Die Autoren möchten ADIR (Aide à Domicile aux Insuffisants respiratoires) und Fondation de l&#39;Avenir für ihre finanzielle Unterstützung und Dr. Fanie Barnabé-Heider für die Bearbeitung des Manuskripts bestätigen.

1. Primärkulturen von Riechschleimhaut und Riechkolben <ol><li> Vor der Präparation <ol><li> Machen Medium, 50 ml, durch Zugabe von 44 ml einer kalziumfreien Dulbeccos modifiziertem Eagle-/ Ham &#39;s F12-Medium (DMEM/F12) mit 5 ml fötalem Rinderserum (FBS) und 1 ml Penicillin / Streptomycin ergänzt. </li><li> Mantel 75 cm 2-Kolben mit Poly-L-Lysin (50 ug / ml, 1,5 &amp;mgr; g / cm 2), 1 Stunde bei Raumtemperatur. </li><li> Spülen Sie Flaschen mit PBS 1x. </li><li> Lagern Sie die Flaschen beschichtet im Kühlschrank bis zu 1 Woche. </li></ol></li><li> Präparation <ol><li> Jede Methode der Sterbehilfe ist im Voraus von Tierpflege und Verwendung Ausschuss des Organs genehmigte und von qualifiziertem Personal durchgeführt werden. </li><li> Wählen Inzuchtratten wie Fischer-Ratten. </li><li> Nachdem die Ratte wurde bestätigt, tiefe Narkose mit Natrium-Pentobarbital oder anderen injizierbaren Formen der Anästhesie wie Ketamin / Xylazin eingegeben haben, ihn zu enthaupten und rntfernen die Haut. </li><li> Öffnen Sie den Schädel von der vorderen bis zur hinteren Teil. </li><li> Entfernen Sie den OB kümmert, um die Hirnhaut zu vermeiden. </li><li> In der gleichen Ratte, öffnen Sie die Nasenhöhle sagittaly. </li><li> Entfernen der OM kümmert sich um den Schleimhaut der Atemwege zu vermeiden. Beachten Sie, dass der OM Epithel kann leicht durch seine gelbliche Farbe identifiziert werden. </li><li> Weitere detaillierte Protokolle über Dissektion der OM in einer früheren finden werden <a href="https://www.jove.com/video/2762/isolating-nasal-olfactory-stem-cells-from-rodents-or-humans">J. Vis. Exp</a> . Veröffentlichung 13. </li></ol></li><li> Kultur <ol><li> Platzieren OB in Hanks gepufferter Salzlösung (HBSS), enthaltend 0,1% Trypsin für 45 min bei 37 ° C. </li><li> Platzieren OM in HBSS, enthaltend 0,05% Collagenase A für 45 min bei 37 ° C. </li><li> Stoppen enzymatischen Verdau durch Zugabe von 2 ml warmem Medium. </li><li> Waschen Sie die Zellen mit Medium und zentrifugieren bei 300 g für 3 min. </li><li> Man reibt Proben von 2ml Medium mit einer Pipette P1000, bis eine homogene Zellsuspension erhalten wird. </li><li> Platte die Zellen in den Flaschen-Fertig (5-10 x 10 6 Zellen / Flasche) mit 25 ml warmem Medium. </li><li> Inkubieren und Kultur der Zellen bei 37 ° C mit 5% CO 2. </li><li> Ändern Sie die Hälfte des Mediums alle 2 Tage. </li><li> Nach 6-8 Tagen in vitro, überprüfen Sie den Anteil der p75-positiven Zellen auf kleinen Zellproben, angenommen OECs in Nagetieren Zytometrie oder durch Immunzytochemie sein, durch die Strömung. Für diese Analysen können auch andere Marker wie GFAP und S100β sucht werden. </li></ol></li><li> Durchflusszytometrie-Analyse <ol><li> Sammeln Sie die Zellen, wie in &quot;Zelltransplantation&quot; (Abschnitt 2.2) beschrieben. </li><li> Inkubieren mit p75 primären Antikörper (1:100) für 15 min bei 4 ° C. </li><li> Waschen der Zellen mit 2 ml PBS-EDTA und zentrifugieren bei 300 × g für 3 min. </li><li> Die Zellen mit PE-konjugierten Anti-Maus-Sekundäranti Inkubation bei 15min bei 4 ° C im Dunkeln (1:200). </li><li> Waschen der Zellen mit 2 ml PBS-EDTA und zentrifugieren bei 300 × g für 3 min. </li><li> Resuspendieren der Zellen in 500 ul PBS-EDTA. </li><li> Analysieren 10-30 x 10 3 Zellen mit Durchflusszytometer. </li></ol></li><li> Immunocytochemistry Analyse <ol><li> Platte der Zellen in 6-Well-Platten für 48 Stunden schwemmt wie in &quot;Kultur&quot; (Abschnitt 1.1.2) beschrieben. </li><li> Mit PBS Waschen Sie die Zellen. </li><li> Fixieren die Zellen mit 4% PFA für 15 min bei RT. </li><li> Mit PBS Waschen Sie die Zellen. </li><li> Die Zellen für 15 min bei RT inkubieren mit PBS / Triton X100 (0,1%). </li><li> Mit PBS Waschen Sie die Zellen. </li><li> Inkubieren der Zellen mit primären Antikörpern (1:200): p75, S100β GFAP und über Nacht bei 4 ° C. </li><li> Mit PBS Waschen Sie die Zellen. </li><li> Während 1 h bei RT in Dunkelheit Inkubieren Sie die Zellen mit den Sekundärantikörper (1:500). </li><li> Mit PBS Waschen Sie die Zellen. </li><li> Inkubieren der Zellen mit Hoechst 10 min bei RT in der Dunkelheit. </li><li> Mit PBS Waschen Sie die Zellen. </li><li> Analysieren der Zellen unter Verwendung eines Fluoreszenzmikroskops. </li></ol></li><li> GFP-Markierung von Zellen <ol><li> Fünf Tage vor der Transplantation, infizieren OB und OM Kulturen über Nacht mit lentiviralen Vektor, der verstärkte GFP (Multiplizität der Infektion, 20). </li><li> Vor der Transplantation Prüfung auf kleine Proben der Anteil der GFP-positiven Zellen durch Durchflusszytometrie, wie zuvor in &quot;Kultur&quot; (Abschnitt 1.1) beschrieben. </li></ol></li></ol> 2. Chirurgie und Transplantations <ol><li> Wiederkehrende Nervenanastomose <ol><li> Alle Experimente mit Tieren müssen im Voraus von Tierpflege und Verwendung Ausschuss des Organs genehmigte und von qualifiziertem Personal durchgeführt werden. </li><li> Vor der Operation Autoklaven alle Instrumente und pflegen Sterilität in den chirurgischen Eingriffen. </li><li> Ratten anästhesiert durch intraperitoneale Injektion von Ketamin-Hydrochlorid (12,5 mg / kg) und Chlorpromazin-Hydrochlorid (0,625 mg / kg). Bewerten Angemessenheit der Anästhesie durch Zehe Prise vor der Operation. </li><li> Legen Sie die Ratte in Rückenlage. </li><li> Führen Sie eine 2 cm senkrecht Mediums Gebärmutterhalskrebs Hautschnitt mit einem Skalpell. </li><li> Führen Sie einen vertikalen Schnitt der infrahyoideus folgenden medialen weiße Linie. </li><li> Expose Kehlkopf durch die Verwendung autostatische Aufroller zwischen infrahyoideus. </li><li> Setzen Sie die RLN. </li><li> Unter mikroskopischer Kontrolle, schneiden Sie den Nerv voll mit Mikroschere auf der Ebene des siebten Trachealring. </li><li> Führen Anastomose mit einem Punkt von 11,0 Naht unter mikroskopischer Kontrolle. Diese Operation führt zu einer spezifischen Motor Denervierung des Kehlkopfes. </li></ol></li><li> Zelluläre Transplantation <ol><li> Kurz vor der Transplantation zu