This work was supported by a Wisconsin Partnership Program New Investigator Award (ID 2832), a National Heart, Lung, Blood Institute R01 Grant (HL-068673) and a T32 training Grant (HL-110853). We thank Dr. Melina Kibbe&#8217;s group at Northwestern University for providing helpful information.

HINWEIS: Ethics Statement: Alle Verfahren entsprechen dem Leitfaden für die Pflege und Verwendung von Labortieren (National Academies Press, 8. Auflage, 2011), und Protokolle von der Institutional Animal Care und Verwenden Committee an der University of Wisconsin zugelassen. Alle Operationen wurden unter Isofluran-Narkose (durch Einatmen, Durchflussrate von 2 ml / min) durchgeführt, und alle Anstrengungen unternommen, um das Leiden zu minimieren. Die Tiere wurden in einer Kammer allmählich mit CO 2 gefüllt euthanasiert. 1. Narkoseeinleitung und Hautschnitt <ol><li> Verwenden männlichen C57BL / 6-Mäuse mit einem Alter von 12-16 Wochen und das Gewicht 23-28 g. Anesthetize das Tier durch Isofluran über einen geschlossenen Kreisnarkosegerät. Überprüfen Sie die Betäubung durch Kneifen seine Zehen. Tragen Sie etwas künstliche Tränen Salbe auf die Augen bis zur Trockenheit zu verhindern. </li><li> Platzieren Sie die Maus in Rückenlage mit dem linken Hinterbein leicht verschleppt und Kniegelenk slightly gebeugt. Rasieren Sie die Haare um den linken Oberschenkel Region und desinfizieren Sie die Haut mit Chlorhexidin, angewendet dreimal mit sterilen Wattestäbchen Applikatoren. Verwenden Sie eine heiße Perle Sterilisator, die Instrumente während der Operation sterilisiert zu halten. </li><li> Legen Sie eine sterilisierte Gaze Tuch über das linke Bein. Einen 1,5 cm gerader Längs Hautinzision links medialen Oberschenkel vom Kniegelenk auf der Leiste (1A). </li></ol> 2. Exposition der Femoralarterie und Zweige HINWEIS: 1B zeigt die Bruttogefäßanatomie in den Oberschenkel. Die oberflächliche Oberschenkelarterie (SFA) können durch ein Präpariermikroskop beobachtet, wenn die Inzision richtig entlang der Mittellinie des medialen Oberschenkel vorgenommen werden. <ol><li> Öffnen Sie die dünne Faszie über dem SFA mit feinen Pinzette und dann die Schleife die SFA mit 9-0 Nylonnaht. HINWEIS: Bei diesem Verfahren wird der N. femoralis ist einfach wie setzenide, aber die angrenzenden femoralis erfordert besondere Aufmerksamkeit, weil ihre Wand ist so dünn, dass es leicht perforiert und blutet. Der Schlüssel Technik ist es, auf die Arterie selbst zu konzentrieren; solange der Präparation wird in der Nähe der Arterie durchgeführt wird, ist jede versehentliche Venenschäden vermeidbar. </li><li> Sobald die SFA geschlungen, halten Sie die Naht mit Moskito Pinzette und ziehen Sie sie leicht nach unten. Dieses Manöver macht weitere Präparation leichter, aber um eine Beschädigung der Arterie nicht zu kräftig ziehen. </li><li> Weiter sezieren die Arterie proximal zu entlarven und Schleife die A. femoralis communis (CFA) mit 9-0 Nylonnaht. HINWEIS: Normalerweise Schleifen des CFA an einem Punkt distal der A. epigastrica (1B) ist ausreichend für Drahteinführung. Halten Sie die CFA Fadenschleife mit Moskito Pinzette auf die gleiche Weise. </li><li> Ziehen Sie den CFA Fadenschleife nach oben und der SFA Fadenschleife nach unten, um die Gabelung der SFA und tiefe Oberschenkelarterie (EDA) zu entdecken. Das EDA, der Hauptzweig der CFA,fließt in den Oberschenkelmuskel (1B). HINWEIS: Der Draht wird später von der DFA eingefügt werden. </li><li> Schleife das EDA mit besonderer Vorsicht, da die angrenzenden Vene unter der Arterie verheddert. Im Falle von Blutungen aus der Vene ist ein 30- bis 60 sec einfache Kompression mit Gaze Regel ausreichend, um die Hämostase zu erzeugen. </li><li> Sobald der DFA mit 9-0 Nylonnaht geschleift, sicherzustellen, dass alle drei Nahtschleifen sind an die richtige Position (Abbildung 2A). </li><li> Fahren Sie