This work was supported by a Wisconsin Partnership Program New Investigator Award (ID 2832), a National Heart, Lung, Blood Institute R01 Grant (HL-068673) and a T32 training Grant (HL-110853). We thank Dr. Melina Kibbe&#8217;s group at Northwestern University for providing helpful information.

Declaração de Ética: NOTA: Todos os procedimentos estão em conformidade com o Manual sobre Cuidados e Uso de Animais de Laboratório (National Academies Press, 8ª edição, 2011), e os protocolos aprovados pelo Comitê de Uso e Cuidado Animal Institucional da Universidade de Wisconsin. Todas as cirurgias foram realizadas sob anestesia isoflurano (através de inalação, taxa de fluxo de 2 ml / min), e foram feitos todos os esforços para minimizar o sofrimento. Os animais foram sacrificados numa câmara gradualmente cheio com CO 2. 1. A indução da anestesia geral e incisão na pele <ol><li> Use macho C57BL / 6 com idade de 12-16 semanas, com peso de 23-28 g. Anestesiar o animal por isoflurano através de um aparelho anestésico-circuito fechado. Confirme anesthetization adequada por beliscar seu dedo do pé. Aplique um pouco de pomada lágrimas artificiais nos olhos para evitar o ressecamento. </li><li> Posicione o mouse em decúbito dorsal com o membro posterior esquerdo ligeiramente sequestrado e do joelho sl conjuntaightly flexionados. Raspar o cabelo em torno da região da coxa esquerda e desinfectar a pele com clorexidina, aplicado três vezes usando algodão estéril aplicadores derrubado. Use um esterilizador talão quente para manter os instrumentos esterilizados durante a cirurgia. </li><li> Coloque uma cortina de gaze esterilizada sobre a perna esquerda. Faça, uma incisão na pele longitudinal 1,5 centímetros em linha reta na coxa medial esquerdo da articulação do joelho até a virilha (Figura 1A). </li></ol> 2. Exposição da artéria femoral e Ramos NOTA: A Figura 1B mostra a anatomia vascular grave na coxa superior. A artéria femoral superficial (SFA) pode ser observado através de um microscópio de dissecação, quando a incisão na pele é adequadamente feita ao longo da linha média da coxa medial. <ol><li> Abra-se a fáscia fina que recobre a SFA com uma pinça fina e, em seguida, enrole o SFA com 9-0 nylon sutura. NOTA: Neste processo, o nervo femoral é facilmente colocar comoide, mas a veia femoral adjacente requer muita atenção, pois sua parede é tão fina que facilmente perfura e sangra. A técnica chave é se concentrar na própria artéria; enquanto a dissecção é realizada perto da artéria, veia qualquer dano acidental é evitável. </li><li> Uma vez que a SFA é enrolado, segure o fio de sutura com uma pinça mosquito e puxe-o levemente para baixo. Essa manobra torna ainda mais dissecção mais fácil, mas para evitar danificar a artéria não puxar com muita força. </li><li> Continue dissecção da artéria proximal para expor e laço da artéria femoral comum (CFA) com 9-0 nylon sutura. NOTA: Normalmente, o looping CFA em um ponto distal à artéria epigástrica (Figura 1B) é suficiente para a inserção do fio. Segure o laço de sutura CFA com uma pinça mosquito da mesma forma. </li><li> Puxe o laço de sutura CFA para cima e para o laço de sutura SFA para baixo para descobrir a bifurcação da SFA e artéria femoral profunda (DFA). O DFA, o principal ramo do CFA,vai para o músculo da coxa (Figura 1B). NOTA: O fio será inserido a partir da DFA mais tarde. </li><li> Passe o DFA com cuidado extra porque a veia adjacente está embaraçada por baixo da artéria. Em caso de hemorragias a partir da veia, um de 30 a 60 segundos de compressão simples com gaze é geralmente suficiente para produzir a hemostasia. </li><li> Uma vez que o DFA é intercalado com 9-0 nylon sutura, certifique-se todos os três laços de sutura estão em suas posições corretas (Figura 2A). </li><li> Prossiga com a dissecção da DFA distal ao ligar a artéria em um ponto, na medida do possível a partir da bifurcação. Cortar sutura extra, mas deixe um determinado comprimento de modo que as duas extremidades pode ser realizada com uma pinça de mosquito, que estabilizam o DFA tornando mais fácil a inserção do fio. </li></ol> 3. Criação de Lesão Fio <ol><li> Insira fio via DFA <ol><li> Coe as suturas CFA, SFA, e DFA para estabelecer uma pinça hemostática temporária. </li><li> Faça um pequeno furo no DFUm com microtesoura. Inserir as pontas das micropinças curvas para dilatar o orifício suficientemente grande para um fio com um diâmetro de 0,015 polegadas (Figura 2B demonstra a diferença de tamanho entre a artéria e o fio). <ol><li> Antes de fazer um buraco na DFA, afrouxar o laço de sutura CFA e gentilmente apertar / apertar o DFA várias vezes com micropinças maçantes de ponta. Esta manobra aumenta o diâmetro arterial notavelmente para facilitar a inserção do fio. Humedecer o fio cuidadosamente com PBS também é importante para uma inserção suave. </li><li> Ao fazer um buraco na DFA, não colhe a parede arterial, mas fazer uma pequena alfinetada em forma de V e beliscar a aba com micropinças de ponta aguçada para a manipulação. </li></ol></li><li> Insira o fio através do furo adequadamente-dilatada no DFA. Gentilmente avançar o fio em direção à artéria ilíaca, enquanto soltando o laço de sutura em torno do CFA. 5-8 mm é suficiente para cobrir todo o comprimento CFA na maioria dos casos (Figura 2C </strong&gt;). Não insira o fio com força como uma perfuração arterial geralmente resulta em perda do mouse. Encurtar o arame para cerca de 15 mm de comprimento ajuda com a manipulação. </li></ol></li><li> Deixar fio dentro de um Min <ol><li> Depois de inserir o fio com o comprimento óptimo, deixá-lo durante 1 min para esticar a parede arterial. Umedeça o fio e artérias com PBS para evitar a secagem. Outra sutura de nylon 9-0 pode ser colocada em torno da DFA proximal ao ponto de inserção de fio durante este tempo de espera. Esta sutura será utilizado mais tarde para fechar o buraco no DFA após a remoção do fio. </li></ol></li><li> Recuperar fio e retomar o fluxo de sangue <ol><li> Segure o fio com uma pinça de punção embarcação, e puxe-o para trás suavemente; o fio deve ser recuperada sem problemas. Para ultrapassar qualquer resistência, geralmente causado pela adesão do arame para a parede arterial, puxando para trás o fio com uma rotação suave é útil. Mais uma vez, uma manobra forçada poderia resultar em perda de animal. </li><li> AD epois de recuperar o fio, ligar o DFA no ponto de bifurcação com sutura de nylon 9-0. Não ligar muito próximo à bifurcação, o que comprometeria a saída de sangue para o SFA. </li><li> Solte os laços de sutura SFA e CFA para retomar o fluxo de sangue normal. Note-se que o CFA é bem expandido pela inserção de fio (Figura 2D). </li></ol></li></ol> 4. Pele Encerramento e Cuidados Pós-Operatórios <ol><li> Controle sangra. Exsudação Minor pode ser interrompido por compressão simples; algumas grandes hemorragias arteriais vai precisar de pontos com uma sutura 11-0 nylon. Estas artérias suturadas, acabará por resultar em oclusão arterial. </li><li> Feche a pele ferida com grampeadores da pele (geralmente 3-4 grampos). Mantenha a área ferida esterilizado através da aplicação de solução cirúrgica clorexidina. </li><li> Aplicar tratamentos pós-cirúrgicos. Controlar a dor do mouse com injeções subcutâneas de buprenorfina. Mantenha o mouse sobre a almofada de aquecimento até que recuperou sufficiente de consciência para manter decúbito esternal. Casa-lo em uma gaiola limpa sem a companhia de outros animais até que esteja totalmente recuperado. </li></ol>

