Name: cultivation of mammalian cells using a single-use pneumatic bioreactor system
Uploaded: 2014-10-10T14:00:00.000+00:00
Duration: 11 min 42 s
Description: Watch this Scientific Journal Video about Cultivation of Mammalian Cells Using a Single-use Pneumatic Bioreactor System at JoVE.com

This project was support in part by Johns Hopkins University, Office of the Provost through the Gateway Science Initiative.

1. Login <ol><li> Schalten Sie den Bioreaktor. Klicken Sie irgendwo auf die Login-Seite zu öffnen. Wählen Sie Benutzernamen und Passwort eingeben und auf &quot;Login&quot;. </li></ol> 2. Kalibrierung <ol><li> Kalibrieren pH-Sensor (2-Punkt vor dem Autoklavieren). </li><li> Untersuchen pH-Sensor und bestätigen Sensorspitze mit Elektrolytlösung gefüllt. Bereiten Sie zwei Becher mit pH-Eichlösungen (Elektrolyt) pH 4 und pH 7 und verfügen eine Waschflasche mit destilliertem Wasser. </li><li> Verbinden Sie das Kabel mit dem pH-Wert pH-Sensor. Navigieren Sie zur Registerkarte &quot;Aktionen&quot; auf der Schnittstelle Hallo und klicken Sie auf &quot;Kalibrieren&quot;. Geben Sie Puffertemperatur im Temp-Feld Kalibrierungslösung. </li><li> Zeigen pH-Sensor in Puffer 1 (pH 4) und geben Sie in das Feld Wert &quot;Null&quot;. Warten Sie auf die Grafik, um zu stabilisieren und die auf den Button &quot;kalibrieren 1&quot;. Spülen Sie den pH-Sensor mit destilliertem Wasser. </li><li> Sensor in Puffer 2 (pH 7). Geben Sie Puffer2-Wert im Feld &quot;span&quot;. Warten Sie, Graphen zu stabilisieren und klicken Sie auf Kalibrieren 2-Taste. </li><li> Klicken Sie auf &quot;Speichern&quot; klicken Sie dann auf &quot;Schließen&quot;. </li><li> Kalibrieren Sie den gelösten Sauerstoff (DO)-Sensor. </li><li> Sicherstellen, dass die DO-Sensor hat, indem er auf das System für mehrere Stunden verbunden polarisiert worden. Navigieren Sie zur Registerkarte &quot;Aktionen&quot; auf der Schnittstelle Hallo, und klicken Sie kalibrieren. Klicken Sie auf die Schaltfläche &quot;DO A&quot;. </li><li> Trennen Sie die DO-Sensor und geben Sie 0 in das Feld &quot;Null&quot;. Warten Sie auf die Grafik, um zu stabilisieren und die klicken Sie auf &quot;Kalibrieren 1&quot;-Taste. </li><li> Schließen Sie den Sauerstoffsensor und geben Sie 100 in das Feld &quot;Span&quot;. Warten Sie auf die Grafik, um zu stabilisieren und die klicken Sie auf &quot;Kalibrieren 2&quot;-Taste. </li><li> Klicken Sie auf &quot;Speichern&quot; klicken Sie dann auf &quot;Schließen&quot;. </li></ol> 3. Autoklav und installieren Sensoren und Reagenzienbehälter <ol><li> Nach der Kalibrierung Ort Sensoren und Thermalbrunnen in autoLlave Beutel und Autoklaven für 30 min bei 121 ° C, 15 psi. </li><li> Desinfizieren Autoklaven Beutel mit 70% Isopropylalkohol (IPA) und Transfer Beutel zu biologischen Sicherheitsschrank (BSC). Entfernen Sie die äußeren Umhüllungen von Gefäß. </li><li> Desinfizieren Innenverpackung mit 70% IPA und Transportbehälter für die biologische Sicherheitswerkbank (BSC). Entfernen Innenverpackung und das Schiff zu inspizieren und Schläuche für Schäden während des Transports Schaden ein. </li><li> Installieren Sie den pH-Wert und Sauerstoffsensoren in den beiden vorderen Ports. Installieren Sie den Thermalbrunnen auf der linken hinteren Port. Öffnen Sie die Sensorkappe. </li><li> Führen Sie den Sensor durch den Sensor-Port. Fädeln Sie den Sensor fest in den Anschluss. </li><li> Transportbehälter von BSC. </li><li> Hängen Sie die DO und pH-Sensor-Kabel außerhalb des Gefäßes Hülse und überprüfen, dass nichts in der Hülse. Schieben Sie den Behälter in der Hülse, mit den Füßen zuerst. </li><li> Sorgfältig passen die Temperaturfühler in den Behälter Thermalbrunnen. Sicherzustellen, dass der Boden des Behälters liegt, an den Heizungen. </li><li> Entfernender Schlauch setzt aus ihren Taschen. Spiel Farbcodierung auf den Schlauch an die entsprechenden Anschlüsse und Pumpen auf dem Bioreaktor-Steuereinheit. </li><li> Installieren Sie die Hauptgasleitung durch Drücken der Stecker in die Gassteckdose. Installieren Sie die Mikrogasleitung durch Verdrehen der Stecker im Uhrzeigersinn in die Gassteckdose. Installieren Sie den Abluftfilter Schlauch: </li><li> Öffnen Sie die Filter Ofen. Sichere den Abluftfilter auf dem U-Kanal, so das Schlauch geht durch die beiden Haken an den Filter und aus dem Ofen. </li><li> Installieren Sie den Schlauch durch Kondensator Tasche in der Schlauchaufnahme. Schließen Sie die Tür. </li><li> Route zusätzlich Linien A und B, beide Medienleitungen, und die Ernte Linie hinter dem DO-Sensor und auf der Bank neben dem Bioreaktor-Steuereinheit. </li><li> Schließen Sie die Kabel an die DO und pH-Sensoren. </li></ol> 4. Zugabe von Medium und Micro-Träger <ol><li> Navigieren Sie zur Registerkarte &quot;Aktionen&quot; und klicken Sie auf &quot;Systemsteuerung Pumpen&quot; auf der Computer-Schnittstelle. </li><li> Bilden eine Sterile Verbindung zwischen einem unbenutzten Medium zusätzlich Linie (1 Orange-Band) und dem Medium Flasche / Beutel Quelle durch Schweißen der Rohrleitungen oder Armaturen mit Luer. </li><li> Klicken Sie auf den Schieberegler, um auf der Medienpumpe einzuschalten. Klicken Sie auf den Schieberegler, um die Medien wenden Pumpe aus nach Zugabe gewünschte Menge des Mediums. </li><li> Platzieren Mikrokügelchen in Ca 2 +, Mg 2 + freiem PBS für 3 h bei RT. </li><li> Waschperlen mehrmals mit Ca 2 +, Mg 2 + freiem PBS. </li><li> Autoklav für 15 Minuten bei 115 ° C, 15 psi. HINWEIS: In 3 g / l (Trockengewicht) in diesem Experiment. </li><li> Pumpe in Mikroträgern, die hydratisiert, gewaschen und in den Reaktor in der gleichen Weise wurde das Medium im Schritt 4.1 zugegeben wurden autoklaviert. </li></ol> 5. Die Gleichgewichtseinstellung und Ein-Punkt-Kalibrierung DO <ol><li> Stellen Sie die Regler auf Auto und geben Sie die gewünschten Sollwerte. Hier verwenden Agitation Set Point (SP) = 15 min, Temperatur SP = 37,0 ° C, pH = 7,2, DO = 100%. Warten Sie auf die parameter ins Gleichgewicht. </li><li> Sensor bestätigen ist vollständig polarisiert. Bestätigen DO Barwert hat sich stabilisiert. </li><li> Navigieren Sie zur Registerkarte &quot;Aktionen&quot; und klicken Sie auf &quot;Kalibrieren&quot;. Klicken Sie auf &quot;DO A&quot;, klicken Sie auf &quot;One Point&quot;. </li><li> Geben Sie &quot;100&quot; in das Feld &quot;Span&quot;. Klicken Sie auf &quot;Kalibrieren 1&quot;, klicken auf &quot;Speichern&quot; und klicken Sie auf &quot;Schließen&quot;: </li></ol> 6. Starten eines Run <ol><li> Navigieren Sie zur Registerkarte Aktionen. Klicken Sie auf &quot;Batch&quot;. Verwenden des On-Screen-Tastatur oder eine externe Tastatur an eine Batch-Namen eingeben 16 Zeichen oder weniger. </li><li> Klicken Sie auf die Schaltfläche Tastatur auf dem Bildschirm &quot;Hide&quot;. Klicken Sie auf &quot;Start Batch&quot; bestätigen Sie mit &quot;Start&quot; in der Überlagerung. </li></ol> 7. Impfen mit Zellen <ol><li> Bilden eine sterile Verbindung zwischen einem unbenutzten Medium zusätzlich Linie (1 Orange Band) und die Zelle Flasche / Beutel Quelle durch Schweißender Schlauch oder mit Hilfe der Luer Armaturen. </li><li> Installieren der Silikonabschnitt des Schlauchs in der Medienpumpe, so dass der Pfeil in Richtung der Rohrleitung zwischen der Pumpe und dem Behälter. </li><li> Überprüfen Schlauchklemme ist offen und seine verzweigte Schlauchklemme geschlossen ist. Klicken Sie auf den Schieberegler, um die Medienpumpe einzuschalten, und klicken Sie auf &quot;Aus&quot; nach der Zugabe von Zellen. </li><li> Navigieren Sie zur Registerkarte &quot;Aktionen&quot; und klicken Sie auf &quot;Systemsteuerung Pumpen&quot;. </li></ol> 8. Probenahme <ol><li> Nach Impfen und so oft wie gewünscht, um die Kultur zu überwachen, zeichnen Sie eine Probe aus der Kultur, in der folgenden Weise: </li><li> Navigieren Sie zur Registerkarte &quot;Aktionen&quot; und klicken Sie auf &quot;Probe nehmen&quot;. Legen Sie die Sampling-Schlauch in der Probenahmepumpe und nach den Anweisungen auf dem Bildschirm manipulieren die Sampling-Hahn. </li><li> Führen Sie mindestens eine tägliche mikroskopische Beobachtung und Zellzahl an diesen Proben. </li><li> Wenn die Zellen die gewünschte Dichte in diesem C erreichtase 1,2 x 10 6 Zellen / ml, infizieren die Zellen durch die Zugabe eines Virus-Inokulum. </li><li> Aseptisch das Inokulum in den 20-ml-Spritze, und verbinden Sie die Spritze mit einem der Ersatz zusätzlich Ports auf den Reaktor. Einführung des Inokulums in den Reaktor durch Druck auf den Spritzenkolben. </li><li> Weiter Probenahme und der Analyse der Kultur für die Adenovirus intrazellulären Partikelkonzentration. </li></ol>

