The authors would like to thank Dr. George Gittes for advice and expertise throughout this study. SSL was supported by an American Heart Association fellowship (11POST7330002). Further to this SSL and this study was supported by an NIDDK Mentored Research Scientist Development Award (DK096996) and by the Children&#8217;s Hospital of Pittsburgh.

HINWEIS: Die Universität von Pittsburgh Institutional Animal Care und Verwenden Committee genehmigt alle Experimente. 1. Herstellung von Ultraschall-Mikroinjektion Instrumente und Embryonen <ol><li> Up-Phase, Berg und Sonde (Abbildung 1) sowie chirurgische Instrumente (Abbildung 2) ein. Statt phosphatgepufferter Salzlösung (PBS) (pH 7,4) in einem 37 ° C Wärmebad. Füllen Mikroinjektionsnadel vollständig mit Mineralöl, mit 1 ml Spritze auf eine zweite flexible 25 G Nadel befestigt, über seine Basis. </li><li> Fix Nadel auf Drehhalterung Arm und leere Nadel des Mineralöllösung. Re-fill mit 2,5 ul TL Lösung. Sicherzustellen, daß keine Luftblasen innerhalb der Injektionsnadel vorhanden sind. Drehen Nadel Arm in Richtung Wand, weg von der Bühne. </li><li> Anesthetize die schwangere Mutter in der Anästhesie Kammer über eine kontinuierliche Infusion von Isofluran. Als Mutter ist bewusstlos, übertragen Sie die Narkose zu Nasenschlauch auf der c positioniertaudal Seite der Bühne und Ort Mutter in Rückenlage mit der Schnauze in Nasenschlauch, eine Fortsetzung einer vollständig betäubt Zustand ermöglichen. </li><li> Band Gliedmaßen in 45 ° Winkel oder mit Händen und Füßen ausgeruht und positioniert overtop ECG / Temperaturwächter Registerkarten. Wichtig ist, dass die schwangere Damm wird kontinuierlich überwacht, um sicherzustellen, dass die Anästhesie reicht und Salbe in angewandter für die Augen, um das Trocknen zu reduzieren. </li><li> Übernehmen Haarentfernung Produkt in Unterleib der Mutter, wischen Sie mit einem trockenen Wattestäbchen, und dann noch einmal mit 70% Ethanol-gesättigte Wattestäbchen, um überschüssiges Produkt und Haare zu entfernen. Achten Sie darauf, um Bauchhaut sauber aus aller Haare an der Stelle der Inzision (Abbildung 3). </li><li> Führen Sie eine Laparotomie auf der schwangeren Mutter mit feinen chirurgischen Pinzette und Schere. Achten Sie darauf, um zu vermeiden, schneiden keine großen Gefäße oder inneren Organen. Stellen Sie zuerst, gerade Schnittführung der Epidermis 1,5-2 cm über Vagina und weiter in Richtung Rippen für approximat geschnittenely 2-3 cm. Setzen Sie das Unterhautmembran, suchen Sie die Linea alba (&quot;weiße Linie&quot;) (Abbildung 3) und parallel zur anfänglichen Schnitt geschnitten, entlang der gleichen Länge, zu entlarven interne Eingeweide und Gebärmutter Säckchen. </li></ol> 2. Gewinnung von Embryonen <ol><li> Verwenden Sie 6-Zoll-Wattestäbchen, um Mutter und Embryonen zu manövrieren. Drücken Sie vorsichtig (nicht mit Gewalt) auf der Haut mit Applikator zum ersten Embryo aus Schnitt Öffnung manipulieren. Nach der Extraktion der ersten Embryo Sacculus, langsam und vorsichtig ziehen Sie den Rest der Uterushorn durch und auf Außen der Mutter. Vermeiden Sie es, Darm und andere Organe durch Einschnitt in dieser Phase. </li><li> Quantifizieren Embryonen und schonend zu platzieren linken Uterushorn wieder in die Mutter. Dann beginnen Platzierung der rechten Uterushorn wieder in die Mutter mit dem Embryo Sacculus weitesten von der Scheide auf dem Horn und nach unten bewegt. Setzen Sie diesen, bis nur noch zwei Embryonen bleiben ausgesetzt (FiAbbildung 4). Schließlich Position Embryonen in einer Säule über und parallel zur Schnittführung, wird bewusst nicht abzuschneiden Gebärmutterblutung. </li><li> Zeigen Mauerziegel und Position zwischen Armen und Körper sowie Beine und Schwanz. Stellen Sie sicher, dass die Ton-Oberflächen sind etwa in Höhe Laparotomieschnitts. Befeuchten Sie die gefenstert Petrischale mit 37 ° C PBS. </li><li> Fassen Erweiterung Zange mit der rechten Hand und gefenstert Petrischale mit der linken Hand (Fenster parallel Embryonen), und bringen geschlossenen Pinzette ~ 5 cm durch Fenster, von der Spitze der Petrischale. Offene Zange komplett ohne zu reißen Fenstergitter. </li><li> Manövrieren Sie die Hände über Embryonen und konzentrieren Blick auf die beiden Embryo Säckchen. Ohne (oder leicht) berühren Säckchen mit Fenster Vernetzung oder Zangen, schieben Sie sie durch den Schlitz und legen Petrischale auf Bauch der Mutter. Mit einer Pinzette noch erweitert, manipulieren gefenstert Mesh, um es auf beiden Seiten und am Boden jeder Embryo zu setzen (Abbildung 5 </strong&gt;) und aus der Schlitzöffnung ziehen Pinzette. </li><li> Als nächstes legen blauen Gummi Umfassungswand in Petrischale, ohne zu drücken oder zu verletzen Embryonen (Abbildung 6). Stellen Sie sicher, Mauerziegel fest Ausgleich Petrischale, Embryo