entfernen, die Zellen von den Schalen unter Verwendung von 0,05% Trypsin-EDTA für 5 min bei 37 ° C. </li><li> Stoppen enzymatischen Verdau durch Zugabe von 2 ml warmem Medium. </li><li> Zentrifugieren bei 300 g für 3 min. </li><li&gt; Unter dem Mikroskop zählen Sie die Zellen mit einer Zählkammer und stellen Sie die zelluläre Konzentration nach bestimmten Protokoll. In diesem Modell wurden die gewünschten Konzentrationen zwischen 1.2-6 x 10 6 Zellen in 30 &amp;mgr; l DMEM/F12. </li><li> Machen Zellzubereitung mit 1.02-Mix (30 und 60 ul in diesem Experiment) des DMEM/F12-Matrige l in 1,5-ml-Röhrchen vor dem Pfropfen und legen Sie es auf Eis. Um unspezifische Effekte zu vermeiden, verwenden Wachstumsfaktor reduziert Matrigel. </li><li> Kurz vor der Transplantation halten den Schlauch in der Hand für ein paar Sekunden zum Aufwärmen der Matrigel-Medium-Mix. </li><li> Depose den Mix auf der Anastomose mit einer Pipette und warten, bis die Mischung selbst montiert auf den verletzten Nerv. </li><li> Schließen Sie die Muskeln und die Haut mit einem 4,0 Faden. </li><li> Haus die Ratten einzeln zu halten und unter einer Wärmelampe für 24 Stunden. </li></ol></li></ol> 3. Auswertung <ol><li> Laryngoskopie <ol><li> Anesthetize Ratten durch intraperitoneal Injektion von Ketamin-Hydrochlorid (12,5 mg / kg) und Chlorpromazin-Hydrochlorid (0,625 mg / kg). Ratten bestätigen sind mit einer Zehe Prise vor mit Protokoll fortfahren betäubt. </li><li> Legen Sie die Ratte in Rückenlage. </li><li> Legen Sie ein 30 ° videolaryngoscope angepasst, um den besten Blick auf den Kehlkopf zu liefern. Anatomischen Landmarken zu bestimmen, um die gleiche Ansicht für jede Aufnahme wiederzugeben. </li><li> Nehmen Stimmbandbewegungen mit der videolaryngoscope (5-10 Sequenzen / Tier). Für jedes Tier wählen drei Sequenzen von aufeinander maximale Adduktion und maximale Entführung. </li><li> Analysieren Kehlkopf-Funktion mit Bildanalyse-Software. Bestimmen Sie absolute Winkelbewegung durch Messung der Differenz zwischen der Bewegung der maximalen Entführung und maximale Adduktion der Stimmbänder. Bestimmen Sie dynamische Punktzahl durch die Messung der Bewegungsamplitude. Bestimmen funktionalen Bewertung durch die Messung der Synkinese und paradoxen Bewegungen. </li></ol></li><li> Elektromyographie (EMG) <ol><li&gt; Legen Sie eine Elektrode auf der hinteren Oberschenkelmuskeln der Ratte für die elektrische Isolation. </li><li> Expose Kehlkopfes und der Luftröhre durch Öffnen Haut und Muskeln wie zuvor in &quot;wiederkehrende Nervenanastomose&quot; (Abschnitt 2.1) beschrieben. </li><li> Setzen Sie die cricothyroideum Knorpel. </li><li> Öffnen Sie die cricothyroideum Knorpel, um die hinteren cricoarytenoid (PCA) mit Mikroschere Muskel aussetzen. </li><li> Einführung eines monopolaren Nadelelektrode (38 x 0,45 mm) in der PCA Muskel. </li><li> Notieren Sie die elektrische Muskelaktivität des PCA Muskel mit einem Erfassungssystem während der spontanen Ventilation. </li><li> Analysieren Sie die Muskelaktivität in Bezug auf Reichtum und die Synchronisation mit der Atmung. Um zu analysieren, EMG, weisen eine qualitative Punktzahl von 0-3 anhand der folgenden Skala: 0: unrhymed Verfolgung, ohne Erhöhung während der Inspiration, 1: gereimt Tracing mit Inspirations Erhöhung, aber schlechte Rückverfolgung (NEUROGEN), 2: gereimt Tracing mit reicher Tätigkeit 3: gereimt Tracing, sehr reich, ein i bildennterference Muster, ähnlich einer maximalen absichtliche Aktivität. </li><li> Expose der Vagusnerv, um die Latenz und potentiellen Dauer zu messen. Der Vagusnerv ist als Standort gewählt, weil der Stimulation RLN können während der Stimulation auf Grund seiner geringen Größe beschädigt werden. </li><li> Anregung der Vagusnerv mit einer Elektrode. </li><li> Aufzeichnung von elektrischen Signalen in dem PCA Muskel. Messen der Latenzzeit und Dauer Potenzial. Wenn möglich verwenden Sie ein Erfassungsmodul, um die Muskelaktivität, Latenz und Potentialdauer aufzeichnen wie Powerlab System. </li></ol></li><li> Histologie <ol><li> Euthanize das Tier mit Pentobarbital-Überdosis. </li><li> Entfernen Sie den distalen Stumpf des RLN unter mikroskopischer Kontrolle. Der distale Teil des RLN ist der Teil zwischen Anastomose und Kehlkopf definiert. Man beachte, dass es möglich ist, die Anastomose mehrere Wochen nach der Operation zu finden, weil die 11.0 Nahtmaterial ein nicht-absorbierbare Naht. </li><li> Platzieren des distalen Abschnitts des RLN in 2% Glutaraldehyd mit 0,1 M Phosphat(PH = 7,3) für 2 h bei 4 ° C. </li><li> Sorgfältig orientieren die Proben koronalen Abschnitte zu realisieren. </li><li> In Phosphatpuffer waschen Proben. </li><li> Schneiden in kleinere Segmente (3-4 mm Länge) und Postfix für 60 min bei Raumtemperatur in 1% OsO 4 gepuffert und mit Ethanol dehydriert. </li><li> Orient Proben in Silikonformen und in Harzen, bestehend in POLYBED 812, DDSA und MNA eingebettet, um die 2% des Beschleunigers BDMA zugegeben wurde. </li><li> Machen Semidünnquerschnitte (1 um dick) mit einem Pyramitome Ultramikrotomie-System. </li><li> Fleck mit 0,1% Toluidinblau in 1% Natriumtetraborat für 75 sec bei 70 ° C. </li><li> Analysieren RLN Proben mit einem Zähl-Analyse-System. Die Anzahl der Fasern zu messen und myelinisierten Nervenfaserprofile durch Bestimmung der äußeren und inneren Begrenzung der Myelinscheide. </li></ol></li><li> Transplantation <ol><li> Vorbereitung der Zellen für die Transplantation und Transplantation der Zellen wie zuvor beschriebenin &quot;Zelltransplantation&quot; (Abschnitt 2.2). </li><li> Analyse </li><li> Euthanize das Tier mit Pentobarbital-Überdosis. Beachten Sie, dass die Fixierung der Tiere mit intrakardiale Injektion von PFA 4% durchgeführt werden. </li><li> Entfernen Sie ca. 2 cm der RLN. Verwenden proximalen und distalen Teile der RLN. </li><li> Fix RLN Probe in flüssigem Stickstoff. </li><li> Proben bei -80 ° C </li><li> Cut-Proben in Längsrichtung mit Kryostat (10-20 um dick). </li><li> Analysieren Sie die Proben unter dem Fluoreszenzmikroskop mit GFP-positiven Zellen zu erkennen. Beachten Sie, dass anti-GFP-Antikörper können zur Fluoreszenzemission erhöhen und costainings durchzuführen. </li></ol></li></ol>

