Diese Arbeit wird durch NSERC Zuschüsse an BK und RG finanziert. Die Autoren möchten auch Kehe Xie und Russell Hosain für ihre Golgi-Cox-Färbung Expertise danken.

Alle Experimente wurden in Übereinstimmung mit der kanadischen Rat der Tierpflege durchgeführt und von der University of Lethbridge, Animal Care Committee genehmigt. 1. Zucht und taktile Stimulation <ol><li> Bestellen trächtigen Ratten von gemeinsamen Tier Lieferanten oder züchten Welpen im Haus mit Standard-Laborzuchtverfahren. </li><li> Haus alle Tiere in einer temperaturgeregelten Zuchtraum (21 ° C), auf einem 12:12 h Licht gehalten: Dunkel-Zyklus und den Zugang zu Nahrung und Wasser ad libitum. </li><li> Wenn Jungtiere geboren werden, Haus weiblichen Ratten einzeln mit ihrem Nachwuchs. </li><li> Um eine zusätzliche Belastung, sofort nach der Geburt bezogen Handhabung zu vermeiden, beginnen taktile Stimulation der Jungtiere bei P3. </li><li> Taktile Stimulation sollte drei Mal pro Tag (09.00, 13.00 und 16.00 Uhr) von P3-P21 durchgeführt werden sollte und Welpen von ihren Müttern entwöhnt werden bei P21. </li><li> Bei Verwendung einer Quer Wurf Design, die Hälfte der Welpen from jeder Wurf taktile Stimulation die andere Hälfte dient als Kontrolle zu unterziehen. Zufallsprinzip die gleiche Anzahl von männlichen und weiblichen Jungtiere zu jeder Gruppe. Um Welpen unterziehen taktile Stimulation und Kontrollen unterscheiden, markieren Sie eine Gruppe von Jungtieren mit einem Permanentmarker auf den Hinterbeinen und Schwanz. Markierung muss erneut angewendet jeden zweiten Tag werden. </li></ol> Taktile Stimulation <ol start="7"><li> Dämme entfernen aus ihrem Käfig und legen Sie sie in einem temporären Käfig mit Futter und Wasser. Halten Sie den Staudamm und temporäre Käfig in der Züchtung / Gehäuse Raum. </li><li> Wiegen Rattenjungen als Gruppe vor der morgendlichen Sitzung taktile Stimulation (09.00). Für jede Sitzung, Welpen Transport Ratte ihre Käfige zu einem separaten Testraum für die taktile Stimulation. Setzen Sie den Käfig auf einem Heizkissen, die auf 24 ° C eingestellt </li><li> Verwenden Sie einen steifen Bord, um den Käfig in zwei Hälften teilen. Zeigen Rattenjungen in den taktile Stimulation Gruppe eine Hälfte und Kontrolle Welpen in der anderen Hälfte.Stellen Sie einen Timer bis 15 min. </li><li> Mit einer weichen Feder-wie Staubwedel, Bürste alle Jungtiere in der Gruppe taktile Stimulation in der gleichen Zeit für 15 aufeinander folgenden min. Die jungen Rattenjungen (~ P3-P12) ususally sich zusammen und scheinen einen tiefen Schlaf-Zyklus geben, was es sehr einfach, alle Welpen auf einmal zu stimulieren. Da die Welpen Alter, werden sie aktiv, mit einigen Jungtieren zu Fuß und die Untersuchung während der Sitzung. Der Experimentator sollte kontinuierlich zu bewegen wandernde Jungtiere in der Gruppe zu gewährleisten, erhält jeder Welpe gleich Stimulation. </li><li> Sobald die 15 Minuten-Sitzung beendet ist, transportieren die Welpen zurück zum Zuchtraum und gibt die Mutter an den Käfig. </li><li> Wiederholen Sie diesen Vorgang drei Mal am Tag für die 19 Tage des taktilen Stimulation. Nach der letzten Sitzung taktile Stimulation bei P21, sollten die Jungtiere von ihren Müttern entwöhnt werden. Welpen sollten dann in Käfigen mit 5 oder 6 andere entwöhnt Tiere des gleichen Geschlechts untergebracht werden. </li><li> Wenn Ratten durchlaufen keine weiteren Tests, sollten sie un gelassen werdengestört, auf dem normalen Licht: Dunkel-Zyklus mit Zugang zu Nahrung und Wasser libitm (abgesehen von regelmäßigen Käfig Reinigung und Handhabung), bis