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	<li>Freshney, R. I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Culture of Animal Cells A Manual of Basic Techniques and Specialized Applications. , (2010).</li><li>Healthcare, G. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Microcarrier+Cell+Culture+Principles+and+Methods.">Microcarrier Cell Culture Principles and Methods.</a> GE Healthcare Data File 18-1140-62. , (2005).</li><li>Simaria, A. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Allogeneic+cell+therapy+bioprocess+economics+and+optimization+Single-Use+cell+expansion+Technologies.">Allogeneic cell therapy bioprocess economics and optimization Single-Use cell expansion Technologies.</a> Biotechnol and Bioeng. 111 (1), 69-83 (2014).</li><li>Lee, B., Fang, D., Croughan, M., Carrondo, M., Paik, S. -. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Characterization+of+novel+pneumatic+mixing+for+single-use+bioreactor+application.">Characterization of novel pneumatic mixing for single-use bioreactor application.</a> BMC Proc. 5 (S8), O12 (2011).</li><li>Eibl, R., Eibl, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Disposable+bioreactors+in+cell+culture-based+upstream+processing.">Disposable bioreactors in cell culture-based upstream processing.</a> BioProcess Int. 7 (S1), 18-23 (2009).</li><li>Chaubard, J. F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Disposable+bioreactors+for+viral+vaccine+production+challenges+and+opportunities.">Disposable bioreactors for viral vaccine production challenges and opportunities.</a> Biopharm Int Supp. , (2010).</li><li>Croughan, M. S., Hamel, J. F., Wang, D. I. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Hydrodynamic+Effects+on+Animal+Cells+Grown+in+Microcarrier+Cultures.">Hydrodynamic Effects on Animal Cells Grown in Microcarrier Cultures.</a> Biotechnol and Bioeng. 95 (2), 295-305 (2006).</li><li>DePalma, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Single-use+Equipment+on+Cusp+of+Industrialization.">Single-use Equipment on Cusp of Industrialization.</a> Genet Eng Biotechnol News. 32 (1), (2012).</li><li>Baltz, R. H., Demain, A. L., Davies, J. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Manual of Industrial Microbiology and Biotechnology. , (2010).</li><li>Sousa, M. F., Giroux, D., Clemente, J., Lee, B., Carrondo, M. J., Alves, P. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Impact of Bioreactor Design on the Performance of Microcarrier Cultures. , (2012).</li></ol>