<ol>
	<li>Barraud, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Neural+crest+origin+of+olfactory+ensheathing+glia.">Neural crest origin of olfactory ensheathing glia.</a> Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 107, 21040-21045 (2010).</li><li>Guerout, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Comparative+gene+expression+profiling+of+olfactory+ensheathing+cells+from+olfactory+bulb+and+olfactory+mucosa.">Comparative gene expression profiling of olfactory ensheathing cells from olfactory bulb and olfactory mucosa.</a> Glia. 58, 1570-1580 (1002).</li><li>Honore, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Isolation,+characterization,+and+genetic+profiling+of+subpopulations+of+olfactory+ensheathing+cells+from+the+olfactory+bulb.">Isolation, characterization, and genetic profiling of subpopulations of olfactory ensheathing cells from the olfactory bulb.</a> Glia. 60, 404-413 (2012).</li><li>Franssen, E. H., de Bree, F. M., Verhaagen, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Olfactory+ensheathing+glia:+their+contribution+to+primary+olfactory+nervous+system+regeneration+and+their+regenerative+potential+following+transplantation+into+the+injured+spinal+cord.">Olfactory ensheathing glia: their contribution to primary olfactory nervous system regeneration and their regenerative potential following transplantation into the injured spinal cord.</a> Brain Res. Rev. 56, 236-258 (2007).</li><li>Lakatos, A., Franklin, R. J., Barnett, S. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Olfactory+ensheathing+cells+and+Schwann+cells+differ+in+their+in+vitro+interactions+with+astrocytes.">Olfactory ensheathing cells and Schwann cells differ in their in vitro interactions with astrocytes.</a> Glia. 32, 214-225 (2000).</li><li>Woodhall, E., West, A. K., Chuah, M. I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cultured+olfactory+ensheathing+cells+express+nerve+growth+factor,+brain-derived+neurotrophic+factor,+glia+cell+line-derived+neurotrophic+factor+and+their+receptors.">Cultured olfactory ensheathing cells express nerve growth factor, brain-derived neurotrophic factor, glia cell line-derived neurotrophic factor and their receptors.</a> Brain Res. Mol. Brain Res. 88, 203-213 (2001).</li><li>Dombrowski, M. A., Sasaki, M., Lankford, K. L., Kocsis, J. D., Radtke, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Myelination+and+nodal+formation+of+regenerated+peripheral+nerve+fibers+following+transplantation+of+acutely+prepared+olfactory+ensheathing+cells.">Myelination and nodal formation of regenerated peripheral nerve fibers following transplantation of acutely prepared olfactory ensheathing cells.</a> Brain Res. 1125, 1-8 (2006).</li><li>Guerout, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Transplantation+of+olfactory+ensheathing+cells+promotes+axonal+regeneration+and+functional+recovery+of+peripheral+nerve+lesion+in+rats.">Transplantation of olfactory ensheathing cells promotes axonal regeneration and functional recovery of peripheral nerve lesion in rats.</a> Muscle Nerve. 43, 543-551 (2011).</li><li>Guntinas-Lichius, O., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Transplantation+of+olfactory+ensheathing+cells+stimulates+the+collateral+sprouting+from+axotomized+adult+rat+facial+motoneurons.">Transplantation of olfactory ensheathing cells stimulates the collateral sprouting from axotomized adult rat facial motoneurons.</a> Exp. Neurol. 172, 70-80 (2001).</li><li>Makoukji, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Lithium+enhances+remyelination+of+peripheral+nerves.">Lithium enhances remyelination of peripheral nerves.</a> Proc. Natl. Acad. Sci U.S.A. 109, 3973-3978 (2012).</li><li>Guerout, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Co-transplantation+of+olfactory+ensheathing+cells+from+mucosa+and+bulb+origin+enhances+functional+recovery+after+peripheral+nerve+lesion.">Co-transplantation of olfactory ensheathing cells from mucosa and bulb origin enhances functional recovery after peripheral nerve lesion.</a> PloS one. 6, 22816 (2011).</li><li>Paviot, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Efficiency+of+laryngeal+motor+nerve+repair+is+greater+with+bulbar+than+with+mucosal+olfactory+ensheathing+cells.">Efficiency of laryngeal motor nerve repair is greater with bulbar than with mucosal olfactory ensheathing cells.</a> Neurobiol. Dis. 41, 688-694 (2011).</li><li>Girard, S. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Isolating+nasal+olfactory+stem+cells+from+rodents+or+humans.">Isolating nasal olfactory stem cells from rodents or humans.</a> J. Vis. Exp. , (2011).</li><li>Nash, H. H., Borke, R. C., Anders, J. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=New+method+of+purification+for+establishing+primary+cultures+of+ensheathing+cells+from+the+adult+olfactory+bulb.">New method of purification for establishing primary cultures of ensheathing cells from the adult olfactory bulb.</a> Glia. 34, 81-87 (2001).</li><li>Bianco, J. I., Perry, C., Harkin, D. G., Mackay-Sim, A., Feron, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Neurotrophin+3+promotes+purification+and+proliferation+of+olfactory+ensheathing+cells+from+human+nose.">Neurotrophin 3 promotes purification and proliferation of olfactory ensheathing cells from human nose.</a> Glia. 45, 111-123 (2004).</li><li>Paviot, A., Bon-Mardion, N., Duclos, C., Marie, J. P., Guerout, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Although+olfactory+ensheathing+cells+have+remarkable+potential+to+sustain+nerve+regeneration,+they+cannot+be+applied+to+a+severe+vagus+nerve+section/resection+model.">Although olfactory ensheathing cells have remarkable potential to sustain nerve regeneration, they cannot be applied to a severe vagus nerve section/resection model.</a> Muscle Nerve. 43, 919-920 (2011).</li></ol>