sie etwa 100 Tage alt zu erreichen. Wenn andere experimentelle Manipulationen unterzogen, sollten die Tiere behandelt oder getestet werden in Übereinstimmung mit diesen Laborprotokolle. </li></ol> 2. Opfer und Golgi-Cox Färbung <ol><li> Bei etwa P100, eine Überdosis verabreichen Natrium-Pentobarbital über IP-Injektion, um die Ratten und perfuse intrakardial mit etwa 100 ml 0,9% Kochsalzlösung. </li><li> Extrahieren Sie die Köpfe, wenn die Durchblutung abgeschlossen ist. Entfernen Sie die Gehirn aus dem Schädel, Schneiden der Sehnerv unten mit Mühe, das Kleinhirn intakt zu halten; Forscher können die Riechkolben zu halten oder zu entfernen. Zeigen extrahiert Gehirne in einem undurchsichtigen Nalgene Flasche mit 20 ml Golgi-Cox-Lösung 14. </li><li> Halten Sie die Gehirne in Golgi-Cox-Lösung für 14 Tage. Nach 14 Tagen, ersetzen Sie den Golgi-Cox-Lösung mit einer 30% igen Saccharoselösung. Halten Sie die Köpfe der Saccharose-Lösung für 2-5 Tage vor dem Schneiden. </li></ol> Hinweis: Wenn Gehirne nicht innerhalb von 14 Tagen nach der Übertragung auf die Saccharose-Lösung geschnitten werden kann, muss der Forscher, die Saccharose mit einem neuen Bestand von 30% Saccharose ersetzen. Der Forscher kann die Saccharose alle zwei Wochen für 4 Monate ohne nachteilige Auswirkungen auf die Färbung zu ersetzen. <ol start="4"><li> Um Abschnitt das Gehirn, das Gehirn sollte trocken getupft und mit dem Schneidetisch mit cyanocacrylic Kleber fixiert werden. Um Reißen oder ungleichmäßige Schnitte zu vermeiden, müssen die Forscher vorsichtig sein und sicherstellen, dass das gesamte Gehirn ist fest an der Bühne gesichert. </li><li> Die Vibratoms Behälter muss mit 6% Saccharose-Lösung auf ein Niveau, das die Schneideklinge deckt gefüllt werden. Stellen Sie die Parameter Vibratoms zu einer Geschwindigkeit und Amplitude bis 5, (dem Mittelpunkt auf beiden Skalen). Schneiden Sie das Gehirn in 200 um Abschnitte und legen die Abschnitte auf einem 2% verkleistert MikroUmfang Rutsche. Achten Sie darauf, die Abschnitte im Laufe des Schnitt feucht zu halten. </li><li> Wenn alle Abschnitte von Interesse gesammelt wurden, drücken die Abschnitte auf die Objektträger durch Druck auf den Schieber mit angefeuchtetem Löschpapier. Bewahren Sie die Folien in einer Objektträgergestell in der Feuchtigkeitskammer, bis sie bereit sind, angefärbt werden. Sie sollten in der Feuchtigkeitskammer für zumindest 12 Stunden länger als 4 Tage bleiben, aber nicht. Die Folien müssen feucht sein und sollte nicht erlaubt werden, zu trocknen. </li><li> Bereiten Sie die Färbung Regiment vor Beginn der Färbung. Etiketten zwölf Glas Färbeschalen (10,7 x 8,5 x 6,8 cm) und Prozess in der folgenden Weise: <ol><li> Destilliertes Wasser - 1 min </li><li> Ammoniumhydroxid - 30 min (im Dunkeln) </li><li> Destilliertes Wasser - 1 min </li><li> Kodak Fix für Film - 30 min (im Dunkeln) </li><li> Destilliertes Wasser - 1 min </li><li> 50% Alkohol - 1 min </li><li> 70% Alkohol - 1 min </li><li> 95% Alkohol - 1 min </li><li> 100% Alcohol - 5 min </li><li> Alcohol 100% - 5 min </li><li> Lösung (1/3 Chloroform, 1/3 HemoDe, 1/3 von 100% Alkohol) - 15 min </li><li> HemoDe - 15 min </li></ol></li></ol> * Xylol in verwendet wird, ersetzen von HemoDe werden. Um eine einheitliche Qualität der Färbung zu gewährleisten, sollten neue Lösungen für jede Folie verarbeitet Rack verwendet werden. <ol start="8"><li> Nach der letzten 15 Minuten Auftauchen in HemoDe, Deckglas die Folien mit Permount. </li><li> Lassen Sie die Folien an der Luft trocknen, bevor die Prüfung mit einem Mikroskop. </li></ol>