Autoren D. Giroux und Y. Hashimura sind Mitarbeiter von PBS Biotech, die Reagenzien und Instrumente in diesem Artikel verwendet wird, erzeugt.

Diese Einweg-Bioreaktor-System ist relativ einfach zu bedienen und bietet Echtzeit-Analysen für Reaktor Überwachung und Analyse. Es ist sehr gut für Säugetier und Insektenzellkultur mit Zelldichten erreicht über 30 Millionen Zellen / ml geeignet. Außer in diesem Bericht beschriebenen 11 A549-Zellen, haben wir SF-9 Insektenzellen im Bioreaktor als auch gewachsen. Die schonende Durchmischung durch den pneumatischen Luft Rad vorgesehen reduziert Zellschäden. Mehrere Schritte sind entscheidend bei der Einrichtung dieses Reaktors. Zuerst richtige Kalibrierung des pH und Sauerstoffsensoren ist für eine optimale Kontrolle der Kultur und für die Zugabe von Reagenzien, um den pH oder die Sauerstoff in dem System anzupassen. Zweitens muss das Reagenz und Saatgut Flaschen gefüllt werden, und die Luer-Anhänge in einer sterilen Umgebung, wie einem BSC. Sobald die Reagenzien sind aus der sterilen Umgebung bewegt wird, müssen die Anschlüsse an den Bioreaktor Zuleitungen mit Sorgfalt vorgenommen werden, um mikrobielle Kontamination zu vermeiden. <pclass = &quot;jove_content&quot;&gt; Während dieses Bioreaktorsystem funktioniert gut für Säuger und Insektenzelllinien ist es nicht für Bakterienkulturen entwickelt. Das System kann nicht die schnelle Vermischung und Sauerstoffversorgung, die für die Bakterienzellen erforderlich ist. Bakterielle Wachstum wird am besten in einem Rührkessel-Bioreaktor durchgeführt. Im Vergleich zu anderen Einzel Bioreaktoren für Säugetier oder Insektenzellkultur ist dieses System einfach zu bedienen, bietet ausreichend Daten für die Analyse von Läufen, und hat ähnliche oder bessere Zellwachstum als die anderen Einzelnutzung System das wir geprüft haben. Der Einweg-Bioreaktorsystem pneumatische hat das Potenzial, viele der Forschung und klinische Anwendungen in den Bereichen von Biotherapeutika, Impfstoffe zu treffen, Stammzellen, und personalisierte Medizin 4. Darüber hinaus ist die Flexibilität dieses Systems ermöglicht Batch, Fed-Batch-, Perfusions-und Transfektion bezogen Bioreaktor Anwendungen 5. Schließlich haben Einweg-Bioreaktorsystemen der potenTiAl auf die Bedürfnisse von großen industriellen Produktion gerecht zu werden und um Leitlinien und Empfehlungen der nationalen und internationalen Aufsichtsbehörden 6-10 einzuhalten.