Die Autoren haben nichts zu offenbaren.

Die hier vorgestellten Techniken machen OECs ein nützliches Modell, um Zelltransplantationen in peripheren Nervenverletzung Modelle zu studieren. Das Zellkulturverfahren ist relativ einfach und leicht durchgeführt werden. Auf der anderen Seite, chirurgische Eingriffe, insbesondere Abschnitt / Anastomose der RLN, erfordern Erfahrung und muss von qualifiziertem Fachpersonal durchgeführt werden. Die in diesem Protokoll beschriebenen Verfahren markieren wichtige Faktoren zu konzentrieren, um ...

Die Riechschleimhaut (OM) in peripheren Nervensystems und des olfaktorischen Bulbus (OB) in das zentrale Nervensystem, die primäre olfaktorische System besteht aus zwei unterschiedlichen Teilen zusammengesetzt. Der primäre olfaktorische System wird durch die Kapazität der primären olfaktorischen Neuronen (PON) zur Selbsterneuerung während des gesamten Lebens in Säugetierarten gekennzeichnet. Diese Fähigkeit wird durch die Anwesenheit von neuralen Stammzellen in dem OM ermöglicht. PON Wachstum und Nachwachsen von OM zu OB wird von spezialisierten Gliazellen genannt ensheathing Riechzellen (OECs) erleichtert. OECs sind Neuralleistenzellen, die einen günstigen Mikroumgebung für die Neurogenese des PON von OM in den OB 1 erstellen. Dadurch kann OECs in OM und OB bilden unterschiedliche Subpopulationen von Zellen 2,3 gefunden werden. Die unterschiedlichen Eigenschaften der OECs haben Wissenschaftler führen, um sie für die Zelltransplantationen in mehreren Nervensystem Läsion Paradigmen 4 zu verwenden. Tatsächlich OECs produzieren Wachstumsfaktoren, Glia-Narben zu reduzieren, prOmote axonalen Nachwachsen und kann frei vermischen sich mit 5,6 Astrozyten. Allerdings sind die überwiegende Mehrheit dieser Studien zu Rückenmarksverletzungen (SCI) basiert; wenige von ihnen haben OECs nach peripherer Nervenverletzung (PNI) 7,8 verwendet. Obwohl das periphere Nervensystem hat eine große Kapazität, nach Nervenverletzung zu regenerieren, komplette Abschnitte induzieren abweichenden axonalen Nachwachsen. In der Tat, nach der vollständigen Querschnitten erhalten des Gesichts oder der wiederkehrenden Kehlkopfnerven (RLN) fehlgeleitet Axone verursachen Muskelkokontraktionen Synkinese genannt. Deshalb ist es von grundlegender Bedeutung, um ein Modell der PNI schlagen nicht nur quantitativ axonale Nachwachsen sondern auch die Wirksamkeit der Muskelkontraktionen zu bewerten. In der Literatur wird beschrieben häufigste Modell ist auf Gesichtsnerv Läsion 9,10 basiert. In diesem Modell werden funktionelle Auswertungen auf die Erholung der Whisker Wanderung 10 basiert. Es ist jedoch schwierig, die Effizienz des beweglichen demonstrierenements und die Muskelkokontraktionen Phänomene zu unterscheiden. Wir schlagen vor, hier ein Modell auf der Basis einer RLN Läsion. Dieses Modell ermöglicht die Auswertung der nicht nur das Nachwachsen der axonalen und Bewegungen der Stimmbänder, sondern auch die Effizienz und Funktionalität dieser Bewegungen nach Zelltransplantationen 11,12. Dieses Protokoll bietet eine Schritt für Schritt vor, um Kultur-und Transplantations OECs von OM und OB in einem Abschnitt RLN / Anastomose Modell und zu den Tieren nach der Operation zu beurteilen.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" width="591">
	<colgroup>
		<col />
		<col />
		<col />
	</colgroup>
	<tbody>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:240px;">DMEM/F12</td>
			<td style="width:155px;">Invitrogen</td>
			<td style="width:197px;">E3521T</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">FBS</td>
			<td>Invitrogen</td>
			<td>E3387M</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Penicilin/streptomycin</td>
			<td>Invitrogen</td>
			<td>1152-8876</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">HBSS</td>
			<td>Invitrogen</td>
			<td>M3467Y</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Trypsin-EDTA</td>
			<td>Invitrogen</td>
			<td>M3513P</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Cacodylate</td>
			<td>Merck</td>
			<td>1.03256.0100</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">DDSA</td>
			<td>BIOVALLEY</td>
			<td>00563-450</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">MNA</td>
			<td>BIOVALLEY</td>
			<td>00886-450</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">BDMA</td>
			<td>BIOVALLEY</td>
			<td>00141-100</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">POLYBED 812</td>
			<td>BIOVALLEY</td>
			<td>08791-500</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">PE anti-mouse&#160;</td>
			<td>BD Bioscience&#160;</td>
			<td>550589</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Matrigel GFR</td>
			<td>BD Bioscience&#160;</td>
			<td>356231</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Collagenase A</td>
			<td>Roche</td>
			<td>10103586001</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Mouse anti P75</td>
			<td>Chemicon</td>
			<td>MAB 365</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">11.0 Wire</td>
			<td>Ethicon&#160;</td>
			<td>FG 2881</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Toluidine Blue&#160;</td>
			<td>RAL DIAGNOSTICS</td>
			<td>361590-0025</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Centrifuge</td>
			<td>Sigma&#160;</td>
			<td>Sigma 2-16PK</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Incubator&#160;</td>
			<td>Thermo scientific</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Laminar flow hood</td>
			<td>Faster</td>
			<td style="width:197px;">BH-EN 2003 S</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Flow cytometer</td>
			<td>BD Bioscience&#160;</td>
			<td>FACSCalibur</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Microscope</td>
			<td>Zeiss</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Videolaryngoscope</td>
			<td>Karl Storz Endoskope</td>
			<td>Telecam SL NLSC 20212120</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Acquisition system</td>
			<td>ADInstruments</td>
			<td>Powerlab system</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Pyramitome Ultramicrotomy System&#160;</td>
			<td style="width:155px;">Leica</td>
			<td>Ultracut S</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Image analysis system</td>
			<td>Explora Nova</td>
			<td>Mercator</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