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	<li>Dzau, V. J., Braun-Dullaeus, R. C., Sedding, D. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Vascular+proliferation+and+atherosclerosis:+new+perspectives+and+therapeutic+strategies.">Vascular proliferation and atherosclerosis: new perspectives and therapeutic strategies.</a> Nat Med. 8 (11), 1249-1256 (2002).</li><li>Hui, D. Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Intimal+hyperplasia+in+murine+models.">Intimal hyperplasia in murine models.</a> Curr Drug Targets. 9 (3), 251-260 (2008).</li><li>Ferns, G. A., Avades, T. Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+mechanisms+of+coronary+restenosis:+insights+from+experimental+models.">The mechanisms of coronary restenosis: insights from experimental models.</a> Int J Exp Pathol. 81 (2), 63-88 (2000).</li><li>Sata, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+mouse+model+of+vascular+injury+that+induces+rapid+onset+of+medial+cell+apoptosis+followed+by+reproducible+neointimal+hyperplasia.">A mouse model of vascular injury that induces rapid onset of medial cell apoptosis followed by reproducible neointimal hyperplasia.</a> J Mol Cell Cardiol. 32 (11), 2097-2104 (2000).</li><li>Xu, Q. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mouse+models+of+arteriosclerosis:+from+arterial+injuries+to+vascular+grafts.">Mouse models of arteriosclerosis: from arterial injuries to vascular grafts.</a> Am J Pathol. 165 (1), 1-10 (2004).</li><li>Lv, L., Meng, Q., Ye, M., Wang, P., Xue, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=STAT4+deficiency+protects+against+neointima+formation+following+arterial+injury+in+mice.">STAT4 deficiency protects against neointima formation following arterial injury in mice.</a> J Mol Cell Cardiol. 74C, 284-294 (2014).</li><li>Zhu, B., Kuhel, D. G., Witte, D. P., Hui, D. Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Apolipoprotein+E+inhibits+neointimal+hyperplasia+after+arterial+injury+in+mice.">Apolipoprotein E inhibits neointimal hyperplasia after arterial injury in mice.</a> Am J Pathol. 157 (6), 1839-1848 (2000).</li><li>Fu, Y., Duru, E. A., Davies, M. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effect+of+metabolic+syndrome+on+the+response+to+arterial+injury.">Effect of metabolic syndrome on the response to arterial injury.</a> J Surg Res. , (2014).</li><li>Kuhel, D. G., Zhu, B., Witte, D. P., Hui, D. Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Distinction+in+genetic+determinants+for+injury-induced+neointimal+hyperplasia+and+diet-induced+atherosclerosis+in+inbred+mice.">Distinction in genetic determinants for injury-induced neointimal hyperplasia and diet-induced atherosclerosis in inbred mice.</a> Arterioscler Thromb Vasc Biol. 22 (6), 955-960 (2002).</li><li>Cooley, B. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mouse+strain+differential+neointimal+response+in+vein+grafts+and+wire-injured+arteries.">Mouse strain differential neointimal response in vein grafts and wire-injured arteries.</a> Circ J. 71 (10), 1649-1652 (2007).</li><li>Ishigami, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Deficiency+of+CuZn+superoxide+dismutase+promotes+inflammation+and+alters+medial+structure+following+vascular+injury.">Deficiency of CuZn superoxide dismutase promotes inflammation and alters medial structure following vascular injury.</a> J Atheroscler Thromb. 18 (11), 1009-1017 (2011).</li></ol>

The authors declare no competing financial interests.