Zellen, die in Suspension wachsen, Zellen, die als Zuschlagstoffe zu wachsen, und die Zellen, die mit einem Substrat verankert wachsen: Säugerzelllinien können in eine von drei Kategorien auf der Basis ihrer Wachstumseigenschaften klassifiziert werden. Obwohl die Luft-Rad-Bioreaktor, in diesem Video gezeigt, in der Lage, alle drei Arten von Zellen wachsen, wird dieses Video Verwendung des Bioreaktors zur Verankerung abhängigen Zellen auf Mikroträgern wachsen zu demonstrieren. Wobei die Zellen selbst sind das Produkt - verankerungsabhängigen Säugetierzellen können zum Zwecke der Herstellung von mehr Zellen gezüchtet werden. Beispielsweise menschlichem Knochenmark abgeleiteten mesenchymalen Stammzellen werden zur Zeit mit dem Zweck der Ernte der Zellen und deren Injektion in die erkrankte Gewebe kultiviert. Der pneumatische Bioreaktor in diesem Video gezeigt hat für die Herstellung solcher mesenchymaler Stammzellen für diese Anwendung als geeignet erwiesen (Serra et al., Persönliche Mitteilung, 2013). Anchorage dependent Säugetierzellen werden in der Regel gewachsen kleinen Maßstab in 2D Kulturgefäße wie Zellkulturplatten, Zellkulturflaschen oder Rollerflaschen, wo sie auf eine speziell behandelte Oberfläche 1 Wachstum zu halten. Wenn mehrere Zellen erwünscht sind, können die Platten oder Flaschen durch Verwendung von mehr oder größere Gefäße erweitert werden. Aber für kostengünstigere Kultivierung großer Mengen von verankerungsabhängigen Zellen, wodurch die Oberfläche für die Zellanheftung kann mit kleinen festen Kügelchen genannte Mikroträgern durchgeführt werden. In Abhängigkeit von den Bindungsmerkmalen der Zelle gibt verschiedene Arten von Mikroträger im Handel erhältlich, wie Dextran, ein Peptid oder Kollagen beschichtet ist. Mikroträger haben eine große Oberfläche im Verhältnis zum Volumen bietet eine größere Fläche für das Zellwachstum; und die Mikroträger in Suspension unter Rühren, das die Zellen zu hohen Dichten in Bioreaktorsystemen 2 kultiviert werden können beibehalten werden. Derzeit sind die Arten von bioreactors wo adhärenten Zellen auf Mikroträgern gewachsen sind Spinnerflaschen und Rührkessel-Systeme, die axiale Laufräder verwenden, um Aussetzung der Zelle resistenten Mikrounternehmen zu erhalten. Mehrere Faktoren sind wichtig für die erfolgreiche Kultivierung von Zellen, einschließlich der Sauerstoffspannung, Scherspannung, Oberflächenmatrix und Nährstoff-und Metabolit-Konzentrationen. Die Verwendung von Bioreaktoren ermöglicht die Echtzeitüberwachung der Wachstumsbedingungen und der Potential signifikant niedrigeren Produktionskosten 1. Es gibt verschiedene Designs Bioreaktor für in-vitro-Zellkultivierung einschließlich gerührten Suspension, rotierenden Wandgefäß, Hohlfaser-, Beutel-Bioreaktor auf einer Wippe Plattform und Wirbelschichtsysteme 3. Viele dieser Systeme präsentieren einzigartige Probleme für die Zellkultivierung und skalieren -up, wie hohe Kosten, Nährstoff Konzentrationsgradienten, hydrodynamische Scher, Zellaggregation und Schwierigkeiten bei der Probennahme, Überwachung und Steuerung cell Scale-up. Verschiedene adhärenten Zelllinien sind in der Herstellung von Viren, entweder bei der Herstellung von viralen Impfstoffen oder zur Herstellung viraler Vektoren für die Gentherapie-Anwendungen verwendet. In diesem Video mit dem einmaligen Gebrauch pneumatische (Luft-Rad) Bioreaktorsystem, zeigen wir die Kultur der Menschenlungenkarzinomzellen (A549) Zellen auf Mikroträgern für die Produktion eines onkolytischen Adenoviren. Der pneumatische Bioreaktor Design verwendet eine vertikale Bewegung Rad, das durch den Auftrieb des Gases in dem Boden des Bioreaktors gespült angetrieben wird. Diese sanfte Methode begrenzt Rühren hydrodynamische Scherkräfte, aber immer noch gewährleistet eine optimale Medium und Zell Mischen von 4. Im Vergleich zum Rührkessel, hat die pneumatische Reaktor geringer Wandschubspannung auch bei hoher Lautstärke Air-Rad-Bioreaktorsystemen (Abbildung 1). Im Gegensatz zu Rührkesselreaktoren, wird die vertikale Laufrad dieser einmaligen Gebrauch Reaktor durch einen Strom von Gasblasen innerhalb gedrehtDas Schiff, das für die schonende und gleichmäßige Durchmischung Medium (Abbildung 2) ermöglicht.

<table><tbody><tr><td>PBS 3&amp;nbsp;</td><td>PBS</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Single Use Assembly</td><td>PBS</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Human Lung Carcinoma Cells (A549)</td><td>ATCC</td><td>CCL-185</td><td></td></tr><tr><td>DMEM High Glucose Medium</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Fetal Bovine Serum</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Trypsin EDTA, 0.25%</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Cytodex 1 Microcarriers</td><td>GE</td><td>3781</td><td></td></tr><tr><td>Antifoam C</td><td>Sigma</td><td>A8011</td><td></td></tr></tbody></table>

cultivation of mammalian cells using a single-use pneumatic bioreactor system

Recent advances in mammalian, insect, and stem cell cultivation and scale-up have created tremendous opportunities for new therapeutics and personalized medicine innovations. However, translating these advances into therapeutic applications will require in vitro systems that allow for robust, flexible, and cost effective bioreactor systems. There are several bioreactor systems currently utilized in research and commercial settings; however, many of these systems are not optimal for establishing, expanding, and monitoring the growth of different cell types. The culture parameters most challenging to control in these systems include, minimizing hydrodynamic shear, preventing nutrient gradient formation, establishing uniform culture medium aeration, preventing microbial contamination, and monitoring and adjusting culture conditions in real-time. Using a pneumatic single-use bioreactor system, we demonstrate the assembly and operation of this novel bioreactor for mammalian cells grown on micro-carriers. This bioreactor system eliminates many of the challenges associated with currently available systems by minimizing hydrodynamic shear and nutrient gradient formation, and allowing for uniform culture medium aeration. Moreover, the bioreactor&#8217;s software allows for remote real-time monitoring and adjusting of the bioreactor run parameters. This bioreactor system also has tremendous potential for scale-up of adherent and suspension mammalian cells for production of a variety therapeutic proteins, monoclonal antibodies, stem cells, biosimilars, and vaccines.