transplantation of olfactory ensheathing cells to evaluate functional recovery after peripheral nerve injury

<html> Riech ensheathing Zellen (OECs) sind Neuralleistenzellen, die das Wachstum und das Nachwachsen der primären Riechzellen zu ermöglichen. Tatsächlich wird die primäre olfaktorische System durch seine Fähigkeit, sich neue Neuronen auch bei erwachsenen Tieren zu geben ist. Diese besondere Fähigkeit ist teilweise auf die Anwesenheit von OECs die eine günstige Mikroumgebung für die Neurogenese zu erstellen. Diese Eigenschaft der OECs hat für Mobil Transplantation wie in Rückenmarksverletzung Modelle verwendet. Obwohl das periphere Nervensystem hat eine größere Kapazität nach Nervenverletzung als das zentrale Nervensystem zu regenerieren, komplette Abschnitte induzieren Fehlleitung während der axonalen Nachwachsen insbesondere nach Gesichts von Kehlkopfnervendurchtrennung. Insbesondere voller Schnitte des N. recurrens (RLN) induziert abweichenden axonalen Nachwachsen was Synkinese der Stimmbänder. In diesem speziellen Modell haben wir gezeigt, dass OECs Transplantation effizient axonalen Nachwachsen erhöht. ve_content &quot;&gt; OECs aus sowohl in der Riechschleimhaut (OM-OECs) und Riechkolben (OB-OECs) weisen mehrere Subpopulationen gebildet. Wir stellen hier ein Modell der zellulären Transplantation auf Basis der Verwendung dieser verschiedenen Subpopulationen von OECs in eine RLN Verletzungsmodell. Mit diesem Paradigma wurden Primärkulturen von OB-OECs und OM-OECs in Matrigel nach Schnitt und Anastomose der RLN transplantiert. Zwei Monate nach der Operation, werteten wir transplantierten Tieren durch komplementäre Analysen auf der Basis videolaryngoscopy, Elektromyographie (EMG) und histologische Untersuchungen. Erstens erlaubt videolaryngoscopy uns Kehlkopffunktionen auszuwerten, insbesondere Muskelkokontraktionen Phänomene. Dann analysiert EMG gezeigt Reichtum und Synchronisation von Muskelaktivitäten. Schließlich histologische Studien basierend auf Toluidinblau-Färbung erlaubt die Quantifizierung der Anzahl und Profil von markhaltigen Fasern. Alle zusammen, beschreiben wir hier, wie Sie, Kultur, ide isolierenntify und Transplantation OECs von OM und OB nach Abschnitt RLN-Anastomose und wie zu bewerten und zu analysieren, die Effizienz der transplantierten Zellen auf das Nachwachsen der axonalen und Kehlkopffunktionen.

Abbildungen mit Steuerung und reinnervierte (Abschnitt / anastomosiert) Tiere wurden ausgewählt, als Ergebnisse können in Abhängigkeit von der Zelltransplantationen durchgeführt (OM, OB oder OM + OB) variieren. Zellkultur Die Zellen anhaften schnell auf der Kunststoffoberfläche und wurde in parallelen Schwaden von Zellen, die länglich oder verjüngt, dreieckig, mehrpolige oder spindelförmig getrennt sind (Fig. 1A und 1B). Nach 8 Tagen <e...