<ol>
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E., Kolb, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Structural+plasticity+associated+with+exposure+to+drugs+of+abuse.">Structural plasticity associated with exposure to drugs of abuse.</a> Neuropharmacology. 47, 33-46 (2004).</li></ol>

Die Autoren erklären, dass wir keine konkurrierenden finanziellen Interessen.

Aufgrund der offenen Plastizität des sich entwickelnden Gehirns, ist es wichtig, dass die experimentellen Verfahren, die früheren Erfahrungen werden sorgfältig überprüft und wird versucht, für alle dazwischenliegenden Variablen zu steuern. Aus diesem Grund wird ein Quer Wurf-Design während der taktile Stimulation Verfahren eingesetzt, um sicherzustellen, dass Welpen erhalten ähnliche Erfahrungen in allen anderen Bereichen der Entwicklung. Darüber hinaus ist es auch wichtig, dass mehrere Jungtiere aus mehreren Würfen sind für die Analyse ausgewählt, um die Möglichkeit, dass Effekte resultieren aus einer Vorspannung in einem einzigen Wurf Welpen oder zu vermeiden. Taktile Stimulation wird angenommen, dass die natürlich vorkommende mütterliche Verhalten nachahmen, Lecken und Putzen, die vermutlich von Vorteil für Nachkommen Entwicklung zu sein. Obwohl frühere Forschung hat betont, die erste Woche des Lebens (P0-P7), um eine kritische Periode für Lecken und Putzen 16 sein, nach 18 Tagen der ta die schiere Größe der Veränderung identifiziertctile Stimulation kann bedeuten, dass, obwohl sensiblen Zeiten gibt, ist längere Belichtungs überlegen. Es ist auch wichtig zu beachten, dass die Jungtiere Empfangen taktile Stimulation in diesem experimentellen Paradigma erleben auch lecken und Pflege von ihren Müttern, damit die taktile Stimulation ist zusätzlich zu den normalen Stimulation durch die Mutter verabreicht. Schließlich muss man sich auch bewusst Region abhängige Änderungen. Obwohl taktile Stimulation während der Entwicklung erhöht dendritischen Komplexität im präfrontalen Kortex, bedeutet dies nicht garantieren, dass strukturelle Veränderungen dieser Art wird sich in allen Hirnregionen sein. Es ist möglich, dass neuronale Morphologie in anderen Hirnregionen wie dem parietalen Kortex, würde in einem auffallend andere Art und Weise auf die gleiche Erfahrung zu reagieren. , Weil die taktile Stimulation Verfahren ist leicht verwaltet und stellt keine Gefahr für den Nachwuchs oder Absetzbecken, die das Potenzial, als ein wertvolles Werkzeug für viele Forschungsstudien zur Verbesserung der Entwicklung zum Ziel zu dienen hat jedochal Ziele. Bezüglich Golgi-Cox-Färbung von Hirngewebe sind die entscheidenden Schritte zur erfolgreichen Visualisierung von neuronalen Zellen, wie folgt: 1) Es muss eine ausreichende Durchblutung des Gehirns mit Kochsalzlösung sein. Falsche oder unzureichende Perfusion der Hirngewebe führt zu Blutgefäß-Artefakte, die es schwierig, tatsächlich neuronale Zellen sichtbar durch das Labyrinth der Blutgefäße, aber auch kompliziert die Fähigkeit, Neuronen zu fotografieren Malerei zu machen. 2) perfundierten Gehirn sollte in Golgi-Cox-Lösung und Saccharose-Lösung im Dunkeln gelagert werden. Speichern des Hirngewebe im Dunkeln reduziert die Hintergrundfärbung des Gewebes, was wiederum die Wahrscheinlichkeit des erfolgreichen Visualisierung Qualität neuronalen Zellen. 3) Das Hirngewebe ist in Saccharose-Lösung nach der 14 Tage Lagerung im Golgi-Cox-Lösung gespeichert. Wenn das Gewebe in 30% Saccharose-Lösung für 2-5 Tage eingetaucht, sind die Köpfe biegsamer bewegend und Reißen der Abschnitte verhindert, wennSchneiden. Es ist wichtig, Hirngewebe von der Saccharose-Lösung für eine erhöhte Zeitperioden verbleibenden verhindern (es sei denn, die Saccharoselösung kontinuierlich durch frische Lösung ersetzt), weil längerer Lagerung in Saccharose verringert die Qualität der Färbung. 4) Schließlich, sobald Folien wurden gebeizt und Abdeckung gerutscht, sollten sie genügend Zeit, um vor der Anzeige mit einem Mikroskop trocknen gegeben werden. Wenn Folien dürfen nicht ausreichend trockene Luft, kann das Gewebe zu verdunkeln, wodurch erfolgreiche Visualisierung von kortikalen Neuronen. Stabile Änderungen in psychologische Funktion und Verhaltens-Reaktionen, die in Reaktion auf Erfahrungen auftreten, werden vermutlich durch Reorganisation neuronaler Morphologie und synaptischer Verbindungen 17 erleichtert werden. Da diese Strukturänderungen eine messbare Ressource für erfahrungsabhängige Plastizität, ist die Verwendung eines zuverlässigen Färbeverfahren wichtig. Diese Vibratoms basierend Golgi-Cox Färbeverfahren bietet zuverlässige Fleckening von feinen Ästen und dendritischen Dornen, die nicht offensichtlich sein, kann mit anderen Protokollen wie Celloidin-Einbettung. Die Besonderheit des Golgi-Cox-Verfahren beruht auf seiner Fähigkeit, nur einen kleinen Teil der neuronalen Elemente (1-10%), die Rückverfolgung einzelner Neuronen für große Entfernungen ermöglicht färben. Trotz der Tatsache, dass nur ein kleiner Bruchteil der Neuronen mit dem Farbstoff imprägniert, Zellen, sichtbar gemacht werden, halten alle Funktionen, einschließlich Zellkörper, Dendriten, Axonen und Dendriten. Wenn darüber hinaus das Färbungsverfahren korrekt durchgeführt wird, werden die gefärbten Zellen zeichnen sich klar und deutlich gegen einen transparenten Hintergrund, weil andere kortikalen Strukturen bleiben ungefärbt und transparent. Aufgrund der Erkenntnis, dass die anhaltende Veränderungen in der äußeren Funktionieren muß die Plastizität des Nervensystems, dh die Fähigkeit von Neuronen, ihre Struktur und Konnektivität zu ändern, stellt die Golgi-Cox Färbeverfahren Forscher mitzuverlässige Technik zu visualisieren und quantifizieren diese Plastizität.