mit der Dissektion der DFA distal, um die Arterie an einer Stelle so weit wie möglich von der Gabelung zu ligieren. Geschnitten zusätzliche Naht lassen aber eine bestimmte Länge, so dass die beiden Enden mit Moskito Pinzette, die die Herstellung von DFA Drahteinsetzlöcher leichter Stabilisierung statt. </li></ol> 3. Erstellen von Draht Injury <ol><li> Legen Draht über DFA <ol><li> Belastung der CFA, SFA und DFA Nähten, um eine temporäre hemostat etablieren. </li><li> Machen Sie ein kleines Loch in der DFEin mit Mikroschere. Stecken Sie die Spitzen der gebogenen Mikropinzetten, um das Loch groß genug für einen Draht mit einem 0,015 Zoll Durchmesser erweitern (2B zeigt den Größenunterschied zwischen der Arterie und dem Draht). <ol><li> Bevor Sie ein Loch in der DFA, lösen Sie die CFA Fadenschleife und sanft klemmen / Drücken Sie die DFA mehrmals mit stumpfen bestückte Mikropinzetten. Dieses Manöver erweitert die arteriellen Durchmesser bemerkenswert, um die Drahteinführung zu erleichtern. Befeuchten Sie den Draht sorgfältig mit PBS ist auch wichtig für eine reibungslose Einsetzen. </li><li> Wenn ein Loch in der DFA, nicht beschneiden die Arterienwand, aber einen kleinen V-förmigen Spalt und nehmen Sie die Klappe mit spitzen Mikropinzetten für Manipulation. </li></ol></li><li> Führen Sie den Draht durch die angemessen-dilatative Loch auf der DFA. Den Draht vorsichtig voran in Richtung der Darmbeinarterie, während das Lösen der Fadenschleife um das CFA. 5-8 mm reicht aus, um alle CFA Länge in den meisten Fällen zu decken (2C </strong&gt;). Haben Sie das Kabel mit Gewalt einlegen nicht als ein arterieller Perforation führt in der Regel zum Verlust der Maus. Die Verkürzung der Draht bis ca. 15 mm in der Länge hilft bei der Handhabung. </li></ol></li><li> Lassen Draht innen für 1 Min <ol><li> Nach dem Einlegen der Kabel an die optimale Länge, lassen Sie es für 1 Minute, um die Arterienwand überfordern. Befeuchten Sie den Draht und Arterien mit PBS, um ein Austrocknen zu verhindern. Eine weitere 9-0 Nylonnaht können rund um die DFA proximal der Drahteinführungspunkt während dieser Wartezeit platziert werden. Dieser Faden wird später verwendet werden, um das Loch auf der DFA nach Entfernen des Drahtes zu schließen. </li></ol></li><li> Abrufen Draht und Fortsetzen der Durchblutung <ol><li> Halten Sie den Draht mit Schiff Kanülierung Pinzetten, und ziehen Sie sie vorsichtig zurück; der Draht sollte problemlos abgerufen werden. Keinen Widerstand, in der Regel durch die Einhaltung des Drahtes an der Arterienwand, zu überwinden, das Zurückziehen des Drahtes mit leichter Rotation hilfreich. Auch hier könnte eine kraftvolle Manöver in der Tierverlust führen. </li><li> Aach das Abrufen der Draht, ligieren die DFA am Verzweigungspunkt mit 9-0 Nylonnaht. Ligieren Sie nicht zu nahe an der Gabelung, die den Blutabfluss an die SFA in Frage stellen würde. </li><li> Lösen Sie die SFA und CFA Nahtschleifen, um den normalen Blutfluss wieder aufzunehmen. Beachten Sie, dass die CFA wird durch Drahteinführung (2D) gut ausgebaut. </li></ol></li></ol> 4. Hautverschluss und postoperative Pflege <ol><li> Steuer blutet. Minor Nässen durch einfache Kompression gestoppt werden; einige große arterielle Blutungen wird Stiche mit einem 11-0 Nylonfaden erfordern. Diese vernäht Arterien schließlich in Arterienverschluss führen. </li><li> Schließen Sie die Haut mit Hautklammergeräte (in der Regel 3-4 Heftklammern) gewickelt. Halten Sie die Wundfläche durch Anwendung Chlorhexidin chirurgische Lösung sterilisiert. </li><li> Bewerben postoperative Behandlungen. Steuern Sie den Schmerz der Maus mit subkutanen Injektionen von Buprenorphin. Halten Sie die Maus auf die Erwärmung pad bis sie suf wiederreichend Bewusstsein Brustlage zu halten. Haus in einem sauberen Käfig ohne Begleitung anderer Tiere, bis sie vollständig erholt. </li></ol>