Watch this Scientific Journal Video about Transplantation of Olfactory Ensheathing Cells to Evaluate Functional Recovery after Peripheral Nerve Injury at JoVE.com

Transplantation of Olfactory Ensheathing Cells to Evaluate Functional Recovery after Peripheral Nerve Injury

Riech ensheathing Zellen (OECs) sind Neuralleistenzellen, die das Wachstum der primären Riechzellen zu ermöglichen. Diese spezielle Eigenschaft kann für die zelluläre Transplantation verwendet werden. Wir stellen hier ein Modell der zellulären Transplantation basierend auf der Verwendung von OECs in einer Kehlkopfnervenschädigung-Modell.

Transplantation von olfaktorischen Zellen ensheathing zu Funktionswiederherstellung nach peripheren Nervenschäden Bewerten

Olfactory ensheathing cells (OECs) are neural crest cells which allow growth and regrowth of the primary olfactory neurons. Indeed, the primary olfactory ...

transplantation-olfactory-ensheathing-cells-to-evaluate-functional

Research

JoVE Journal

Neuroscience

11.7K Aufrufe.  University of Rouen.  Riech ensheathing Zellen (OECs) sind Neuralleistenzellen, die das Wachstum der primären Riechzellen zu ermöglichen. Diese spezielle Eigenschaft kann für die zelluläre Transplantation verwendet werden. Wir stellen hier ein Modell der zellulären Transplantation basierend auf der Verwendung von OECs in einer Kehlkopfnervenschädigung-Modell. 

Serie: Transplantation of Olfactory Ensheathing Cells to Evaluate Functional Recovery after Peripheral Nerve Injury

An Optic Nerve Crush Injury Murine Model to Study Retinal Ganglion Cell Survival

Injury to the optic nerve can lead to axonal degeneration, followed by a gradual death of retinal ganglion cells (RGCs), which results in irreversible vision loss. Examples of such diseases in human include traumatic optic neuropathy and optic nerve degeneration in glaucoma. It is characterized by typical changes in the optic nerve head, progressive optic nerve degeneration, and loss of retinal ganglion cells, if uncontrolled, leading to vision loss and blindness.
The optic nerve crush (ONC) injury mouse model is an important experimental disease model for traumatic optic neuropathy, glaucoma, etc. In this model, the crush injury to the optic nerve leads to gradual retinal ganglion cells apoptosis. This disease model can be used to study the general processes and mechanisms of neuronal death and survival, which is essential for the development of therapeutic measures. In addition, pharmacological and molecular approaches can be used in this model to identify and test potential therapeutic reagents to treat different types of optic neuropathy.
Here, we provide a step by step demonstration of (I) Baseline retrograde labeling of retinal ganglion cells (RGCs) at day 1, (II) Optic nerve crush injury at day 4, (III) Harvest the retinae and analyze RGC survival at day 11, and (IV) Representative result.

This protocol shows how to retrogradely label retinal ganglion cells, and how to subsequently make an optic nerve crush injury in order to analyze retinal ganglion cell survival and apoptosis. It is an experimental disease model for different types of optic neuropathy, including glaucoma.

Ein Optic Nerve Crush Injury Mausmodell zur retinalen Ganglienzellen Survival Study

Injury to the optic nerve can lead to axonal degeneration, followed by a gradual death of retinal ganglion cells (RGCs), which results in irreversible ...

Forschung

Neurowissenschaften

Dorsal Root Ganglia Neurons and Differentiated Adipose-derived Stem Cells: An In Vitro Co-culture Model to Study Peripheral Nerve Regeneration

Dorsal root ganglia (DRG) neurons, located in the intervertebral foramina of the spinal column, can be used to create an in vitro system facilitating the study of nerve regeneration and myelination. The glial cells of the peripheral nervous system, Schwann cells (SC), are key facilitators of these processes; it is therefore crucial that the interactions of these cellular components are studied together. Direct contact between DRG neurons and glial cells provides additional stimuli sensed by specific membrane receptors, further improving the neuronal response. SC release growth factors and proteins in the culture medium, which enhance neuron survival and stimulate neurite sprouting and extension. However, SC require long proliferation time to be used for tissue engineering applications and the sacrifice of an healthy nerve for their sourcing. Adipose-derived stem cells (ASC) differentiated into SC phenotype are a valid alternative to SC for the set-up of a co-culture model with DRG neurons to study nerve regeneration. The present work presents a detailed and reproducible step-by-step protocol to harvest both DRG neurons and ASC from adult rats; to differentiate ASC towards a SC phenotype; and combines the two cell types in a direct co-culture system to investigate the interplay between neurons and SC in the peripheral nervous system. This tool has great potential in the optimization of tissue-engineered constructs for peripheral nerve repair.

Dorsal Root Ganglia Neurons and Differentiated Adipose-derived Stem Cells: An In Vitro Co-culture Model to Study Peripheral Nerve Regeneration

Dorsal root ganglia (DRG) are structures containing the sensory neurons of the peripheral nervous system. When dissociated, they can be co-cultured with SC-like adipose-derived stem cells (ASC), providing a valuable model to study in vitro nerve regeneration and myelination, mimicking the in vivo environment at the injury site.

Dorsalwurzelganglien Neuronen und differenzierten Fettgewebe gewonnene Stammzellen: Eine<em&gt; In-vitro-</em&gt; Co-Kultur Modell zur Regeneration peripherer Nerven Studieren

Dorsal root ganglia (DRG) neurons, located in the intervertebral foramina of the spinal column, can be used to create an in vitro system facilitating the ...

Functional Evaluation of Olfactory Pathways in Living Xenopus Tadpoles

Xenopus tadpoles offer a unique platform to investigate the function of the nervous system. They provide multiple experimental advantages, such as accessibility to numerous imaging approaches, electrophysiological techniques and behavioral assays. The Xenopus tadpole olfactory system is particularly well suited to investigate the function of synapses established during normal development or reformed after injury. Here, we describe methodologies to evaluate the processing of olfactory information in living Xenopus larvae. We outline a combination of in vivo measurements of presynaptic calcium responses in glomeruli of the olfactory bulb with olfactory-guided behavior assays. Methods can be combined with the transection of olfactory nerves to study the rewiring of synaptic connectivity. Experiments are presented using both wild-type and genetically modified animals expressing GFP reporters in central nervous system cells. Application of the approaches described to genetically modified tadpoles can be useful for unraveling the molecular bases that define vertebrate behavior.