Obwohl es viele gemeldet und genutzt Techniken für die Prüfung der negativen frühen Erfahrungen auf die Hirnreifung, wie perinatalen Stress 1,2, sensorische Deprivation 3 und Medikamententoxizität 4, gibt es eingesetzt, um die Auswirkungen der positiven Erfahrungen nur sehr wenige Methoden untersuchen diese Zeit. Abgesehen von ökologischen Bereicherung ist taktile Stimulation einer der wenigen Gehirn Verbesserung Behandlungen mit nachgewiesener Wirkung 5. Taktile Stimulation ist eine Methode der sensorischen Stimulation der Haut, die das mütterliche Verhalten nachahmt, Ratte, Lecken und Putzen. Die allgemeine Akzeptanz als eine positive Manipulation ergibt sich aus Studien, dass taktile Stimulation verbessert die Reifung von Früh-und Neugeborenen-Ratten 6. Darüber hinaus Forschung im Labor Meaney 7 hat gezeigt, dass höhere Mütter lecken und Pflege sind, um positive Ergebnisse bei den Nachkommen verbunden. Aufgrund tiese positive Einflüsse, taktile Stimulation rasch entwickelte sich zu einem Sanierungsstrategie zur Minderung der Angst 8, die Verbesserung der Ergebnisse mit Hirnverletzung 9-11 zugeordnet und Dämpfen Drogen Sensibilisierung 12 ausgerichtet. Als solches ist taktile Stimulation eine wertvolle Technik für die Förderung der positiven ersten Erfahrungen, mit einem bewährten Fähigkeit, dramatisch neu zu organisieren neuronale Morphologie und synaptische Konnektivität des sich entwickelnden Gehirns. Um zu untersuchen und zu quantifizieren, Veränderungen in der neuronalen Morphologie, ist es notwendig, intakten Neuronen zu visualisieren. Der Golgi-Cox-Färbung Verfahren ist eine Modifikation von Camillo Golgi der Technik, die in den späten 1800er Jahren, die diskrete Färbung von einer kleinen Anzahl von Neuronen komplette 13 liefert. Obwohl das Verfahren scheint Neuronen zufällig und Reproduzierbarkeit wird allgemein als Hauptfehler, den kleinen Imprägnierungsrate ermöglicht die Visualisierung der gesamten neuronalen Elements, einschließlich ce genannten Fleckll Körper, Dendriten dendritischen Dornen, und Axone. Ebenso hat die erforderliche Zeit, um eine vorgegebene Gehirn mit Golgi-Lösung zu imprägnieren auch als Gang zitiert. Da jedoch einmal Färbung abgeschlossen Gewebe kann unbegrenzt aufbewahrt werden, und die Zeit zwischen der Durchblutung des Gehirns und Visualisierung von Neuronen mit einem Mikroskop kann in weniger als 21 Tagen durchgeführt werden, ist die Zeit nicht unvernünftig. Zusätzlich mit kleinen Änderungen zum Protokoll, Golgi-Cox-Färbung kann effektiv genutzt werden, um Gehirn von Nagetieren aus allen Altersgruppen zu imprägnieren. Da die Veränderungen auf der strukturellen Ebene haben, anhaltende Änderungen an Verhaltens-und psychologische Funktionieren gebracht worden, stellt der Golgi-Cox-Färbetechnik Forschern ein wertvolles Werkzeug, um Neuroplastizität messen.