In Abbildung 3 sind die Parameter für die Auslösung der Bioreaktorlauf gezeigt. Diese Abbildung zeigt den Bildschirm vor der Einstellung der Parameter Temperatur, Sauerstoffgehalt, pH-Wert und Agitation. Nachdem die Parameter festgelegt sind, werden die Laufparameter kontinuierlich überwacht und Einstellungen vorgenommen, um die erforderlichen Bedingungen aufrecht zu erhalten. Die Software erzeugt einen kontinuierlichen Anzeige, die für die einfache Identifizierung von Problemen ermöglicht. In diesem Experiment wurde unter Verwendung von 2,5 l DMEM mit 10% FBS, 250 ppm SAFC Anti-Schaum-C, 2 mM L-Glutamin und 3 g / l Mikroträger wird das System stabilisiert, so dass die Prozent Sauerstoff beträgt 50%, die Temperatur 37 ° C, und der pH-Wert beträgt 7,2. Der Reaktor wird mit A549-Zellen bei einer Konzentration von 7 x 10 4 Zellen / ml (oder 10 Zellen / Mikroträger) inokuliert. Die für diese Ausführung gewählten Parameter führte bei der Mehrzahl der Zellen innerhalb von 2 h (4) haften, um die Mikroträger. Nach 12 Stunden sind die Zellen Dämonentrier Zeichen der Abflachung und Ausbreitung auf der Mikroträgeroberfläche (5). Um 24 h, haben Mikroträger eine relativ gleichmäßige Verteilung der Zellen, ohne Mikro-Träger ohne Zellen und ohne große Klumpen von Zellen auf den Mikroträgern (Abbildung 6). Der Anteil der Mikroträger Kolonisierung durch A549-Zellen 75% bis 24 h und anschließend 90% (Figur 7). Die Zellen weiterhin exponentiell zu ca. 1 Million Zellen / ml nach 48 Stunden (Figur 8) wachsen. Nach Infektion mit einer Dosis von onkolytische Adenovirus (2 x 10 8 Virionen / ml) bei 50 Stunden, erhöht sich die Dichte auf 1,2 Millionen Zellen / ml und begann dann zu verringern, wie die lytische Infektion fortgeschritten ist. Es war ~ 10.000-fach Verstärkung des viralen Impfstoff. In vorherigen Experimenten haben wir festgestellt, dass die Überwachung und Anpassung Gasstrom ist für die Maximierung des Zellwachstums (unveröffentlichte Daten). Schnell wachsende Zellen können das System mit Sauerstoff abzureichern<html> die DO-Ebene zu Null abgesenkt. Während die Zellen weiter zu wachsen, war es bei einer viel langsameren Geschwindigkeit. Es ist wichtig, Überwachung und Anpassung der Sauerstofffluss, um die Zell Anforderungen während der logarithmischen Wachstumsphase zu erfüllen. Jeder Lauf kann für ein optimales Wachstum durch den Vergleich der pH-Wert, DO und Temperatur mit täglichen Zellzahlen analysiert werden. <img alt="Figur 1" src="/files/ftp_upload/52008/52008fig1highres.jpg" /> Abbildung 1. Fluiddynamik des Pneumatik-Bioreaktorsystem (PBS), verglichen mit einem Rührkessel-Bioreaktor Messung der Wandscherkräfte an verschiedenen Reaktorvolumen. <img alt="Figur 2" src="/files/ftp_upload/52008/52008fig2highres.jpg" /> Abbildung 2. Pneumatische Air-Rad-Reaktor Laufrad. <html> 52008 / 52008fig3highres.jpg &quot;/&gt; Abbildung 3. Pneumatische Luft Rad Software Screenshot von Parametern, den Bioreaktor Lauf zu initiieren. <img alt="Figur 4" src="/files/ftp_upload/52008/52008fig4highres.jpg" /> Abbildung 4. Micro-Träger Besiedlung mit A549-Zellen 2 h nach der Inokulation. (Durchschnittliche Mikroträger Durchmesser ~ 180 um.) <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/52008/52008fig4highres.jpg" target="_blank">Bitte klicken Sie hier, um eine größere Version dieser Figur zu sehen.</a> <img alt="Figur 5" src="/files/ftp_upload/52008/52008fig5highres.jpg" /> Figur 5. 12 Stunden nach der Initiation der Kultur werden die Zellen A549 Anbringen Abflachung und Verteilen auf den Mikroträgern.5highres.jpg &quot;target =&quot; _blank &quot;&gt; Bitte klicken Sie hier, um eine größere Version dieser Figur zu sehen. <img alt="Figur 6" src="/files/ftp_upload/52008/52008fig6highres.jpg" /> Abbildung 6. Micro-Träger mit den Zellen nach 24 h in Kultur beschichtet. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/52008/52008fig6highres.jpg" target="_blank">Bitte klicken Sie hier, um eine größere Version dieser Figur zu sehen.</a> <img alt="Figur 7" src="/files/ftp_upload/52008/52008fig7highres.jpg" /> Abbildung 7. Prozentualer Anteil der Mikroträger Kolonisierung durch A549-Zellen nach der Inokulation. <img alt="Figur 8" src="/files/ftp_upload/52008/52008fig8highres.jpg" /> Abbildung 8. Die Anzahl der lebensfähigen A549-Zellen in Kultur vor und nach Infektion mit adenoviruns. Beachten Sie, dass die Virusinfektion Schritt erfolgte bei 50 Stunden.

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Cultivation of Mammalian Cells Using a Single-use Pneumatic Bioreactor System

Using a pneumatic bioreactor, we demonstrate the assembly, operation, and performance of this single-use bioreactor system for the growth of mammalian cells.

Anbau von Säugetierzellen mit einem Einweg-Bioreaktorsystem Pneumatische

Recent advances in mammalian, insect, and stem cell cultivation and scale-up have created tremendous opportunities for new therapeutics and personalized ...

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Research

JoVE Journal

Bioengineering

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Serie: Cultivation of Mammalian Cells Using a Single-use Pneumatic Bioreactor System