Functional Evaluation of Olfactory Pathways in Living Xenopus Tadpoles

Xenopus tadpoles offer a unique platform to investigate the function of the nervous system in vivo. We describe methodologies to evaluate the processing of olfactory information in living Xenopus larvae in normal rearing conditions or after injury.

Funktionsauswertung olfaktorische Wege im Leben Xenopus Kaulquappen

Xenopus tadpoles offer a unique platform to investigate the function of the nervous system. They provide multiple experimental advantages, such as ...

A Preclinical Model to Assess Brain Recovery After Acute Stroke in Rats

The purpose of this study was to establish and validate an animal brain ischemia model in the recovery and sequela stages. A middle cerebral artery occlusion/reperfusion (MCAO/R) model in male Sprague-Dawley rats was chosen. By changing the rat&#39;s weight (260&#8722;330 g), the thread bolt type (2636/2838/3040/3043) and the brain infarct time (2-3 h), a higher Longa&#39;s score, a larger infarct volume and a greater model success ratio were screened using the Longa&#39;s score and TTC staining. The optimum model condition (300 g, 3040 thread bolt, 3 h brain infarct time) was acquired and used in a 1-90 day observation period after reperfusion via assessment of sensorimotor functions and infarct volume. At these conditions, the bilateral asymmetry test had a significant difference from 1 to 90 days, and the grid-walking test had a significant difference from 1 to 60 days; both differences could be a suitable sensorimotor functional test. Thus, the most appropriate condition of a novel rat model in the recovery and sequela stages of brain ischemia was found: 300 g rats that underwent MCAO with a 3040 thread bolt for a 3 h brain infarct and then reperfused. The appropriate sensorimotor functional tests were a bilateral asymmetry test and a grid-walking test.

The&#160;purpose of this study is to establish and validate an animal model for research in the recovery and sequela stages of brain ischemia by testing brain infarction and sensorimotor function after middle cerebral artery occlusion/reperfusion (MCAO/R) after 1-90 days in rats.

Ein präklinisches Modell zur Beurteilung der Gehirnerholung nach akutem Schlaganfall bei Ratten

The purpose of this study was to establish and validate an animal brain ischemia model in the recovery and sequela stages. A middle cerebral artery ...

3D Kinematic Analysis for the Functional Evaluation in the Rat Model of Sciatic Nerve Crush Injury

Compared to the Sciatic Functional Index (SFI), kinematic analysis is a more reliable and sensitive method for performing functional evaluations of sciatic nerve injury rodent models. In this protocol, we describe a novel kinematic analysis method that uses a three-dimensional (3D) motion capture apparatus for functional evaluations using a rat sciatic nerve crush injury model. First, the rat is familiarized with treadmill walking. Markers are then attached to the designated bone landmarks and the rat is made to walk on the treadmill at the desired speed. Meanwhile, the posterior limb movements of the rat are recorded using four cameras. Depending on the software used, marker tracings are created using both automatic and manual modes and the desired data are produced after subtle adjustments. This method of kinematic analysis, which uses a 3D motion capture apparatus, offers numerous advantages, including superior precision and accuracy. Many more parameters can be investigated during the comprehensive functional evaluations. This method has several shortcomings that require consideration: The system is expensive, can be complicated to operate, and may produce data deviations due to skin shifting. Nevertheless, kinematic analysis using a 3D motion capture apparatus is useful for performing functional anterior and posterior limb evaluations. In the future, this method may become increasingly useful for generating accurate assessments of various traumas and diseases.

We introduce a kinematic analysis method that uses a three-dimensional motion capture apparatus containing four cameras and data processing software for performing functional evaluations during fundamental research involving rodent models.

3D Kinematische Analyse zur funktionellen Bewertung im Rattenmodell von Ischias-Nerven-Crush-Verletzungen

Compared to the Sciatic Functional Index (SFI), kinematic analysis is a more reliable and sensitive method for performing functional evaluations of ...

Purification of Fibroblasts and Schwann Cells from Sensory and Motor Nerves in Vitro

The principal cells in the peripheral nervous system are the Schwann cells (SCs) and the fibroblasts. Both these cells distinctly express the sensory and motor phenotypes involved in different patterns of neurotrophic factor gene expression and other biological processes, affecting nerve regeneration. The present study has established a protocol to obtain highly purified rat sensory and motor SCs and fibroblasts more rapidly. The ventral root (motor nerve) and the dorsal root (sensory nerve) of neonatal rats (7-days-old) were dissociated and the cells were cultured for 4-5 days, followed by isolation of sensory and motor fibroblasts and SCs by combining differential digestion and differential adherence methods sequentially. The results of immunocytochemistry and flow cytometry analyses showed that the purity of the sensory and motor SCs and fibroblasts were &#62;90%. This protocol can be used to obtain a large number of sensory and motor fibroblasts/SCs more rapidly, contributing to the exploration of sensory and motor nerve regeneration.

Here, we present a method to purify fibroblasts and Schwann cells from sensory and motor nerves in vitro.

Reinigung von Fibroblasten und Schwannzellen von sensorischen und motorischen Nerven in Vitro

The principal cells in the peripheral nervous system are the Schwann cells (SCs) and the fibroblasts. Both these cells distinctly express the sensory and ...

Intra-Arterial Delivery of Neural Stem Cells to the Rat and Mouse Brain: Application to Cerebral Ischemia

Neural stem cell (NSC) therapy is an emerging innovative treatment for stroke, traumatic brain injury and neurodegenerative disorders. As compared to intracranial delivery, intra-arterial administration of NSCs is less invasive and produces a more diffuse distribution of NSCs within the brain parenchyma. Further, intra-arterial delivery allows the first-pass effect in the brain circulation, lessening the potential for trapping of cells in peripheral organs, such as liver and spleen, a complication associated with peripheral injections. Here, we detail the methodology, in both mice and rats, for delivery of NSCs through the common carotid artery (mouse) or external carotid artery (rat) to the ipsilateral hemisphere after an ischemic stroke. Using GFP-labeled NSCs, we illustrate the widespread distribution achieved throughout the rodent ipsilateral hemisphere at 1 d, 1 week and 4 weeks after postischemic delivery, with a higher density in or near the ischemic injury site. In addition to long-term survival, we show evidence of differentiation of GFP-labeled cells at 4 weeks. The intra-arterial delivery approach described here for NSCs can also be used for administration of therapeutic compounds, and thus has broad applicability to varied CNS injury and disease models across multiple species.