<table border="1">
	<tbody>
		<tr>
			<td>Name of Material/ Equipment</td>
			<td>Company</td>
			<td>Catalog Number</td>
			<td>Comments/Description</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Potassium Dichromate</td>
			<td>Fisher</td>
			<td>P188</td>
			<td>&nbsp;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Mercuric Chloride</td>
			<td>Fisher</td>
			<td>M1561</td>
			<td>&nbsp;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Potassium Chromate</td>
			<td>Fisher</td>
			<td>P220</td>
			<td>&nbsp;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ammonium Hydroxide</td>
			<td>Fisher</td>
			<td>A669-500</td>
			<td>&nbsp;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Kodak Rapid Fix</td>
			<td>Vistek</td>
			<td>Kodak 146 4016</td>
			<td>&nbsp;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>EtOH-95 &amp; Anhydrous</td>
			<td>Commercial Alcohols</td>
			<td>No Cat Numbers</td>
			<td>All other Et-OH are dilutions</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Swiffers- Soft Feather-Like dusters</td>
			<td>Safeway</td>
			<td>&nbsp;</td>
			<td>Can be found at most grocery stores</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sucrose</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>S-9378</td>
			<td>&nbsp;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>HemoDe</td>
			<td>Electron Microscopy Sciences</td>
			<td>23410</td>
			<td>&nbsp;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Permount</td>
			<td>Fisher</td>
			<td>Sp15</td>
			<td>&nbsp;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Slides</td>
			<td>VWR</td>
			<td>160004-365</td>
			<td>&nbsp;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Coverslips</td>
			<td>VWR</td>
			<td>062011-9</td>
			<td>&nbsp;</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

visualizing the effects of a positive early experience, tactile stimulation, on dendritic morphology and synaptic connectivity with golgi-cox staining