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	<li>Dzau, V. J., Braun-Dullaeus, R. C., Sedding, D. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Vascular+proliferation+and+atherosclerosis:+new+perspectives+and+therapeutic+strategies.">Vascular proliferation and atherosclerosis: new perspectives and therapeutic strategies.</a> Nat Med. 8 (11), 1249-1256 (2002).</li><li>Hui, D. Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Intimal+hyperplasia+in+murine+models.">Intimal hyperplasia in murine models.</a> Curr Drug Targets. 9 (3), 251-260 (2008).</li><li>Ferns, G. A., Avades, T. Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+mechanisms+of+coronary+restenosis:+insights+from+experimental+models.">The mechanisms of coronary restenosis: insights from experimental models.</a> Int J Exp Pathol. 81 (2), 63-88 (2000).</li><li>Sata, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+mouse+model+of+vascular+injury+that+induces+rapid+onset+of+medial+cell+apoptosis+followed+by+reproducible+neointimal+hyperplasia.">A mouse model of vascular injury that induces rapid onset of medial cell apoptosis followed by reproducible neointimal hyperplasia.</a> J Mol Cell Cardiol. 32 (11), 2097-2104 (2000).</li><li>Xu, Q. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mouse+models+of+arteriosclerosis:+from+arterial+injuries+to+vascular+grafts.">Mouse models of arteriosclerosis: from arterial injuries to vascular grafts.</a> Am J Pathol. 165 (1), 1-10 (2004).</li><li>Lv, L., Meng, Q., Ye, M., Wang, P., Xue, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=STAT4+deficiency+protects+against+neointima+formation+following+arterial+injury+in+mice.">STAT4 deficiency protects against neointima formation following arterial injury in mice.</a> J Mol Cell Cardiol. 74C, 284-294 (2014).</li><li>Zhu, B., Kuhel, D. G., Witte, D. P., Hui, D. Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Apolipoprotein+E+inhibits+neointimal+hyperplasia+after+arterial+injury+in+mice.">Apolipoprotein E inhibits neointimal hyperplasia after arterial injury in mice.</a> Am J Pathol. 157 (6), 1839-1848 (2000).</li><li>Fu, Y., Duru, E. A., Davies, M. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effect+of+metabolic+syndrome+on+the+response+to+arterial+injury.">Effect of metabolic syndrome on the response to arterial injury.</a> J Surg Res. , (2014).</li><li>Kuhel, D. G., Zhu, B., Witte, D. P., Hui, D. Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Distinction+in+genetic+determinants+for+injury-induced+neointimal+hyperplasia+and+diet-induced+atherosclerosis+in+inbred+mice.">Distinction in genetic determinants for injury-induced neointimal hyperplasia and diet-induced atherosclerosis in inbred mice.</a> Arterioscler Thromb Vasc Biol. 22 (6), 955-960 (2002).</li><li>Cooley, B. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mouse+strain+differential+neointimal+response+in+vein+grafts+and+wire-injured+arteries.">Mouse strain differential neointimal response in vein grafts and wire-injured arteries.</a> Circ J. 71 (10), 1649-1652 (2007).</li><li>Ishigami, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Deficiency+of+CuZn+superoxide+dismutase+promotes+inflammation+and+alters+medial+structure+following+vascular+injury.">Deficiency of CuZn superoxide dismutase promotes inflammation and alters medial structure following vascular injury.</a> J Atheroscler Thromb. 18 (11), 1009-1017 (2011).</li></ol>

The authors declare no competing financial interests.