O procedimento de lesão fio é aplicável a todas as linhagens de camundongos, desde que as suas estruturas anatômicas são semelhantes. 4 Neste trabalho, utilizou-se do sexo masculino camundongos C57BL / 6 com uma idade de 12-16 semanas. Como aprendemos a partir de nossos estudos preliminares, as artérias femorais de ratos mais jovens de 10 semanas são muitas vezes tão pequeno que a inserção do fio é bastante desafiador. Por outro lado, a inserção do fio nos ratos mais velhos que 16 semanas, é tec...

In the era of expanded application of endovascular treatments for various cardiovascular diseases, restenosis after angioplasty is one of the major problems for patients undergoing such treatments. Damage to the vascular endothelium at the time of angioplasty, in concert with the atherosclerotic background, induces excessive smooth muscle cell proliferation in the medial layer, resulting in neointimal hyperplasia.1,2 A viable animal model that recapitulates post-angioplasty neointimal hyperplasia is, thus, important not only for the investigation of disease mechanisms but also for the development of effective therapeutics to treat this pathology.
Mice represent an excellent model animal to recapitulate neointimal hyperplasia for the following reasons: the genetic backgrounds of experimental mice are well established; a wide variety of genetically-modified strains are available;2 obtaining littermates of the same background is easy; and the cost of the animals is relatively low. Arterial ligation model and wire injury model are the two most common mouse models of mechanically-induced neointimal hyperplasia. The arterial ligation model is easy to create, but physiologically dissimilar to the actual angioplasty procedure. The wire injury model closely mimics actual angioplasty procedures but is technically difficult due to the small size of mouse arteries.2,3 Sata et al. first described a wire injury method for mouse femoral arteries based on the anatomical structure of the vasculature and the use of proper-sized flexible wire. Utilizing this technique, they succeeded in reproducibly inducing neointimal hyperplasia in various strains of mice.4
Although femoral wire injury is a well-established model, some of the technical aspects of the technique are highly challenging compared to other models such as ligation.5 The purpose of this paper is to describe our mouse wire injury model procedures in detail, which is a modified version of Sata&#8217;s original method. We have made two main modifications: 1) Looping only the arteries, and 2) No lidocaine use.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" width="644">
	<tbody>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Name of Reagent/ Equipment</td>
			<td style="width:101px;">Company</td>
			<td style="width:119px;">Catalog Number</td>
			<td style="width:208px;">Comments/Description</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Fixed Core Wire Guide</td>
			<td style="width:101px;">Cook</td>
			<td style="width:119px;">G02426</td>
			<td>Diameter 0.015 inch, Straight</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Dilation Forceps</td>
			<td style="width:101px;">Roboz</td>
			<td style="width:119px;">RS-4927</td>
			<td>Curved, blunt tips</td>
		</tr>
		<tr height="63">
			<td height="63" style="height:63px;width:216px;">Dumont Tweesers #5</td>
			<td style="width:101px;">World Precision Instruments</td>
			<td style="width:119px;">14095</td>
			<td>Straight, sharp tips</td>
		</tr>
		<tr height="63">
			<td height="63" style="height:63px;width:216px;">Dumont Vessel Cannulation Forceps</td>
			<td style="width:101px;">World Precision Instruments</td>
			<td style="width:119px;">503373</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="63">
			<td height="63" style="height:63px;width:216px;">McPherson-Vannas Scissors</td>
			<td style="width:101px;">World Precision Instruments</td>
			<td style="width:119px;">501234</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="63">
			<td height="63" style="height:63px;width:216px;">Mosquito Forceps</td>
			<td style="width:101px;">World Precision Instruments</td>
			<td style="width:119px;">501291</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Ethilon Nylon Suture 9-0</td>
			<td style="width:101px;">Ethicon</td>
			<td style="width:119px;">7717G</td>
			<td>9-0, Black Nylon Monofilament</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:216px;">Micro AROSuture, Sterile 11-0, 70 Microns, MET Point</td>
			<td style="width:101px;">AROSurgical</td>
			<td style="width:119px;">VT4A00N07</td>
			<td>11-0, Black Nylon Monofilament</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:216px;">3M Precise Multi-Shot DS Disposable Skin Stapler</td>
			<td style="width:101px;">3M</td>
			<td style="width:119px;">DS-25</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