A method for delivering neural stem cells, adaptable for injecting solutions or suspensions, through the common carotid artery (mouse) or external carotid artery (rat) after ischemic stroke is reported. Injected cells are distributed broadly throughout the brain parenchyma and can be detected up to 30 d after delivery.

Intra-arterielle Lieferung von neuronalen Stammzellen an das Ratten- und Maushirn: Anwendung auf zerebrale Ischämie

Neural stem cell (NSC) therapy is an emerging innovative treatment for stroke, traumatic brain injury and neurodegenerative disorders. As compared to ...

Automated Gait Analysis to Assess Functional Recovery in Rodents with Peripheral Nerve or Spinal Cord Contusion Injury

Peripheral and central nerve injuries are mostly studied in rodents, especially rats, given the fact that these animal models are both cost-effective and a lot of comparative data has been published in the literature. This includes a multitude of assessment methods to study functional recovery following nerve injury and repair. Besides evaluation of nerve regeneration by means of histology, electrophysiology, and other in vivo and in vitro assessment techniques, functional recovery is the most important criterion to determine the degree of neural regeneration. Automated gait analysis allows recording of a vast quantity of gait-related parameters such as Paw Print Area and Paw Swing Speed as well as measures of inter-limb coordination. Additionally, the method provides digital data of the rats&#8217; paws after neuronal damage and during nerve regeneration, adding to our understanding of how peripheral and central nervous injuries affect their locomotor behavior. Besides the predominantly used sciatic nerve injury model, other models of peripheral nerve injury such as the femoral nerve can be studied by means of this method. In addition to injuries of the peripheral nervous systems, lesions of the central nervous system, e.g., spinal cord contusion can be evaluated. Valid and reproducible data assessment is strongly dependent on meticulous adjustment of the hard- and software settings prior to data acquisition. Additionally, proper training of the experimental animals is of crucial importance. This work aims to illustrate the use of computerized automated gait analysis to assess functional recovery in different animal models of peripheral nerve injury as well as spinal cord contusion injury. It also emphasizes the method&#8217;s limitations, e.g., evaluation of nerve regeneration in rats with sciatic nerve neurotmesis due to limited functional recovery. Therefore, this protocol is thought to help researchers interested in peripheral and central nervous injuries to assess functional recovery in rodent models.

Automated gait analysis is a feasible tool to evaluate functional recovery in rodent models of peripheral nerve injury and spinal cord contusion injury. While it requires only one setup to assess locomotor function in various experimental models, meticulous hard- and soft-ware adjustment and training of the animals is highly important.

Automatisierte Gait-Analyse zur Beurteilung der funktionellen Erholung bei Nagetieren mit peripheren Nerven- oder Rückenmarkskontitionsverletzungen

Peripheral and central nerve injuries are mostly studied in rodents, especially rats, given the fact that these animal models are both cost-effective and ...

Coculture of Axotomized Rat Retinal Ganglion Neurons with Olfactory Ensheathing Glia, as an In Vitro Model of Adult Axonal Regeneration

Olfactory ensheathing glia (OEG) cells are localized all the way from the olfactory mucosa to and into the olfactory nerve layer (ONL) of the olfactory bulb. Throughout adult life, they are key for axonal growing of newly generated olfactory neurons, from the lamina propria to the ONL. Due to their pro-regenerative properties, these cells have been used to foster axonal regeneration in spinal cord or optic nerve injury models.
We present an in vitro model to assay and measure OEG neuroregenerative capacity after neural injury. In this model, reversibly immortalized human OEG (ihOEG) is cultured as a monolayer, retinas are extracted from adult rats and retinal ganglion neurons (RGN) are cocultured onto the OEG monolayer. After 96 h, axonal and somatodendritic markers in RGNs are analyzed by immunofluorescence and the number of RGNs with axon and the mean axonal length/neuron are quantified.
This protocol has the advantage over other in vitro assays that rely on embryonic or postnatal neurons, that it evaluates OEG neuroregenerative properties in adult tissue. Also, it is not only useful for assessing the neuroregenerative potential of ihOEG but can be extended to different sources of OEG or other glial cells.

We present an in vitro model to assess olfactory ensheathing glia (OEG) neuroregenerative capacity, after neural injury. It is based on a coculture of axotomized adult retinal ganglion neurons (RGN) on OEG monolayers and subsequent study of axonal regeneration, by analyzing RGN axonal and somatodendritic markers.

Cokultur von Axotomized Rat Retinal Ganglion Neurons mit olfactory Ensheathing Glia, als In-Vitro-Modell der erwachsenen axonalen Regeneration

Olfactory ensheathing glia (OEG) cells are localized all the way from the olfactory mucosa to and into the olfactory nerve layer (ONL) of the olfactory ...

Motor Dual-Tasks for Gait Analysis and Evaluation in Post-Stroke Patients

Eighteen stroke patients were recruited for this study involving the evaluation of cognition and walking ability and multitask gait analysis. Multitask gait analysis consisted of a single walking task (Task 0), a simple motor dual-task (water-holding, Task 1), and a complex motor dual-task (crossing obstacles, Task 2). The task of crossing obstacles was considered to be equivalent to the combination of a simple walking task and a complex motor task as it involved more nervous system, skeletal movement, and cognitive resources. To eliminate heterogeneity in the results of the gait analysis of the stroke patients, the dual-task gait cost values were calculated for various kinematic parameters. The major differences were observed in the proximal joint angles, especially in the angles of the trunk, pelvis, and hip joints, which were significantly larger in the dual motor tasks than in the single walking task. This research protocol aims to provide a basis for the clinical diagnosis of gait function and an in-depth study of motor control in stroke patients with motor control deficits through the analyses of dual-motor walking tasks.

This paper presents a protocol specifically for dual motor task gait analysis in stroke patients with motor control deficits.

Motorische Doppelaufgaben für die Ganganalyse und -bewertung bei Patienten nach einem Schlaganfall

Eighteen stroke patients were recruited for this study involving the evaluation of cognition and walking ability and multitask gait analysis. Multitask ...