Um längerfristige Verhaltensänderungen zu erzeugen, muss Erfahrungen produzieren stabile neuronale Morphologie und synaptische Verbindungen. Taktile Stimulation ist eine positive Erfahrung, die frühen ahmt Müttern lecken und Pflege bei der Ratte. Offenlegen von Rattenjungen zu dieser positiven Erfahrung kann leicht und kostengünstig durch den Einsatz hoch zugänglichen Materialien, wie ein Hausstaubtuch abgeschlossen sein. Mit einem Kreuz-Wurf-Design, sind Jungtiere entweder strich oder ungestört, für 15 min, drei Mal pro Tag während der perinatalen Periode. Um die neuroplastische Veränderungen zu dieser positiven ersten Erfahrungen im Zusammenhang zu messen, wird Golgi-Cox-Färbung von Hirngewebe eingesetzt. Aufgrund der Tatsache, dass Golgi-Cox Imprägnieren färbt eine diskrete Anzahl von Neuronen und nicht alle der Zellen, Färbung von Nagetiergehirn mit Golgi-Cox-Lösung ermöglicht die Visualisierung der gesamten neuronalen Elemente, einschließlich der Zellkörper, Dendriten, Axonen, und dendritischen Dornen. Das Färbeverfahren is durchgeführt über mehrere Tage und erfordert, dass der Forscher achten auf Details. Sobald jedoch Färbung abgeschlossen ist, das gesamte Gehirn wurde imprägniert und kann unbegrenzt fortlaufenden Analyse konserviert werden. Daher ist Golgi-Cox-Färbung eine wertvolle Ressource für das Studium erfahrungsabhängige Plastizität.

Wenn diese Färbungsverfahren wurde entsprechend folgt, wird konsistente und einheitliche Färbung von Dendriten und Dornen erzeugt. Siehe Abbildung 1 für eine Darstellung der Golgi-Cox neuronale Färbung. Dieses Verfahren erzeugt Färbung, die vergleichbar mit der neu in-vitro-Methoden entwickelt und kann gestatten Visualisierung von dendritischen Felder, die unterbrechungsfreie folgende Gewebeeinbettung sind, ist. Das Vibratom basierende Technik für Golgi-Cox-Färbung wurde festgestellt, weiter verbreitet Färbung der endständigen Zweige und pyramidalen Neuronen zu erzeugen, als die Färbung mit entweder Celloidin eingebettet und Kryostat-geschnittenen Gewebes 15. Da außerdem dieses Verfahren der Färbung imprägniert das gesamte Gehirn, alle Abschnitte können entweder sofort oder in der Zukunft zu analysieren. Da die Lage der morphologischen Veränderung ist es nicht immer offensichtlich, wenn Erzeugen eines ursprünglichen Hypothese, ermöglicht dieses Verfahren für die Erforschung weiterer Hirnregionen eind verhindert Entsorgung von Gewebe, das in der Zukunft nützlich sein können. Diese Färbung Methode für zuverlässige Anfärbung von allen Alters Rattenhirnen (P0-Alter) verwendet werden. Wenn jedoch Färbung junge Gehirne (&lt;1 g), das Gehirn nur in der Golgi-Cox Lösung bleiben 6 Tage, anstatt der 14 Tage erwachsenen Gehirn empfohlen, alle anderen Verfahren konstant gehalten werden. Die Hauptschwierigkeit, die während dieser Golgi-Cox Färbung auftreten können, ist die Unfähigkeit, hochwertige Färbung der zentralen Hirnregionen, einschließlich des Thalamus zu produzieren. Das gesamte Gehirn gleichzeitig imprägniert, kann zentralen Regionen empfangen ideale Konzentrationen von Flecken. Trotz dieser Erkenntnis, die Golgi-Cox-Technik produziert außergewöhnliche Färbung der subkortikalen Regionen wie dem Hippocampus und Striatum. Eine letzte Einschränkung des Verfahrens ergibt sich aus einer unvollständigen Entfernung von Blut aus dem Gehirn während der Perfusion Prozess. Blut kann zu Artefakten in dem Hirngewebe zu erzeugendas macht es schwierig zu fotografieren und verfolgen die Neuronen. Golgi-Cox Färbetechniken eine zuverlässige Messung der dendritischen Morphologie und Neuroanatomie, die nützlich für eine umfangreiche Reihe von Studien entwickelt, um Veränderungen auf neuronaler Ebene zu untersuchen ist. Bei der Untersuchung der neuronalen Struktur im präfrontalen Kortex folgenden taktile Stimulation in der frühen postnatalen Phase zeigte Golgi-Cox-Färbung dramatischen Anstieg der dendritischen Komplexität. Anatomischen Veränderungen frühzeitig taktile Stimulation Zusammenhang kann visuell durch Vergleich Wirbelsäule Dichte von pyramidalen Neuronen aus einer Kontrollratte, Neuronen von einer Ratte, die taktile Stimulation unterpyramiden (siehe Fig. 1) nachgewiesen werden. Außerdem können Parameter wie dendritische Verzweigung, dendritische Länge und Wirbelsäule Dichte berechnet und statistisch analysiert, um kontinuierliche Daten über Tiere verglichen werden können erzeugen. Um zuverlässige Ergebnisse zu erzielen, sollte auf Analyse Uhr durchgeführt werdenINDESTLISTE von drei Tieren pro Behandlungsgruppe und etwa fünf Neuronen pro Hemisphäre sollte zufällig für jede Gehirnregion unter Analyse ausgewählt werden. den dendritischen Komplexität (Stacheln / um x um von Dendriten) von Tieren, die taktile Stimulation und Tiere, die nicht taten empfangen Abbildung 2 zeigt . In den beiden apikalen und basilar Felder der Neuronen aus dem mPFC (Cg3) analysiert, führte taktile Stimulation der Proliferation von neuronalen Parameter. <img alt="Figur 1" src="/files/ftp_upload/50694/50694fig1.jpg" /> Fig. 1 ist. A. Repräsentative Foto eines Golgi-Cox gefärbten Pyramidenzelle aus der Schicht III der Bereich Cg3 in einer Ratte, die taktile Stimulation während der Entwicklung eingegangen. B. Repräsentative vergrößert (1.000 X) Foto von dendritischen Dornen auf den Terminal-Dendriten in der basilaris Bereich der Cg3 , das hellere Bild links ist für eine Ratte in der Kontrollgruppe und den dunkleren Bild auf der right ist von einer Ratte, die taktile Stimulation erhalten. <img alt="Figur 2" src="/files/ftp_upload/50694/50694fig2.jpg" /> 2. Illustrative Darstellung der durchschnittlichen apikalen dendritischen basilaris und Komplexität (Stacheln / &amp;mgr; m × &amp;mgr; m) für die Neuronen in der Cg3 Bereich von erwachsenen Ratten, die entweder empfangen taktile Stimulation während der Entwicklung oder nicht (* p &lt;0,01).