und kautschukhaltige Wand. Schließlich füllen Petrischale mit 37 ° C PBS bis Embryonen vollständig eingetaucht ist (Abbildung 6), bei der Kontrolle auf Dichtheit bei gefenstert Vernetzung. </li></ol> 3. Injektionsverfahren <ol><li> Niederinjektionsstufe mit Mutter und Embryonen nach unten mit Z-Ebene Einstellknopf (Bild 1) und drehen Injektionsnadel und montieren Arm und richten Sie direkt mit Ultraschallsonde, mit Nadel ½ cm nach links und unter der Sondenspitze (Abbildung 7) . Schieben nadel Arm (nicht Nadel) 45 ° von der Sonde. Darauf achten, dass die Spitze der Nadel mit der Schale oder Ultraschallsonde getroffen. </li><li> Heben Injektionsstufe zurück zur ursprünglichen Höhe, mit Ultraschall pBademantel direkt über Embryonen Probe muss leicht eingetaucht werden und innerhalb von 3-4 mm der embryonalem Gewebe. Verwenden Sie X &amp; Y-Tisch Einstellknöpfe (Abbildung 8), um den Embryo / Mutter / Tischposition systematisch suchen Sie das Schlagen embryonalen Herzen ändern. </li><li> Direkt Zentrum von Ultraschall-Bildschirm beobachten ein schwarzes Zentrum Zielmarkierung gezeichnet (*). Suchen linken Herzkammer (empfohlen) oder den Vorhof über die Bühne Einstellknöpfe X &amp; Y (Bild 8) und dann nach oben oder unten die Bühne mit Drehknopf auf der Bühne, um Einspritzziel genau über der schwarzen Mittelmarkierung auf dem Ultraschallbildschirm zu positionieren. </li><li> Verwenden Sie X Bühne Einstellknopf, um Embryos nach rechts zu bewegen, aus der Ultraschall-Bildschirm. Repositionieren Mikroinjektionsnadel und wieder an seinen Platz zu bewaffnen, ½ cm von 90 ° zu der Ultraschallsonde (7). </li><li> Mit Hilfe der Mikroinjektion montieren Einstellknöpfe (9C-G), Position Nadel mit der Spitze deutlich almit der Mittenmarkierung igned. Einstellen Injektionswinkel (mit Noppen in 9C &amp; EG), und X, Y und Z Vektoren Mikronadel sicherzustellen Nadelspitze in der richtigen Ebene fokussiert. Einfahren Mikroinjektionsnadel mit ausschließlich den &quot;Einspritzen&quot; Knopf (9F), darauf achten, nicht zu anderen Dimensionen anzupassen. </li><li> Auch ausschließlicher Verwendung des X Feineinstellung der Bühne Knopf bewegen Embryo wieder unter die Sonde mit Ziel genau auf dem Mittelpunkt auf dem Ultraschallbildschirm. Sicherzustellen, dass die linke Herzkammer ist nun genau auf der gleichen X, Y und Z-Ebene. </li><li> Als nächstes wird mit nur der &quot;Injektion&quot; Knopfes auf der Mikroinjektion zu montieren, langsam stechen Embryo mit der Mikroinjektionsnadel und allmählich Spitze in die linke Herzkammer zu bringen. Injizieren Sie den vollen 2,5 ul TL-Lösung in die linke Herzkammer oder, bis die Leermeldung ertönt ein Signalton, indem &quot;leer&quot; und tippen Sie &quot;füllen&quot; einmal (2A &amp; B). Zu diesem ZeitpunktInjektions beobachten einen Schatten von der Spitze der Nadel, die der TL Eintritt in die Herzkammer (10) ist ausgeht. In umgekehrter Richtung, schnell zurückzuziehen Mikroinjektionsnadel Drehen des &quot;Einspritzen&quot; Knopf (9F) auf der Mikroinjektion zu montieren, wenn die Einspritzung abgeschlossen ist. </li><li> Weiter geht es zum nächsten Embryo und wiederholen Sie den Vorgang für die restlichen Embryonen nach dieser Reihe von Schritten, anschließend noch die letzten Embryonen wieder in der Mutterleib. Schalten Narkose Kammer Box und sanft bewegen Mutter hier für 15 Minuten vom Zeitpunkt der letzten Injektion. </li></ol> 4. Ernten Embryonen und Analyse <ol><li> Sacrifice Damm über Genickbruch. Erweitern Sie den Laparotomieschnitts leicht zu entfernen Uterushörner von der Mutter. Halten Sie die Embryonen im Uterus-sac. Zeigen Embryonen in PBS gekühlt. </li><li> Sezieren Embryonen aus Gebärmuttersack (ggf. sammeln Gewebe für die Genotypisierung) und setzen Sie die gesamte Embryo in 4% Paraformaldehyd (PFA) über Nacht, dann in 30% Saccharose über Nacht gefrier in Kryostaten Schnitt Medium. Dann schneiden Sie die Kryoschnitt und legen Sie sie auf Objektträger für die immunhistochemische Analyse. Optional können Gewebe für ganze Montage durch Dehydratisierung in 100% Methanol, nach Fixierung in 4% PFA. </li><li> Für immunhistochemische Analyse legen Sie die Gefrierschnitte in PBS, um die OCT entfernen. Dann blockieren die Schnitte mit 10% normalem Eselserum für 30 min. Dann fügen Sie PECAM primären Antikörper bei 1: 100 Verdünnung über Nacht bei 4 ° C. Am nächsten Tag, waschen Sie die Folien in PBT 3 mal für 10 Minuten jeweils, und fügen Sie Esel-anti Ratte 594 sekundäre und Inkubation für 1 h bei RT. Anmerkung: Dies ist eine sehr anspruchsvolle Technik zur Optimierung und Koordinierung von Ultraschall und Mikroinjektion erfordern. Es gibt eine sehr steile Lernkurve, um diese Technik verwandt und benötigt vier bis sechs Wochen von Mentor-Injektionen vor wird man kompetent. </li></ol>