Engineering Biological-Based Vascular Grafts Using a Pulsatile Bioreactor

Much effort has been devoted to develop and advance the methodology to regenerate functional small-diameter arterial bypasses. In the physiological environment, both mechanical and chemical stimulation are required to maintain the proper development and functionality of arterial vessels1,2.
Bioreactor culture systems developed by our group are designed to support vessel regeneration within a precisely controlled chemo-mechanical environment mimicking that of native vessels. Our bioreactor assembly and maintenance procedures are fairly simple and highly repeatable3,4. Smooth muscle cells (SMCs) are seeded onto a tubular polyglycolic acid (PGA) mesh that is threaded over compliant silicone tubing and cultured in the bioreactor with or without pulsatile stimulation for up to 12 weeks. There are four main attributes that distinguish our bioreactor from some predecessors. 1) Unlike other culture systems that simulate only the biochemical surrounding of native blood vessels, our bioreactor also creates a physiological pulsatile environment by applying cyclic radial strain to the vessels in culture. 2) Multiple engineered vessels can be cultured simultaneously under different mechanical conditions within a controlled chemical environment. 3) The bioreactor allows a mono layer of endothelial cells (EC) to be easily coated onto the luminal side of engineered vessels for animal implantation models. 4) Our bioreactor can also culture engineered vessels with different diameter size ranged from 1 mm to 3 mm, saving the effort to tailor each individual bioreactor to fit a specific diameter size. 
The engineered vessels cultured in our bioreactor resemble native blood vessels histologically to some degree. Cells in the vessel walls express mature SMC contractile markers such as smooth muscle myosin heavy chain (SMMHC)3. A substantial amount of collagen is deposited within the extracellular matrix, which is responsible for ultimate mechanical strength of the engineered vessels5. Biochemical analysis also indicates that collagen content of engineered vessels is comparable to that of native arteries6. Importantly, the pulsatile bioreactor has consistently regenerated vessels that exhibit mechanical properties that permit successful implantation experiments in animal models3,7. Additionally, this bioreactor can be further modified to allow real-time assessment and tracking of collagen remodeling over time, non-invasively, using a non-linear optical microscopy (NLOM)8. To conclude, this bioreactor should serve as an excellent platform to study the fundamental mechanisms that regulate the regeneration of functional small-diameter vascular grafts.

Our group has developed a bioreactor culture system that mimics the physiological pulsatile stresses of the cardiovascular system to regenerate implantable small-diameter vascular grafts.

Engineering Biological-Based Gefäßprothesen Mit einem Pulsatile Bioreaktor

Much effort has been devoted to develop and advance the methodology to regenerate functional small-diameter arterial bypasses. In the physiological ...

Forschung

Biotechnik

Chip-based Three-dimensional Cell Culture in Perfused Micro-bioreactors

We have developed a chip-based cell culture system for the three-dimensional cultivation of cells. The chip is typically manufactured from non-biodegradable polymers, e.g., polycarbonate or polymethyl methacrylate by micro injection molding, micro hot embossing or micro thermoforming. But, it can also be manufactured from bio-degradable polymers. Its overall dimensions are 0.7 1 x 20 x 20 x 0.7 1 mm (h x w x l). The main features of the chips used are either a grid of up to 1156 cubic micro-containers (cf-chip) each the size of 120-300 x 300 x 300 &mu; (h x w x l) or round recesses with diameters of 300 &mu; and a depth of 300 &mu; (r-chip). The scaffold can house 10 Mio. cells in a three-dimensional configuration. For an optimal nutrient and gas supply, the chip is inserted in a bioreactor housing. The bioreactor is part of a closed steril circulation loop that, in the simplest configuration, is additionaly comprised of a roller pump and a medium reservoir with a gas supply. The bioreactor can be run in perfusion, superfusion, or even a mixed operation mode. We have successfully cultivated cell lines as well as primary cells over periods of several weeks. For rat primary liver cells we could show a preservation of organotypic functions for more than 2 weeks. For hepatocellular carcinoma cell lines we could show the induction of liver specific genes not or only slightly expressed in standard monolayer culture. The system might also be useful as a stem cell cultivation system since first differentiation experiments with stem cell lines were promising.

We describe a chip-based platform for the three-dimensional cultivation of cells in micro-bioreactors. One chip can house up to 10 Mio. cells that can be cultivated under precisely defined conditions with regard to fluid flow, oxygen tension etc. in a sterile, closed circulation loop.

Chip-basierte dreidimensionale Zellkultur in perfundierten Micro-Bioreaktoren

We have developed a chip-based cell culture system for the three-dimensional cultivation of cells. The chip is typically manufactured from ...

Biologie

Microfluidic Picoliter Bioreactor for Microbial Single-cell Analysis: Fabrication, System Setup, and Operation

In this protocol the fabrication, experimental setup and basic operation of the recently introduced microfluidic picoliter bioreactor (PLBR) is described in detail. The PLBR can be utilized for the analysis of single bacteria and microcolonies to investigate biotechnological and microbiological related questions concerning, e.g.&#160;cell growth, morphology, stress response, and metabolite or protein production on single-cell level. The device features continuous media flow enabling constant environmental conditions for perturbation studies, but in addition allows fast medium changes as well as oscillating conditions to mimic any desired environmental situation. To fabricate the single use devices, a silicon wafer containing sub micrometer sized SU-8 structures served as the replication mold for rapid polydimethylsiloxane casting. Chips were cut, assembled, connected, and set up onto a high resolution and fully automated microscope suited for time-lapse imaging, a powerful tool for spatio-temporal cell analysis. Here, the biotechnological platform organism Corynebacterium glutamicum&#160;was seeded into the PLBR and cell growth and intracellular fluorescence were followed over several hours unraveling time dependent population heterogeneity on single-cell level, not possible with conventional analysis methods such as flow cytometry. Besides insights into device fabrication, furthermore, the preparation of the preculture, loading, trapping of bacteria, and the PLBR cultivation of single cells and colonies is demonstrated. These devices will add a new dimension in microbiological research to analyze time dependent phenomena of single bacteria under tight environmental control. Due to the simple and relatively short fabrication process the technology can be easily adapted at any microfluidics lab and simply tailored towards specific needs.

In this protocol the fabrication, setup and basic operation of a microfluidic picoliter bioreactor (PLBR) for single-cell analysis of prokaryotic microorganisms is introduced. Industrially relevant microorganisms were analyzed as proof of principle allowing insights into growth rate, morphology, and phenotypic heterogeneity over certain time periods, hardly possible with conventional methods.

In this protocol the fabrication, experimental setup and basic operation of the recently introduced microfluidic picoliter bioreactor (PLBR) is described ...