a murine model of arterial restenosis: technical aspects of femoral wire injury

A doença cardiovascular causadas por aterosclerose é a principal causa de morte no mundo desenvolvido. O estreitamento da luz do vaso, devido ao desenvolvimento da placa aterosclerótica ou a ruptura de placas estabelecidos, interrompe o fluxo normal do sangue levando a várias morbidades, tais como infarto do miocárdio e acidente vascular cerebral. Na clínica procedimentos endovasculares, como a angioplastia são comumente realizados para reabrir o lúmen. No entanto, estes tratamentos inevitavelmente danificar a parede do vaso, bem como o endotélio vascular, desencadeando uma resposta de cicatrização excessiva e o desenvolvimento de uma placa que se estende da neointima no lúmen fazendo com que a restenose do vaso (re-estreitamento). A reestenose permanece uma das principais causas do fracasso dos tratamentos endovasculares para aterosclerose. Assim, os modelos animais pré-clínicos de reestenose são de vital importância para a investigação dos mecanismos fisiopatológicos, bem como translacional abordagens para intervenções vasculares. Entre vários experime murinomodelos ntal, lesão fio artéria femoral é amplamente aceito como o mais adequado para estudos de reestenose pós-angioplastia, pois se assemelha ao procedimento de angioplastia que prejudica a ambos endotélio e da parede do vaso. No entanto, muitos pesquisadores têm dificuldade em utilizar este modelo devido ao seu alto grau de dificuldade técnica. Isto é primeiramente porque um fio de metal tem de ser inserido dentro da artéria femoral, o que é cerca de três vezes mais fino do que o fio, para gerar suficiente para induzir lesão neoíntima proeminente. Aqui, descrevemos os detalhes cirúrgicos essenciais para efetivamente superar as maiores dificuldades técnicas deste modelo. Seguindo os procedimentos apresentados, realizando a lesão de arame artéria femoral de rato torna-se mais fácil. Uma vez familiarizado, todo o processo pode ser concluído no prazo de 20 min.

Quatro semanas após a cirurgia, dissecção da artéria femoral feridos fios e fazer espécime Bloco A parafina para analisar a formação neointima. Induzir anestesia geral, tal como descrito acima. Abra o peito imediatamente e insira uma de calibre 20 borboleta agulha para o ventrículo esquerdo. Ligue a linha para um frasco de infusão. Realizam a fixação de perfusão através de infusão de gotas de PBS, seguido por paraformaldeído a 4% (geralmente 10-20 mL, cada um). O frasco de infusão é colocado ce...

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A Murine Model of Arterial Restenosis: Technical Aspects of Femoral Wire Injury

O mouse modelo de lesão fio artéria femoral de reestenose é tecnicamente desafiador. Neste protocolo, mostrar os principais detalhes técnicos essencial para a realização com êxito lesão fio para induzir neoï¿½tima consistente para estudos de reestenose.

Um modelo murino de Arterial Restenosis: Aspectos Técnicos do Femoral Injury Fio

Cardiovascular disease caused by atherosclerosis is the leading cause of death in the developed world. Narrowing of the vessel lumen, due to ...

a-murine-model-arterial-restenosis-technical-aspects-femoral-wire

Research

JoVE Journal

Medicine

19.9K visualizações.  University of Wisconsin School of Medicine and Public Health.  O mouse modelo de lesão fio artéria femoral de reestenose é tecnicamente desafiador. Neste protocolo, mostrar os principais detalhes técnicos essencial para a realização com êxito lesão fio para induzir neoï¿½tima consistente para estudos de reestenose. 