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Visualizing the Effects of a Positive Early Experience, Tactile Stimulation, on Dendritic Morphology and Synaptic Connectivity with Golgi-Cox Staining

Dieser Beitrag beschreibt die Verfahren für die taktile Stimulation von Rattenjungen und anschließende Golgi-Cox-Färbung der neuronalen Morphologie. Taktile Stimulation ist eine positive Erfahrung, die in der Perinatalperiode durch Streicheln Welpen mit einem Haushalts duster verwaltet wird. Golgi-Färbung cox ist ein zuverlässiges Verfahren ermöglicht die Visualisierung der gesamten Neuronen.

Visualisierung der Auswirkungen einer Früh Positive Erfahrung, taktile Stimulation, auf dendritischen Morphologie und synaptische Verbindungen mit Golgi-Cox Färbung

To generate longer-term changes in behavior, experiences must be producing stable changes in neuronal morphology and synaptic connectivity. Tactile ...

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Research

JoVE Journal

Neuroscience

17.9K Aufrufe.  University of Lethbridge.  Dieser Beitrag beschreibt die Verfahren für die taktile Stimulation von Rattenjungen und anschließende Golgi-Cox-Färbung der neuronalen Morphologie. Taktile Stimulation ist eine positive Erfahrung, die in der Perinatalperiode durch Streicheln Welpen mit einem Haushalts duster verwaltet wird. Golgi-Färbung cox ist ein zuverlässiges Verfahren ermöglicht die Visualisierung der gesamten Neuronen. 

Serie: Visualizing the Effects of a Positive Early Experience, Tactile Stimulation, on Dendritic Morphology and Synaptic Connectivity with Golgi-Cox Staining