A Versatile Automated Platform for Micro-scale Cell Stimulation Experiments

Study of cells in culture (in vitro analysis) has provided important insight into complex biological systems. Conventional methods and equipment for in vitro analysis are well suited to study of large numbers of cells (&ge;105) in milliliter-scale volumes (&ge;0.1 ml). However, there are many instances in which it is necessary or desirable to scale down culture size to reduce consumption of the cells of interest and/or reagents required for their culture, stimulation, or processing. Unfortunately, conventional approaches do not support precise and reproducible manipulation of micro-scale cultures, and the microfluidics-based automated systems currently available are too complex and specialized for routine use by most laboratories. To address this problem, we have developed a simple and versatile technology platform for automated culture, stimulation, and recovery of small populations of cells (100 - 2,000 cells) in micro-scale volumes (1 - 20 &mu;l). The platform consists of a set of fibronectin-coated microcapillaries ("cell perfusion chambers"), within which micro-scale cultures are established, maintained, and stimulated; a digital microfluidics (DMF) device outfitted with "transfer" microcapillaries ("central hub"), which routes cells and reagents to and from the perfusion chambers; a high-precision syringe pump, which powers transport of materials between the perfusion chambers and the central hub; and an electronic interface that provides control over transport of materials, which is coordinated and automated via pre-determined scripts. As an example, we used the platform to facilitate study of transcriptional responses elicited in immune cells upon challenge with bacteria. Use of the platform enabled us to reduce consumption of cells and reagents, minimize experiment-to-experiment variability, and re-direct hands-on labor. Given the advantages that it confers, as well as its accessibility and versatility, our platform should find use in a wide variety of laboratories and applications, and prove especially useful in facilitating analysis of cells and stimuli that are available in only limited quantities.

We have developed an automated cell culture and interrogation platform for micro-scale cell stimulation experiments. The platform offers simple, versatile, and precise control in cultivating and stimulating small populations of cells, and recovering lysates for molecular analyses. The platform is well suited to studies that use precious cells and/or reagents.

Eine vielseitige automatisierte Plattform für Mikro-Skala Handy Stimulation Experimente

Study of cells in culture (in vitro analysis) has provided important insight into complex biological systems. Conventional methods and equipment for in ...

Nonhuman Primate Lung Decellularization and Recellularization Using a Specialized Large-organ Bioreactor

There are an insufficient number of lungs available to meet current and future organ transplantation needs. Bioartificial tissue regeneration is an attractive alternative to classic organ transplantation. This technology utilizes an organ&#39;s natural biological extracellular matrix (ECM) as a scaffold onto which autologous or stem/progenitor cells may be seeded and cultured in such a way that facilitates regeneration of the original tissue. The natural ECM is isolated by a process called decellularization. Decellularization is accomplished by treating tissues with a series of detergents, salts, and enzymes to achieve effective removal of cellular material while leaving the ECM intact. Studies conducted utilizing decellularization and subsequent recellularization of rodent lungs demonstrated marginal success in generating pulmonary-like tissue which is capable of gas exchange in vivo. While offering essential proof-of-concept, rodent models are not directly translatable to human use. Nonhuman primates (NHP) offer a more suitable model in which to investigate the use of bioartificial organ production for eventual clinical use.
The protocols for achieving complete decellularization of lungs acquired from the NHP rhesus macaque are presented. The resulting acellular lungs can be seeded with a variety of cells including mesenchymal stem cells and endothelial cells. The manuscript also describes the development of a bioreactor system in which cell-seeded macaque lungs can be cultured under conditions of mechanical stretch and strain provided by negative pressure ventilation as well as pulsatile perfusion through the vasculature; these forces are known to direct differentiation along pulmonary and endothelial lineages, respectively. Representative results of decellularization and cell seeding are provided.

Whole-organ decellularization produces natural biological scaffolds that may be used for regenerative medicine. The description of a nonhuman primate model of lung regeneration in which whole lungs are decellularized and then seeded with adult stem cells and endothelial cells in a bioreactor that facilitates vascular circulation and liquid media ventilation is presented.

There are an insufficient number of lungs available to meet current and future organ transplantation needs. Bioartificial tissue regeneration is an ...

Nutrient Regulation by Continuous Feeding for Large-scale Expansion of Mammalian Cells in Spheroids

In this demonstration, spheroids formed from the &#946;-TC6 insulinoma cell line were cultured as a model of manufacturing a mammalian islet cell product to demonstrate how regulating nutrient levels can improve cell yields. In previous studies, bioreactors facilitated increased culture volumes over static cultures, but no increase in cell yields were observed. Limitations in key nutrients such as glucose, which were consumed between batch feedings, can lead to limitations in cell expansion. Large fluctuations in glucose levels were observed, despite the increase in glucose concentrations in the media. The use of continuous feeding systems eliminated fluctuations in glucose levels, and improved cell growth rates when compared with batch fed static and SSB culture methods. Additional increases in growth rates were observed by adjusting the feed rate based on calculated nutrient consumption, which allowed the maintenance of physiological glucose over three weeks in culture. This method can also be adapted for other cell types.

Nutrient regulation using continuous growth adjusted feeding improves growth rates of mammalian cell spheroids compared to intermittent batch feeding for cultures in stirred suspension bioreactors. This study demonstrates the methods required for establishing simple adjusted rate fed cultures.

Nährstoff Verordnung durch kontinuierliche Zufuhr für eine groß angelegte Expansion von Mammalian Cells in Sphäroiden

In this demonstration, spheroids formed from the &#946;-TC6 insulinoma cell line were cultured as a model of manufacturing a mammalian islet cell product ...

Hollow Fiber Bioreactors for In Vivo-like Mammalian Tissue Culture

Tissue culture has been used for over 100 years to study cells and responses ex vivo. The convention of this technique is the growth of anchorage dependent cells on the 2-dimensional surface of tissue culture plastic. More recently, there is a growing body of data demonstrating more in vivo-like behaviors of cells grown in 3-dimensional culture systems. This manuscript describes in detail the set-up and operation of a hollow fiber bioreactor system for the in vivo-like culture of mammalian cells. The hollow fiber bioreactor system delivers media to the cells in a manner akin to the delivery of blood through the capillary networks in vivo. The system is designed to fit onto the shelf of a standard CO2 incubator and is simple enough to be set-up by any competent cell biologist with a good understanding of aseptic technique. The systems utility is demonstrated by culturing the hepatocarcinoma cell line HepG2/C3A for 7 days. Further to this and in line with other published reports on the functionality of cells grown in 3-dimensional culture systems the cells are shown to possess increased albumin production (an important hepatic function) when compared to standard 2-dimensional tissue culture.