Der Draht Verletzungsverfahren ist für alle Stämme von Mäusen, solange ihre anatomischen Strukturen sind ähnlich. 4 In diesem Dokument verwendet man männliche C57BL / 6-Mäuse mit einem Alter von 12-16 Wochen. Wie wir von unseren Vorstudien gelernt, sind die Oberschenkelarterien von Mäusen, die jünger als 10 Wochen oft so klein, dass Drahteinführung ist eine ziemliche Herausforderung. Andererseits ist Drahteinsetzlöcher in Mäusen, die älter als 16 Wochen technisch einfacher, aber neigt dazu, in var...

In the era of expanded application of endovascular treatments for various cardiovascular diseases, restenosis after angioplasty is one of the major problems for patients undergoing such treatments. Damage to the vascular endothelium at the time of angioplasty, in concert with the atherosclerotic background, induces excessive smooth muscle cell proliferation in the medial layer, resulting in neointimal hyperplasia.1,2 A viable animal model that recapitulates post-angioplasty neointimal hyperplasia is, thus, important not only for the investigation of disease mechanisms but also for the development of effective therapeutics to treat this pathology.
Mice represent an excellent model animal to recapitulate neointimal hyperplasia for the following reasons: the genetic backgrounds of experimental mice are well established; a wide variety of genetically-modified strains are available;2 obtaining littermates of the same background is easy; and the cost of the animals is relatively low. Arterial ligation model and wire injury model are the two most common mouse models of mechanically-induced neointimal hyperplasia. The arterial ligation model is easy to create, but physiologically dissimilar to the actual angioplasty procedure. The wire injury model closely mimics actual angioplasty procedures but is technically difficult due to the small size of mouse arteries.2,3 Sata et al. first described a wire injury method for mouse femoral arteries based on the anatomical structure of the vasculature and the use of proper-sized flexible wire. Utilizing this technique, they succeeded in reproducibly inducing neointimal hyperplasia in various strains of mice.4
Although femoral wire injury is a well-established model, some of the technical aspects of the technique are highly challenging compared to other models such as ligation.5 The purpose of this paper is to describe our mouse wire injury model procedures in detail, which is a modified version of Sata&#8217;s original method. We have made two main modifications: 1) Looping only the arteries, and 2) No lidocaine use.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" width="644">
	<tbody>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Name of Reagent/ Equipment</td>
			<td style="width:101px;">Company</td>
			<td style="width:119px;">Catalog Number</td>
			<td style="width:208px;">Comments/Description</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Fixed Core Wire Guide</td>
			<td style="width:101px;">Cook</td>
			<td style="width:119px;">G02426</td>
			<td>Diameter 0.015 inch, Straight</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Dilation Forceps</td>
			<td style="width:101px;">Roboz</td>
			<td style="width:119px;">RS-4927</td>
			<td>Curved, blunt tips</td>
		</tr>
		<tr height="63">
			<td height="63" style="height:63px;width:216px;">Dumont Tweesers #5</td>
			<td style="width:101px;">World Precision Instruments</td>
			<td style="width:119px;">14095</td>
			<td>Straight, sharp tips</td>
		</tr>
		<tr height="63">
			<td height="63" style="height:63px;width:216px;">Dumont Vessel Cannulation Forceps</td>
			<td style="width:101px;">World Precision Instruments</td>
			<td style="width:119px;">503373</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="63">
			<td height="63" style="height:63px;width:216px;">McPherson-Vannas Scissors</td>
			<td style="width:101px;">World Precision Instruments</td>
			<td style="width:119px;">501234</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="63">
			<td height="63" style="height:63px;width:216px;">Mosquito Forceps</td>
			<td style="width:101px;">World Precision Instruments</td>
			<td style="width:119px;">501291</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Ethilon Nylon Suture 9-0</td>
			<td style="width:101px;">Ethicon</td>
			<td style="width:119px;">7717G</td>
			<td>9-0, Black Nylon Monofilament</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:216px;">Micro AROSuture, Sterile 11-0, 70 Microns, MET Point</td>
			<td style="width:101px;">AROSurgical</td>
			<td style="width:119px;">VT4A00N07</td>
			<td>11-0, Black Nylon Monofilament</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:216px;">3M Precise Multi-Shot DS Disposable Skin Stapler</td>
			<td style="width:101px;">3M</td>
			<td style="width:119px;">DS-25</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

