 hr) clock coordinating daily rhythms in physiology and behavior resides in the suprachiasmatic nucleus (SCN) located in the ...

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JoVE Journal

Neuroscience

34.9K Aufrufe.  Karolinska Institutet. Das Verfahren zur Herstellung von Scheiben mit der adulten Maus Hypothalamus suprachiasmatischen Nukleus (SCN), und einen schnellen Weg zur Kultur der SCN Gewebe in organotypischen Kultur Zustand, gemeldet werden. Darüber hinaus ist die Messung der oszillatorischen Uhr-Gen-Protein-Expression mittels dynamischer Luciferase-Reporter-Technologie beschrieben.