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	<li>Abrahamson, D. R., Robert, B., Hyink, D. P., St John, P. L., Daniel, O. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Origins+and+formation+of+microvasculature+in+the+developing+kidney.">Origins and formation of microvasculature in the developing kidney.</a> Kidney international. Supplement. 67, S7-S11 (1998).</li><li>Sims-Lucas, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Endothelial+Progenitors+Exist+within+the+Kidney+and+Lung+Mesenchyme.">Endothelial Progenitors Exist within the Kidney and Lung Mesenchyme.</a> PloS one. 8 (6), e65993 (2013).</li><li>Dressler, G. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Advances+in+early+kidney+specification,+development+and+patterning.">Advances in early kidney specification, development and patterning.</a> Development. 136 (23), 3863-3874 (2009).</li><li>Costantini, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Genetic+controls+and+cellular+behaviors+in+branching+morphogenesis+of+the+renal+collecting+system.">Genetic controls and cellular behaviors in branching morphogenesis of the renal collecting system.</a> Wiley Interdiscip Rev Dev Biol. 1 (5), 693-713 (2012).</li><li>Costantini, F., Kopan , R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Patterning+a+complex+organ:+branching+morphogenesis+and+nephron+segmentation+in+kidney+development.">Patterning a complex organ: branching morphogenesis and nephron segmentation in kidney development.</a> Dev Cell. 18 (5), 698-712 (2010).</li><li>Das, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Stromal-epithelial+crosstalk+regulates+kidney+progenitor+cell+differentiation.">Stromal-epithelial crosstalk regulates kidney progenitor cell differentiation.</a> Nat Cell Biol. 15 (9), 1035-1044 (2013).</li><li>Rymer, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Renal+blood+flow+and+oxygenation+drive+nephron+progenitor+differentiation.">Renal blood flow and oxygenation drive nephron progenitor differentiation.</a> Am J Physiol Renal Physiol. , (2014).</li><li>Shah, S. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Embryonic+mouse+blood+flow+and+oxygen+correlate+with+early+pancreatic+differentiation.">Embryonic mouse blood flow and oxygen correlate with early pancreatic differentiation.</a> Developmental biology. 349 (2), 342-349 (2011).</li><li>Andres, A. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=EphB4+receptor+tyrosine+kinase+transgenic+mice+develop+glomerulopathies+reminiscent+of+aglomerular+vascular+shunts.">EphB4 receptor tyrosine kinase transgenic mice develop glomerulopathies reminiscent of aglomerular vascular shunts.</a> Mech Dev. 120 (4), 511-516 (2003).</li><li>Wagner, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=High-resolution+imaging+of+kidney+vascular+corrosion+casts+with+Nano-CT.">High-resolution imaging of kidney vascular corrosion casts with Nano-CT.</a> Microsc Microanal. 17 (2), 215-219 (2011).</li></ol>