a murine model of arterial restenosis: technical aspects of femoral wire injury

Kardiovaskuläre Erkrankungen durch Arteriosklerose ist die häufigste Todesursache in der entwickelten Welt. Einengung des Gefäßlumens, aufgrund atherosklerotischen Plaque Entwicklung oder dem Aufbrechen der etablierten Plaques, unterbricht den normalen Blutfluss führt zu verschiedenen Begleiterkrankungen wie Herzinfarkt und Schlaganfall. In der Klinik endovaskulären Verfahren wie Angioplastie werden üblicherweise durchgeführt, um den Hohlraum wieder zu öffnen. Jedoch haben diese Behandlungen unvermeidbar beschädigt die Gefßwand sowie die Gefäßendothel Auslösen eines übermäßigen Heilungsreaktion und die Entwicklung einer neointimalen Plaque, die in das Lumen verursacht Gefäß Restenose (Wiederverengung) erstreckt. Restenose bleibt eine Hauptursache für Versagen endovaskulären Behandlungen für Atherosklerose. Somit sind vorklinischen Tiermodellen von Restenose für die Untersuchung der pathophysiologischen Mechanismen sowie Translationsansätze Gefäßinterventionen von entscheidender Bedeutung. Unter mehreren murinen Experimental Modellen wird Femoralarterie Drahtverletzung gilt als die am besten geeignete für die Untersuchung der Restenose nach Angioplastie akzeptiert, weil es ähnelt der Angioplastie-Verfahren, die sowohl Endothel und Gefäßwand verletzt. , Haben viele Forscher jedoch Schwierigkeiten Verwendung dieses Modell aufgrund seiner hohen technischen Schwierigkeitsgrad. Dies ist vor allem, weil ein Metalldraht muss in die Oberschenkelarterie, die etwa dreimal geringer als die Draht eingeführt werden, um eine ausreichende Verletzungen erzeugen prominente Neointima induzieren. Hier beschreiben wir die wesentlichen chirurgischen Details, die wichtigsten technischen Schwierigkeiten dieses Modells effektiv zu überwinden. Indem Sie die vorgestellten Verfahren, die Durchführung der Maus Femoralarterie Drahtverletzung wird einfacher. Sobald vertraut, kann das gesamte Verfahren innerhalb von 20 Minuten abgeschlossen werden.

Vier Wochen nach der Operation, zu ernten die Draht verletzten Oberschenkelarterie und machen einen Paraffinblock Probe, um die Neointimabildung analysieren. Induzieren Narkose wie oben beschrieben. Sofort Öffnen Sie die Kiste und legen Sie eine 20-Gauge-Butterfly-Nadel in die linke Herzkammer. Schließen Sie die Leitung an einer Infusionsflasche. Führen Perfusionsfixierung über Tropfinfusion von PBS, gefolgt von 4% Paraformaldehyd (in der Regel 10 bis 20 ml, jeweils). Die Infusionsflasche wird ca. 140 cm h?...

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A Murine Model of Arterial Restenosis: Technical Aspects of Femoral Wire Injury

Die Maus Femoralarterie Drahtverletzungsmodell der Restenose ist technisch anspruchsvoll. In diesem Protokoll zeigen wir die wichtigsten technischen Details unerlässlich für die erfolgreiche Durchführung von Draht Verletzung konsequente Neointima für Studien der Restenose zu induzieren.

Ein Mausmodell von arterieller Restenose: Technische Aspekte der Femoral Draht Injury

Cardiovascular disease caused by atherosclerosis is the leading cause of death in the developed world. Narrowing of the vessel lumen, due to ...

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19.9K Aufrufe.  University of Wisconsin School of Medicine and Public Health.  Die Maus Femoralarterie Drahtverletzungsmodell der Restenose ist technisch anspruchsvoll. In diesem Protokoll zeigen wir die wichtigsten technischen Details unerlässlich für die erfolgreiche Durchführung von Draht Verletzung konsequente Neointima für Studien der Restenose zu induzieren. 