Hollow Fiber Bioreactors for In Vivo-like Mammalian Tissue Culture

The functional behavior of cells in culture can be improved by culturing in more in vivo-like 3-dimensional culture environments16-21. This manuscript describes the set-up and operation of a hollow fiber bioreactor system for in vivo-like mammalian tissue culture.

Hohlfaser-Bioreaktoren für<em&gt; In Vivo</em&gt; -ähnlichen Mammalian Gewebekultur

Tissue culture has been used for over 100 years to study cells and responses ex vivo. The convention of this technique is the growth of anchorage ...

Use of High-Throughput Automated Microbioreactor System for Production of Model IgG1 in CHO Cells

Automated microscale bioreactors (15 mL) can be a useful tool for cell culture engineers. They facilitate the simultaneous execution of a wide variety of experimental conditions while minimizing potential process variability. Applications of this approach include: clone screening, temperature and pH shifts,&#160;media and supplement optimization. Furthermore, the small reactor volumes are conducive to large Design of Experiments that investigate a wide range of conditions. This allows upstream processes to be significantly optimized before scale-up where experimentation is more limited in scope due to time and economic constraints. Automated microscale bioreactor systems offer various advantages over traditional small scale cell culture units, such as shake flasks or spinner flasks. However, during pilot scale process development&#160;significant care must be taken to ensure that these advantages are realized. When run with care, the system can enable high level automation, can be programmed to run DOE&#39;s with a higher number of variables&#160;and can reduce sampling time when integrated with a nutrient analyzer or cell counter. Integration of the expert-derived heuristics presented here, with current automated microscale bioreactor experiments can minimize common pitfalls that hinder meaningful results. In the extreme, failure to adhere to the principles laid out here can lead to equipment damage that requires expensive repairs. Furthermore, the microbioreactor systems have small culture volumes&#160;making characterization of cell culture conditions difficult. The number and amount of samples taken in-process in batch mode culture is limited as operating volumes cannot fall below 10 mL. This method will discuss the benefits and drawbacks of microscale bioreactor systems.

A detailed protocol for the concurrent operation of 48 parallel cell cultures under varied conditions in a microbioreactor system is presented. Cell culture process, harvest and subsequent antibody titer analysis are described.

Einsatz von Hochdurchsatz-automatisierte Microbioreactor-System für die Produktion des Modells IgG1 in CHO-Zellen

Automated microscale bioreactors (15 mL) can be a useful tool for cell culture engineers. They facilitate the simultaneous execution of a wide variety of ...

Process Optimization using High Throughput Automated Micro-Bioreactors in Chinese Hamster Ovary Cell Cultivation

Optimization of bioprocesses to increase the yield of desired products is of importance in the biopharmaceutical industry. This can be achieved by strain selection and by developing bioprocess parameters. Shake flasks have been used for this purpose. They, however, lack the capability to control the process parameters such as pH and dissolved oxygen (DO). This limitation can be overcome with the help of an automated micro-bioreactor. These bioreactors mimic cultivation at a larger scale. One of the major advantages of this system is the integration of the Design of Experiment (DOE) in the software. This integration enables establishing a design where multiple process parameters can be varied simultaneously. The critical process parameters and optimum bioprocess conditions can be analyzed within the software. The focus of the work presented here is to introduce the user to the steps involved in process design in the software and incorporation of the DOE within the cultivation run.

Here, we present a detailed procedure to run a Design of Experiment in an automated micro-bioreactor followed by cell harvest and protein quantification using a Protein A column.

Prozessoptimierung mit automatisierten Mikro-Bioreaktoren mit hohem Durchsatz in der chinesischen Hamster-Ovarialzell-Kultivierung

Optimization of bioprocesses to increase the yield of desired products is of importance in the biopharmaceutical industry. This can be achieved by strain ...

Geschlossene Systemproduktion von adhärenten Zellen auf Basis von löslichen Microcarriern

Large-Scale Cell Production Based on GMP-Grade Dissolvable Porous Microcarriers

Researchers in the cell and gene therapy (CGT) industry have long faced a formidable challenge in the efficient and large-scale expansion of cells. To address the primary shortcomings of the two-dimensional (2D) planar culturing system, we innovatively developed an automated closed industrial scale cell production (ACISCP) platform based on a GMP-grade, dissolvable, and porous microcarrier for the 3D culture of adherent cells, including human mesenchymal stem/stromal cells (hMSCs), HEK293T cells, and Vero cells. To achieve large-scale expansion, a two-stage expansion was conducted with 5 L and 15 L stirred-tank bioreactors to yield 1.1 x 1010 hMSCs with an overall 128-fold expansion within 9 days. The cells were harvested by completely dissolving the microcarriers, concentrated, washed and formulated with a continuous-flow centrifuge-based cell processing system, and then aliquoted with a cell filling system. Compared with 2D planar culture, there are no significant differences in the quality of hMSCs harvested from 3D culture. We have also applied these dissolvable porous microcarriers to other popular cell types in the CGT sector; specifically, HEK293T cells and Vero cells have been cultivated to peak cell densities of 1.68 x 107 cells/mL and 1.08 x 107 cells/mL, respectively. This study provides a protocol for using a bioprocess engineering platform harnessing the characteristics of GMP-grade dissolvable microcarriers and advanced closed equipment to achieve the industrial-scale manufacturing of adherent cells.

Autor im Rampenlicht: Weiterentwicklung der Herstellung von Zelltherapien mit auflösbaren Microcarriern 

Here, we present a protocol to achieve the large-scale manufacturing of adherent cells through a fully closed system based on GMP-grade dissolvable microcarriers. The cultivation of human mesenchymal stem cells, HEK293T cells, and Vero cells was validated and met both quantity demands and quality criteria for the cell and gene therapy industry.

Großtechnische Zellproduktion auf Basis von auflösbaren porösen Mikroträgern in GMP-Qualität

Researchers in the cell and gene therapy (CGT) industry have long faced a formidable challenge in the efficient and large-scale expansion of cells. To ...