The authors declare that they have no competing financial interests.

Mikroinjektionsanästhesie und Zeitrahmen Im Hinblick auf die Betäubung der Mutter, ist es wichtig, um den Luftstrom konstant (2-3 l / min) und bei niedrigen PSI halten. Die Strömung des Beruhigungs muß bei etwa 1,75-2 L / min gehalten werden. Gleichzeitig müssen Zeitrahmen, in dem die Injektionen erfolgen genau beobachtet und mit jedem Wurf gesteuert werden. Für jeden Wurf sollte das Injektionsverfahren unter 45 Minuten gehalten werden. Die Bedeutung dieser Frist ist ausschlaggebend f?...

Während der Embryonalentwicklung zwei diskrete, aber gleichzeitigen, vaskuläre Prozesse ab: Angiogenese, der Prozess, bei dem ein Schiff wächst aus einem großen bereits vorhandenen Behälter und Vaskulogenese, die eine Neubildung von Gefäßen aus Wohn endothelialen Vorläuferzellen 1,2 ist. Beziehungsweise die erstere auch mit dem Blutfluss, während die letzteren wird angenommen, dass in Abwesenheit von weitgehend übernehmen. Parallel zur Bildung von Blutgefäßen, beginnt ein zyklischer und dynamischer Prozess von Nierenvorläuferzellen Synthese, Proliferation und Differenzierung der embryonalen Tag 9.5 (E9.5) zu entfalten. An diesem Punkt der Ureterknospe (UB) dringt dorsal in das umgebende Mesenchym metanephrischen (MM), und wird fortgesetzt, bis der Geburt 3. Wiederholtes Verzweigung des UB in schnell Kondensieren metanephrischen Kappe Mesenchym beginnt somit die Bildung der funktionellen Einheiten der Niere, Nephron. Mit jeder neuen Generation von UB und nephron, werden die älteren Generationen in inneren kortikalen und medullären Regionen, in denen sie dann weitere Reifung und Differenzierung in erster Linie Gefäßreichen Umgebungen zu unterziehen verdrängt. Wie von Dressler et al. 3 hervorgeht, wird diese embryoProzess durch eine induktive Signalfällt, wie Übersprechen zwischen UB und M, und eine Vielzahl von extrazellulären Faktoren 3-6. Zwei vor kurzem untersuchten extrazellulären Faktoren innerhalb des Entwicklungs Bauchspeicheldrüse und Nieren gehören Sauerstoffdruck und Blutfluss 7,8. Letzteres wird in weiteren Einzelheiten nachstehend mit Bezug auf die Nierenentwicklung diskutiert. Um die induktive Rolle, Blutfluß potentiell spielt in Nephron Vorläuferzelldifferenzierung, sowie in anderen Organprozessen präzise und genaue Methoden der embryonalen Blutfluß Mapping belichten ist zwingend erforderlich. Alternative Methoden zur Messung des Blutflusses sind die Verschreibung von ultrasound Bildgebung und Harz wirft 9,10. Abschließend diese Modi wurde gezeigt, dass von Natur aus fehlen in ihrer Fähigkeit, gleichzeitig zu enthüllen zeitlichen und räumlichen Nebeneinander zwischen den Blutfluss und der Stammzelldifferenzierung. Harzabgüsse zum Beispiel geben Sie eine gültige Modell des Schiffes Strukturierung in adulten Geweben jedoch in unreifen Gefäße, wie zum Beispiel mit embryonalen Zeitpunkten, sind Gefäße stark unterentwickelt und undicht. Daher wirft Harz nicht innerhalb der winzigen, oft porös, Schiffe zu halten. Für diese offensichtliche Hindernisse, unter anderem, haben wir beschlossen, ultraschallgeführte in vivo intrakardiale embryonalen Tomaten Lektin (TL) Mikroinjektionen in unseren Untersuchungen der Nierenentwicklung zu integrieren. In diesem Verfahren verwenden wir eine Ultraschallsonde zum synchronen Führen eines montierten Mikro Nadel mit 2,5 ul TL Lösung gefüllt ist, in den linken Ventrikel von Mausembryonen an E11.5, E13.5, E15.5 und E17.5 Zeitpunkten. E17.5 Ist die letzte Entwicklungsalter, wenn die Nadeln sind nicht stark genug, um den weiter entwickelten Embryo eindringt. Die Vorteile dieser Methode der Mikroinjektion sind reichlich vorhanden. Ultraschall-gesteuerte Mikroinjektion ermöglicht präzise Positionierung einer Injektionsnadel in der embryonalen linken Herzkammer, passive und kontrollierte Vertreibung der Lösung in das schlagende Herz des Tieres, minimale Schäden an Herz und das umgebende Gewebe und die Vermeidung des plötzlichen Herzstillstand und Tod des Embryo vor der Ganzkörper-Durchblutung. Mit der Verwendung eines FITC-markierten TL wird jede perfundiert Vaskulatur der Marker entlang ihrer endothelialen apikalen Membran aufrechtzuerhalten. In Kombination mit Immunohistochemie unter Verwendung von PECAM (CD31, Platelet endothelial cell adhesion molecule) und verschiedene andere vaskuläre Marker sind wir in der Lage, klar zwischen perfundiert und un-durchbluteten Gefäße sowie charakterisieren anyaberrant Färbung der umgebenden Gewebe.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" width="981">
	<tbody>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:300px;">Name of Material/ Equipment</td>
			<td style="width:292px;">Company</td>
			<td style="width:164px;">Catalog Number</td>
			<td style="width:225px;">Comments/Description</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">DAPI</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>022M4004V</td>
			<td>concentration 1:5000</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">Pecam</td>
			<td>BD Biosciences</td>
			<td>553370</td>
			<td>concentration 1:100</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">FITC-Tomato Lectin</td>
			<td>Vector Laboratories</td>
			<td>FL-1321</td>
			<td>concentration 2.5&#181;L / embryo</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">Alexa Fluor-594 (Donkey Anti-Rat )</td>
			<td>Jackson Immunoresearch</td>
			<td>712-585-150</td>
			<td>concentration 1:200</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Microinjection Needle</td>
			<td>Origio Mid Atlantic Devices</td>
			<td>C060609</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">Mineral Oil</td>
			<td style="width:292px;">Fisher Scientific</td>
			<td style="width:164px;">BP26291</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">mL syringe</td>
			<td style="width:292px;">Fisher Scientific</td>
			<td style="width:164px;">03-377-20</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">&#160;Clay Blocks</td>
			<td style="width:292px;">Fisher Scientific</td>
			<td style="width:164px;">HR4-326</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">Surgical Tape</td>
			<td style="width:292px;">Fisher Scientific</td>
			<td style="width:164px;">18-999-380</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">PBS</td>
			<td style="width:292px;">Fisher Scientific</td>
			<td style="width:164px;">NC9763655</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">Hair Removal Product</td>
			<td style="width:292px;">Fisher Scientific</td>
			<td style="width:164px;">NC0132811</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">Surgical Scissors</td>
			<td style="width:292px;">Fine Science tools</td>
			<td style="width:164px;">14084-08</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">Fine Forceps</td>
			<td style="width:292px;">Fine Science tools</td>
			<td style="width:164px;">11064-07</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">&#160;Surgical Marking Pen</td>
			<td style="width:292px;">Fine Science tools</td>
			<td style="width:164px;">18000-30</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">&#160;Right angle forceps (for hysterectomy)</td>
			<td style="width:292px;">Fine Science tools</td>
			<td style="width:164px;">11151-10</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

in utero intra-cardiac tomato-lectin injections on mouse embryos to gauge renal blood flow

Die Bildung und die Durchblutung der Entwicklung von Nierenblutgefäße (abgesehen von Glomeruli) stark under. Als Gefäßsystem entwickelt über Angiogenese und Vaskulogenese (De-novo-Gefäßbildung), Perfusion Abbildungsverfahren wie Harzabgüsse, In-vivo-Ultraschallbildgebung und Mikrodissektion haben beim Nachweis der intimen Beziehungen zwischen beschränkt (das ist die Abzweigung der großen Gefäße ist) diese beiden Prozesse und Entwicklung von Nierenstrukturen im Embryo. Hier beschreiben wir das Verfahren der in utero intrakardialen Ultraschall-geführte FITC-markiertem Lektin Tomatenmikroinjektionen auf Mausembryonen, die Ontogenese der Nierendurchblutung zu messen. Tomaten-Lektin (TL) wurde während des gesamten Embryos und Nieren geerntet perfundiert. Nephron Vorfahren, Nephronstrukturen, Harnleiter Epithel und Gefäßsystem: für unterschiedliche Nierenstrukturen einschließlich Gewebe wurden zusammen gefärbt. Schon ab E13.5 großkalibrige Gefäße durchblutet jedoch PeripherieSchiffe blieb unperfused. Durch E15.5 und E17.5, kleinen peripheren Gefäße sowie Glomeruli begonnen, durchströmt wird. Dieses experimentelle Verfahren ist für die Untersuchung der Rolle der Vaskulatur und den Blutfluss während der embryonalen Entwicklung.

Gefäßbildung vorausgeht Fluss in Entwicklung von Nieren Ein Großteil der embryonalem Gewebe (einschließlich der Niere) enthält eine dichte Gefäß (beide unperfused und durchströmt), auch in frühen embryonalen Zeitpunkten. Um besseres Maß und Analyse des Blutflusses in der Entwicklung von Nieren wir verwendeten eine Methode der in utero embryonalen intraMikroInjektionen. Mit der Verwendung eines hochauflösenden Ultraschall die embryonalen Herzens bei E11.5 durch E17.5 identifizieren...

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In Utero Intra-cardiac Tomato-lectin Injections on Mouse Embryos to Gauge Renal Blood Flow

This manuscript describes a technique for visualization of the developing vasculature. Here we utilized in utero intra-cardiac FITC-labeled tomato lectin microinjections on mouse embryos. Using this technique, we delineate the perfused and unperfused vessels throughout the embryonic kidney.

In Utero Intraherz Tomato Lektin-Injektionen auf Maus Embryonen zu Nierendurchblutung Messer

The formation and perfusion of developing renal blood vessels (apart from glomeruli) are greatly understudied. As vasculature develops via angiogenesis ...

in-utero-intra-cardiac-tomato-lectin-injections-on-mouse-embryos-to

Research

JoVE Journal

Developmental Biology

In Utero Intra-cardiac Tomato-lectin Injections on Mouse Embryos to Gauge Renal Blood Flow

9.6K Aufrufe.  Children's Hospital of Pittsburgh of UPMC. This manuscript describes a technique for visualization of the developing vasculature. Here we utilized in utero intra-cardiac FITC-labeled tomato lectin microinjections on mouse embryos. Using this technique, we delineate the perfused and unperfused vessels throughout the embryonic kidney.